一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法及其在检测谷胱甘肽的应用与流程

本发明涉及生物检测，具体为一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法及其在检测谷胱甘肽的应用。

背景技术：

1、谷胱甘肽（gsh）是生物体内抗氧化防御系统中最重要的小分子活性寡肽，是细胞内含量最丰富的低分子量硫醇，具有重要的抗氧化作用和整合解毒作用。人类体内gsh水平异常与癌症、帕金森、艾滋病、阿尔茨海默病、心血管疾病等有关。因此，人体内gsh的准确检测在疾病诊断领域具有重要的意义。目前，常用的检测gsh的方法包括高效液相色谱法、荧光光谱检测法、电化学分析法和比色检测法等，然而上述大部分方法都有一定的缺点，如耗时长、需要大量样品、昂贵的仪器设备和专业技术人员等。而比色法因具有成本低、反应快和可通过肉眼观察等特点而受到研究人员广泛关注。谷胱甘肽比色检测主要基于其对3,3',5,5'-四甲基联苯胺（tetramethylbenzidine, tmb）催化氧化的抑制作用。

2、然而，催化上述反应的天然酶存在稳定性差、成本高、催化活性对环境条件敏感等缺点，限制了其广泛应用。具有类似酶活性的纳米材料（纳米酶），其因具备高稳定性、低成本和易制备等优点，近年来成为研究的热点。如今，纳米酶研究面临的主要问题包括1）与天然酶相比，纳米酶的类酶催化活性还相对较低；2）纳米酶的种类有限。因此，提高已有纳米酶活性、新型纳米酶及其应用的研究依然是纳米酶领域的重点。

3、五氧化二钒（v2o5）作为过渡金属氧化物，因其具有自然含量丰富，生产制备成本低；具有丰富的氧化还原化学、光学和电学性质等特点，被广泛的在储能设备电极材料等领域研究。最近，v2o5被报道具有模拟酶活性。然而大多数基于v2o5的模拟酶特性开展的检测，通常涉及到h2o2，这是一种破坏性的氧化剂。基于不需要h2o2参与的v2o5的类氧化酶特性开展的生物分子检测目前开展的研究较少。因此，基于v2o5的类氧化物酶活性，开发一种简单高效的比色检测gsh的方法是十分有必要的。

技术实现思路

1、本发明提供一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法及其在检测谷胱甘肽的应用，以达到制备五氧化二钒类氧化物酶，开发一种简单高效的比色检测gsh的方法的目的。

2、本发明提供的一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法包括以下步骤：

3、步骤一：将nh4vo3、聚醚p123和hcl溶于无水乙醇中；

4、步骤二：溶剂热处理；

5、步骤三：收集黑色沉淀物；

6、步骤四：用蒸馏水洗涤数次；

7、步骤五：烘干；

8、步骤六：将收集的沉淀物加热。

9、进一步的，所述的 nh4vo3为0.9 g、聚醚p123（mw=5800）为1.5 g 、 hcl（2 mol·l−1）体积6 ml和无水乙醇90 ml。

10、进一步的，所述溶剂热处理为200°c条件下24 h。

11、进一步的，所述的加热为置于300°c马弗炉加热2 h。

12、进一步的，基于上述制备方法得到的五氧化二钒类氧化物酶建立gsh分析检测方法：在v2o5（30 μg·ml-1, 100 μl）、tmb（0.4 mm, 100 μl）与hac-naac缓冲液（50 mm,ph=2.5, 1600 μl）组成的检测体系中，加入200 μl含gsh溶液，反应溶液在35℃水浴中孵育40min，记录检测溶液在300 nm-800 nm之间的紫外可见吸收光谱，并记录在652 nm处的吸光度值；根据实验数据，绘制了吸光度与gsh浓度的对应曲线；在1–30 μm范围内，呈线性相关，检出限为0.28 μm。

13、本发明提供一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，并将制备的五氧化二钒应用于人体血清中谷胱甘肽的检测，成本低，具有良好的精确度和稳定性。

技术特征：

1.一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，其特征在于，所述的nh4vo3为0.9 g、聚醚p123（mw=5800）为1.5 g 、 hcl（2 mol·l−1）体积6 ml和无水乙醇90ml。

3.根据权利要求1所述的一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，其特征在于，所述溶剂热处理为200°c条件下24 h。

4.根据权利要求1所述的一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，其特征在于，所述的加热为置于300°c马弗炉加热2 h。

5.基于权利要求1所述的一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法制备的五氧化二钒类氧化物酶建立gsh分析检测方法，其特征在于，在v2o5（30 μg·ml-1, 100 μl）、tmb（0.4 mm,100 μl）与hac-naac缓冲液（50 mm, ph=2.5, 1600 μl）组成的检测体系中，加入200 μl含gsh溶液，反应溶液在35℃水浴中孵育40 min，记录检测溶液在300 nm-800 nm之间的紫外可见吸收光谱，并记录在652 nm处的吸光度值；根据实验数据，绘制了吸光度与gsh浓度的对应曲线，在1–30 μm范围内，呈线性相关，检出限为0.28 μm。

技术总结
一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法及其在检测谷胱甘肽的应用,涉及生物检测技术领域，具体为一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法及其在人体血清中检测谷胱甘肽的应用。五氧化二钒类氧化物酶制备方法包括以下步骤：步骤一：将NH<subgt;4</subgt;VO<subgt;3</subgt;、聚醚P123和HCl溶于无水乙醇中；步骤二：溶剂热处理；步骤三：收集黑色沉淀物；步骤四：用蒸馏水洗涤数次；步骤五：烘干；步骤六：将收集的沉淀物加热。本发明提供一种五氧化二钒类氧化物酶制备方法，并将制备的五氧化二钒应用于人体血清中谷胱甘肽的检测，成本低，具有良好的精确度和稳定性。

技术研发人员：相振波
受保护的技术使用者：山东黄海科技创新研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17