用于美金刚的测定方法

专利名称：用于美金刚的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种新的用于分析美金刚(memantine)和相关化合物的测定方法。
背景技术：
为了保证医药产品的销售许可，制造商必须向适当的监管机构提交详细的证据来 表明，产品适合于投放到市场上。除了别的以外，监管机构必须对下述满意产品适合用于 人类以及待进入市场的特定药物组合物在投放时没有杂质并且它具有可接受的贮存稳定 性(保存期)。因此向监管机构进行提交的必须包括分析数据，其证明在制造时活性药物组分 (API)没有杂质，或仅存在可忽略水平的杂质，以及药物组合物的保存期是可接受的。在API和药物组合物中的潜在杂质包括API的残留量的合成前体、在活性剂的合成期间产生的副产物、残留溶剂、活性剂的异构体、在用于合成API或用于制备药物组合物 的材料中存在的污染物、以及未确认的外来物质。在存储后可以出现的其它杂质包括由活 性剂的降解所产生的物质，例如通过氧化或水解。卫生当局具有非常严格的标准，并且制造商必须证明他们的产品相对地没有杂质 (在某些议定的限度之内)并且这种标准对于所生产的每批医药产品是可再现的。为满足有关卫生当局(即API和药物组合物是安全和有效的)所需要进行的测试 包括纯度测定、含量均勻性测试、溶解试验(溶出度试验)以及有关物质测试。纯度测定确 定当与已知纯度的标准相比时测试产物(分析物)的纯度，而有关物质测试则用来量化在 产品中存在的所有杂质。含量均勻性测试确保批次产品(例如片剂)包含均勻量的API以 及溶解试验确保每批产品具有API的一致的溶解和释放。当开发这些用于分析API或药物组合物(例如，片剂或胶囊剂)的方法时，选择 的技术将通常是高效液相色谱法(HPLC)并联合UV-可见光分光计(紫外光-可见光分光 计)。API和在混合物中存在的任何杂质用HPLC固定相加以分离并且可以借助于UV-可见 光分光计通过检测和测量来对它们加以量化。HPLC是一种色谱分离技术，其中高压泵迫使待分析的物质或混合物(分析物)连 同液体溶剂-流动相(还称作洗脱液)_通过包含固定相的分离柱。如果组成物质强烈相 互作用于固定相，则它保留在柱中相对较长时间，而并不同样强烈相互作用于固定相的物 质则很快离开柱。取决于相互作用的强度，分析物的各种成分在不同时间(保留时间)出 现在分离柱的末端，其中可以借助于适宜的检测器来鉴定它们。这种方法很好地适合于具有发色团的化合物，也就是说，在电磁波谱的UV-可见 光范围内吸收能量的化合物。然而，对于并不包含发色团的其它化合物，必须发现一种可替 换的检测方法。这有时涉及用试剂衍生主体化合物(subject compound)，以致得到的分析 物包含可以利用UV-可见光检测器加以检测的发色团。一种可替换的检测方法是用荧光检测器代替UV-可见光检测器。然而，此技术需 要分析物具有荧光团，但是因为发荧光的化合物是非常罕见的，所以通常必须用发荧光的化学部分来衍生主题化合物。这再次涉及衍生分析物，这次是用试剂来产生荧光化合物。分 析物的衍生化(derivatisation)既耗时又难以开发，尤其是因为某些分析物并不具有容 易与衍生剂反应的官能团。此外，某些有关物质可以丢失(在降解后)可以被衍生的官能 团，因而将检测不到这些有关物质。荧光衍生化的另一个缺点是，在制药公司的分析实验室 中，荧光检测器并不如UV-可见光检测器常见。制药公司经常使用气相色谱法(气相色谱)(GC)来量化在药物组合物和API中的 残留溶剂。该方法通常涉及将试验样品溶解在一定量的一种或多种溶剂中，注射样品，以及 利用顶空技术(headspace technique)来挥发溶剂。通常利用火焰离子化检测器(FID)技 术来检测分析物。这些FID检测器可以用于几乎所有医药产品，因为它们能够检测包含C-C 或C-H键的任何分析物。然而，为了利用气相色谱法来分析化合物，化合物必须具有足够低 的蒸气压以使它们在相互作用于色谱柱以前被挥发。气相色谱法是一种高度有效、敏感的方法，其用来分析物质的复杂混合物。它是一 种色谱技术，其使用气体作为流动相并且气体被引导通过规定直径的包含固定相(高粘稠 液体)的柱。大多数毛细管柱通常由熔凝硅石制成，具有0.1至0.5mm的内径以及为5至 60m长。内柱壁涂布有固定相，从而薄膜为0.1至5μπι厚。氢气、氦气或氮气通常用作载 气，从而就分 离效率和分析速度而言氢气提供显著的优点。气相色谱法的一个基本的先决条件是，物质可以被汽化而不会分解，即假设物质 不可获得以气态形式。可以选择性地衍生具有不适当挥发性的物质以产生更具挥发性的物 质，如三甲代甲硅烷基衍生物。可以通过直接注射液体样品或通过从样品瓶的气体空间提 取，将样品引入毛细管柱中。后种方法，称作顶空气相色谱法，是一种特殊技术，其提供在液 体或固体样品中检测低浓度的高度挥发性物质的方式。一种可替换的检测方法是使用质谱法来检测通过气相色谱法(GC-MS)或液相色 谱法(LC-MS)分离的化合物。然而，这种方法需要昂贵的质谱仪，其对于许多分析实验室来 说是不方便的。美金刚是3，5- 二甲基三环[3. 3. 1. I3'7]癸胺或1_氨基_3，5_ 二甲基金刚烷 的通用化学名称。它是一种中等亲和力的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂。Bormann等在美国专利5061703中披露了盐酸美金刚可用于预防和治疗卒中、直 视心外科手术、蛛网膜下出血、短暂脑缺血发作、围产期窒息、缺氧、低血糖、呼吸暂停以及 阿尔茨海默病以后的脑缺血。此外，在美国专利5614560中披露了一种利用美金刚来减少 哺乳动物中非缺血NMDA受体介导的神经元变性的方法。由化学式I表示的盐酸美金刚目前被认可和销售用于预防和治疗中等至严重的 阿尔茨海默病。
NH2 HCl
OI3
用于制备美金刚的方法在本领域是已知的并且这些方法包括那些在美国专利 4122193 中和由 K Gerzon 等在 J. Med. Chem.，vol. 6，第 760-763 页，1963 中所披露的方法。 作为药物化合物，美金刚是极不寻常的，因为该分子并不包含发色团。如上所述， 这意味着，通常选择HPLC连同UV-可见光检测器作为用于分析美金刚以及其杂质的方法不 是可行的。美金刚还包含非常少的官能团，其意味着，除上述方法的一般缺点以外，为形成 包含适宜发色团或荧光团的化合物的衍生化将是困难的。在文献中已公开了若干种方法来分析美金刚，但这些不同方法均受到上述问题的 阻碍，因为它们涉及衍生化和/或专门的检测设备。披露这些方法的最近出版物的实例包括以下利用荧光试剂来衍生美金刚的 HPLC 方法，在以下论文中T-H Duh 等，在 J. Chromatography A, vol. 987，第 205-209 页， 2003，以及 J. Chromatography A, vol. 1088，第 175-181 页，2005 中。利用衍生化和 UV 检测 的 HPLC 方法，C Shuangjin,在 J. Pharm. &Biomed. Analysis (印刷中)中。液相色谱-质谱 (LC-MS)方法，MJ Koeberle 等，在 J. Chromatography B, vol. 787，第 313-322 页，2003 中。 一种具体的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法，AA Almeida等，在J. Chromatography B, vol. 848，第 311-316 页，2007 中。电泳法，NReichova 等，在 Electrophoresis, vol. 23， 第 259-262 页，2002 中。因此，虽然已披露了若干种方法用于分析美金刚以及其杂质，但仍然需要一种可 替换的方法，其避免了与如上所述的已知方法有关的问题。由本发明的发明人的研究已令人惊讶地表明，美金刚是足够易挥发的以用于GC 而没有衍生化以及没有分解。这使得能够利用GC来分析产品以及美金刚的样品可以被直 接注射到柱上而无需上述的顶空进样(headspace sampling)。它还可以利用这种GC方法 来量化美金刚的有机杂质。本发明的发明人还已开发了新的、有效的和可再现的用于GC方 法的样品制备的方法。发明目的因此，本发明的一个目的是提供一种新的、可替换的方法用于分析美金刚以及其 杂质同时避免与衍生化有关的典型的现有技术问题，以及专门的检测方法的应用。

发明内容
因此，本发明的第一个方面提供了一种利用气相色谱法来分析美金刚、或其药用 盐、以及其杂质的方法。该方法优选涉及美金刚的试验样品被直接注射到GC柱上而没有顶 空进样。该方法优选使用火焰离子化检测。美金刚优选以游离碱、盐酸盐或另一种酸加成 盐的形式。本发明的第一个方面的方法可以用来分析当被制备成药物组合物时的美金刚API 或美金刚。优选地，美金刚被制备成药物组合物。可以通过本发明的第一个方面的方法分析的药物组合物包括固体和液体组合物 以及可选地包含一种或多种药用载体或赋形剂。固体形式组合物包括散剂、片剂、丸剂、胶 囊剂、扁囊剂、栓剂、以及分散颗粒剂。液体组合物包括溶液或悬浮液，其可以通过口服、注 射或输注途径给予。 如在整个说明书中所使用的术语“杂质”可以指在API或药物组合物的制备中形成的杂质和/或在存储期间通过在药物组合物中的降解所形成的杂质(或有关物质)。
如上所述，美金刚通常存在为用于药品使用的盐酸盐。这引入一个另外的通过气 相色谱法分析的问题，因为盐是强酸性的并且可以腐蚀用于分离的柱。因此，在分析以前 通常必须中和盐以形成美金刚游离碱。在这样的情况下，一种典型的样品制备技术将是通 过与碱如氢氧化钠的水溶液反应来中和盐酸美金刚，存在为API，或当存在于药物组合物中 时。然后利用有机溶剂如氯仿提取由此形成的美金刚游离碱和相应的杂质。然而，这种提取技术由于包括可变的进入有机层的提取率以及水层和有机溶剂层 的不完全分离的若干原因可能是非常不可靠的。本发明的发明人已发现，按照这种类型的 提取工艺回收的美金刚的量并不是一致地可再现的，并且这导致在有关物质的定量方面的 另外的问题。因此，本发明的第二个方面提供了一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚、或其 另一种药用酸加成盐、以及其杂质的方法，其中通过混合盐酸美金刚或其另一种药用酸加 成盐、或包含盐酸美金刚或其另一种药用酸加成盐的药物组合物与一种或多种溶剂以及非 水碱性试剂，来制备试验样品，其中溶剂能够溶解美金刚和碱性试剂。本发明的第二个方面的方法优选涉及美金刚的试验样品被直接注射到GC柱上而 没有顶空进样。该方法优选使用火焰离子化检测。本发明的第二个方面的方法可以用来分析当被制备成药物组合物时的美金刚API 或美金刚。优选地，美金刚被制备成药物组合物。可以通过本发明的第二个方面的方法分析的药物组合物包括固体和液体组合物 并且可选地包含一种或多种药用载体或赋形剂。固体形式组合物包括散剂、片剂、丸剂、胶 囊剂、扁囊剂、栓剂以及分散颗粒剂。液体组合物包括溶液或悬浮液，其可以通过口服、注射 或输注途径给予。在本发明的第二个方面的方法中可以使用的碱性试剂包括无机碱性试剂如碳 酸钠；碳酸氢钠；碳酸钾；碳酸氢钾；碳酸钙；碳酸氢钙；碳酸镁；碳酸氢镁；氢氧化钠； 氢氧化钾；氢氧化钙；氢氧化锂；氢氧化铵；氢氧化铝；氧化镁；氢氧化镁；氢氧化镁铝 (magnesium aluminium hydroxide)；硅酸镁铝；磷酸盐(例如，磷酸氢二钠、钾或钙，磷酸 三钙(tribasic calcium phosphate)或磷酸三钠)；以及它们的混合物。碱性试剂优选为 碱金属氢氧化物如氢氧化钠或氢氧化钾。最优选地，碱性试剂是氢氧化钾。在本发明的第二个方面的方法中使用的有机溶剂优选为低级烷基醇，如甲醇、乙 醇、丙醇、丁醇或异丙醇或它们的混合物。可替换地，有机溶剂可以是四氢呋喃、乙酸乙酯或 乙腈或使得完全溶解碱性试剂和释放的美金刚游离碱的任何适宜的有机溶剂。优选地，有 机溶剂是甲醇或乙醇，并且最优选地，其为甲醇。如果需要，可以通过本领域中的标准方法如过滤或离心从来自剩余的药物组合物 的任何残留固体中分离形成的试验样品溶液。优选地，通过离心来分离试验样品溶液。标准参比化合物是一种具有很好确定的纯度的分析物的样品，以及标准溶液通常 平行于样品溶液加以制备并且用作所谓的“外部参比标准”。然后可以基于它们相对于标准 的反应来计算主要化合物或其杂质的纯度。然而，已发现这种方法不适用于分析美金刚，这 是由于样品制备过程的较差的再现性。内部参比标准(internal reference standard)是一种已知量的化合物，其在在分析以前被加入到样品溶液中。在大多数情况下，将选择与分析物具有类似结构的便宜和 简单的烃。这可以确保它具有与分析物类似的保留时间并且可以获得高纯度的标准。本发明的发明人已开发了一种可替换的技术，其中使用内部参比标准，其并不需 要用有机溶剂如氯仿来提取水层。本发明的发明人已开发的方法使用盐酸金刚胺作为内部参比标准。本发明的发明 人已发现，令人惊讶地，在样品制备过程中金刚胺以及其盐的行为方式类似于美金刚以及 其盐，并且从样品制备过程回收的美金刚金刚胺的比率相同于在样品制备过程以前在样 品中存在的盐酸美金刚盐酸金刚胺的比率。利用这种方式，完全克服了关于样品提取的问 题，从而提供了一种简单的、可靠的以及节省成本的方法，用于使用气相色谱法来分析美金 刚、或其药用盐、以及其有关物质。本发明的发明人已广泛地测试了该方法，以表明它们是可再现的、准确的、精确 的、相对于浓度为线性的、以及耐用的(稳定的，robust)。还已确定了检测和定量的限度。本发明的第一个和第二个方面可以包括使用内部参比标准。优选地，内部标准参 比化合物是金刚胺或金刚乙胺。最优选地，内部标准参比化合物是金刚胺。本发明的第三个方面提供了一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚以及其杂质 的方法，该方法包括(a)制备内部标准参比化合物在第一有机溶剂中的溶液；(b)混合内部标准参比化合物溶液与盐酸美金刚或包含盐酸美金刚的药物组合 物、第二有机溶剂、以及非水碱性试剂以将美金刚游离碱释放在溶液中；以及(c)分析上清溶液。在本发明的第三个方面的方法中所使用的第一和第二有机溶剂可以是或可以不 是相同的并且优选为低级烷基醇，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或异丙醇。可替换地，第一和第 二有机溶剂可以是四氢呋喃、乙酸乙酯或乙腈或使得完全溶解碱性试剂和释放的美金刚游 离碱的任何适宜的有机溶剂。优选地，有机溶剂为甲醇或乙醇，并且最优选地，其为甲醇。用于本发明的第三个方面的方法中的适宜的碱性试剂可以是无机碱性试剂如碳 酸钠；碳酸氢钠；碳酸钾；碳酸氢钾；碳酸钙；碳酸氢钙；碳酸镁；碳酸氢镁；氢氧化钠；氢氧 化钾；氢氧化钙；氢氧化锂；氢氧化铵；氢氧化铝；氧化镁；氢氧化镁；氢氧化镁铝；硅酸镁 铝；磷酸盐(例如，磷酸氢二钠、钾或钙，磷酸三钙或磷酸三钠)；以及它们的混合物。优选 地，碱性试剂是氢氧化物盐如氢氧化钠或氢氧化钾。最优选地，碱性试剂是氢氧化钾。通常在步骤(b)中将碱性试剂加入溶液。可替换地，可以在步骤(a)中而不是在 步骤(b)中将碱性试剂加入溶液。优选地，内部标准参比化合物是金刚胺或金刚乙胺。最优选地，内部标准参比化合 物是金刚胺。如果需要，可以通过本领域中的标准方法如过滤或离心使步骤(C)中的上清溶液 与来自药物组合物的任何残留固体分离。优选地，通过离心来分离上清溶液。如在本发明的第二个和第三个方面中所使用的术语“非水”是指不存在足够的水 以形成与有机溶剂层分离的不同水层。因此，术语“非水碱性试剂”是指，即使碱性试剂可 以溶解于水中，但碱性试剂被溶解在一种或多种有机溶剂中，因为不存在足够的水以形成 与有机溶剂层分离的不同水层。
本发明的第二个和第三个方面涉及利用单相溶剂提取来分析美金刚游离碱的方 法。因此避免了有机/含水双相溶剂提取并且不需要分离水层和有机层，从而避免了与上 述现有技术方法有关的问题。
然而，如果双相溶剂提取是优选的，则本发明的发明人已发现，氯化溶剂如氯仿的 使用不是非常适用于样品制备，因为结果不是可再现的，以及因为氯仿层在水层以下，因而 更难以为测定目的进行分离。本发明的发明人已令人惊讶地发现，当使用低级烷基烃有机 溶剂如戊烷、己烷、庚烷以及辛烷或芳族烃如苯或甲苯时，含水碱性/有机溶剂双相提取可 以非常好地进行工作。本发明的发明人已广泛地测试了这种方法以表明它是可再现的、准 确的、精确的、相对于浓度为线性的、以及耐用的。因此，本发明的第四个方面提供了一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚、或其 另一种药用酸加成盐、以及其杂质的方法，该方法包括混合盐酸美金刚或其另一种药用酸 加成盐、或包含盐酸美金刚或其另一种药用酸加成盐的药物组合物与一种或多种有机溶剂 以及含水碱性试剂以将美金刚游离碱释放在有机溶剂中的溶液中，分离双相混合物以提供 有机溶剂层，以及分析有机溶剂溶液。本发明的第四个方面可以涉及使用内部标准参比化合物。优选地，内部标准参比 化合物是金刚胺或金刚乙胺。最优选地，内部标准参比化合物是金刚胺。在本发明的第四个方面中所使用的有机溶剂优选为选自一种或多种以下溶剂戊 烷、己烷、庚烷、辛烷、苯或甲苯的烃溶剂。优选地，烃溶剂为正己烷。用于本发明的第四个方面的方法中的适宜的碱性试剂可以是无机碱性试剂如碳 酸钠；碳酸氢钠；碳酸钾；碳酸氢钾；碳酸钙；碳酸氢钙；碳酸镁；碳酸氢镁；氢氧化钠；氢氧 化钾；氢氧化钙；氢氧化锂；氢氧化铵；氢氧化铝；氧化镁；氢氧化镁；氢氧化镁铝；硅酸镁 铝；磷酸盐(例如，磷酸氢二钠、钾或钙，磷酸三钙或磷酸三钠)；以及它们的混合物。优选 地，碱性试剂是氢氧化物盐如氢氧化钠或氢氧化钾。最优选地，碱性试剂是氢氧化钾。如果需要，可以通过本领域中的标准方法如过滤或离心从来自药物组合物的任何 残留固体中分离有机溶剂溶液。优选地，通过离心来分离有机溶剂溶液。如在本发明的第四个方面中所使用的术语“含水”是指存在足够的水以形成与有 机溶剂层分离的不同水层。因此，术语“含水碱性试剂”是指至少一些碱性试剂被溶解在水 层中。对于盐酸盐可替换地，本发明的四个方面可以用来分析美金刚的其它酸加成盐如 氢溴酸盐、氢碘酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐(mesylate)、苯磺酸盐(besylate)、甲苯磺酸盐、 草酸盐、乙酸盐、丙酸盐或甲酸盐。然而，本发明的方法优选用来分析美金刚的盐酸盐。可以通过本发明的所有四个方面分析的药物组合物包括固体和液体组合物，其可 选地包含一种或多种药用载体或赋形剂。固体形式组合物包括散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁 囊剂、栓剂、以及分散颗粒剂。在固体剂型中使用的典型的赋形剂包括在所述的剂型中的常 规添加剂。可以使用通常用于片剂配方中的压片助剂并且可以提及关于此主题的广泛的 文献，尤其参见 Fiedler' s〃 Lexikon derHilfsstoffe"，4th edition,ECV Aulendorf, 1996，其全部内容以引用方式结合于本文。典型的赋形剂包括但不限于填料、粘合剂、崩解 齐IJ、助流剂、润滑剂、稳定剂、稀释剂、表面活性剂等。因此，待分析的药物组合物通常包含一种或多种填料，如微晶纤维素、乳糖、乳糖一水合物、糖、淀粉、改性淀粉、甘露醇、山梨醇以及其它多元醇、糊精、葡聚糖或麦芽糊精；一种或多种粘合剂，如乳糖、淀粉、改性淀粉、玉米淀粉、糊精、葡聚糖、麦芽糊精、微晶纤维 素(例如Avieel )、糖、聚乙二醇、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基 纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、明胶、阿拉伯胶、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮或交聚维酮； 一种或多种崩解剂，如交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、交联羧甲基 淀粉、淀粉、微晶纤维素、聚丙烯酸钾(polyacrylin potassium)；一种或多种不同的助流 剂或润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、山嵛酸钙、硬脂酰醇富马酸钠、滑石、三硅酸 镁、硬脂酸、棕榈酸、巴西棕榈蜡或二氧化硅(例如胶态二氧化硅)。如果需要，待分析的药物组合物还可以包括表面活性剂和其它常规赋形剂。可以 使用的典型的表面活性剂是离子型表面活性剂，如十二烷基硫酸钠，或非离子型表面活性 齐U，如不同的泊洛沙姆(聚氧乙烯和聚氧丙烯共聚物)、天然或合成卵磷脂、脱水山梨醇和 脂肪酸的酯(如Spano )、聚氧乙烯-脱水山梨醇和脂肪酸的酯(如！^忧!! )、聚氧乙 烯化氢化蓖麻油(如Cremophor )、聚氧乙烯硬脂酸酯(如Brij )、二甲基聚硅氧烧，或 上述表面活性剂的任何组合。如果固体药物组合物以包衣片剂的形式，包衣可以制备自至少一种成膜剂，如羟 丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素或甲基丙烯酸聚合物，其可选地可以包含至少一种增塑剂， 如聚乙二醇、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、以及常规用于薄膜包衣的其它药物辅助物质， 如颜料、填料等。考虑到固体口服剂型的特定的所期望的性能，并通过例行试验而没有任何过度的 负担，技术人员可以选择和使用一种或多种这些赋形剂。每种赋形剂的绝对量和相对于其它添加剂的量类似地依赖于固体口服剂型的所 期望的性能并且还可以由技术人员通过例行试验而没有过度的负担来选择。例如，可以选 择固体口服剂型以呈现活性剂的加速和/或延迟释放，其中具有或没有活性剂释放的定量 控制。在散剂中，载体是细分的固体，其是在与细分的API的混合物中。在片剂中，API以 适当的比例与具有必要粘合特性的载体混合并被压实为所期望的形状和尺寸。液体形式制剂包括溶液、悬浮液以及乳浊液，例如水或丙二醇水溶液。对于胃肠道 外注射，液体制剂可以配制在聚乙二醇水溶液中的溶液中。适合于口服用途的水溶液可以通过将API溶解在水中并添加适宜的着色剂、香 料、稳定剂和增稠剂(根据需要)而制备。在单位剂量制剂中活性组分的量可以被变化或调节为0. 5mg至50mg，优选为2mg 至30mg，以及最优选为5mg至20mg。约5mg至约20mg的每日剂量范围是优选的。组合物 可以，如果需要的话，还包含其它相容的治疗剂。虽然已按照其具体实施方式
描述了本发明，但某些改进和等效替换对于本领域技 术人员而言将是显而易见的并且用于包括在本发明的范围内。本文披露的本发明的方法还可以用来分析与美金刚具有类似化学结构和/或类 似化学或物理性能的化合物，例如，金刚乙胺和其药用盐。通过以下实施例来说明而决不是限制本发明。实施例实施例1 含量均勻性测试GC系统 Agilent 6890或等效系统入口套管Agilent分离/无分离套管部件号5183-4711柱ZB-I，30m 长度，0.32mm 内径，LOym薄膜厚度预柱去活化熔凝硅石管，5m长度，0. 32m m内径载气流量氦气，2. 5mL/分钟(恒定流量)入口温度340°C分流注射分流比20 1气体节省器开 按时2.0分钟流量20. 0烘箱温度初始温度140°C起始时间1分钟速率110°C/分钟温度 1200°C时间10分钟速率240°C/分钟温度 2340 0C时间21分钟检测器火焰离子化检测器(FID)，在340°C下氢气30mL/分钟空气350mL/分钟氦气(补充)22.5mL/分钟注射体积IyL注射器用稀释剂预洗涤5次用甲醇后洗涤5次样品洗涤5次5个注射泵稀释剂0. 005M甲醇氢氧化钾运行时间12分钟内部标准工作溶液(ISTD)精确称量约IOOmg金刚胺HCl (HCl金刚胺)(CltlH17N · HCl)并转移到IOOOmL容量 瓶中。添加约600mL稀释剂并声处理约2分钟或直到溶解。使冷却至室温，用稀释剂稀释 至一容积并充分混合。(浓度 100 μ g/mL金刚胺HCl)。标准工作溶液(制备双份)精确称量约25. Omg美金刚HCl RS (C12H21N .HCl)并转移到250mL容量瓶中。添加 约150mL的ISTD并声处理约2分钟或直到溶解。使冷却至室温，用ISTD稀释至一容积并充分混合。(浓度 100 μ g/mL美金刚HCl (HCl美金刚)和 100 μ g/mL金刚胺HCl)。 样品工作溶液将一个片剂转移到IOOmL容量瓶中。添加70mL的ISTD。机械摇动20分钟或直到 片剂被完全崩解。在偶然旋转下声处理10分钟。使在室温下静置10分钟。用ISTD稀释 至一容积。充分混合。在3000rpm下离心一部分5分钟。获取上清液用于分析。(浓度 100μ g/mL美金刚HCl和 100 μ g/mL金刚胺HCl)。实施例2:溶解试验GC系统Agilent 6890或等效系统入口套管Agilent分离/无分离套管部件号5183-4711柱ZB-I，30m 长度，0.32mm 内径，Ι.Ομπι薄膜厚度载气流量氦气，2. 5mL/分钟(恒定流量)入口温度250°C分流注射分流比10 1气体节省器关烘箱温度初始温度140°C起始时间1分钟速率110°C/分钟温度 1200°C时间10分钟速率240°C/分钟温度 2300 "C时间22分钟检测器火焰离子化检测器(FID)，在300°C下氢气40mL/分钟空气400mL/分钟氦气(补充)22.5mL/分钟注射量体积5 μ L注射器用乙醇中的0. OlM NaOH*预洗涤5次用乙醇后洗涤5次样品洗涤5次5个注射泵*0. OlM 乙醇 NaOH :100μ L 的 1. OM 含水 NaOH，用无水乙醇稀释至 IOmL运行时间12分钟溶解设备和参数介质0. IN HCl，含有 NaCl*容积900mL方法装置 1(篮(Basket))
速度IOOrpm运行时间 30分钟温度37°C 士 0. 5°C介质* 精确称量12g氯化钠(NaCl)并溶解在5L水中。添加40mL盐酸(HCl)。用水稀释至6L。充分混合。用HCl将pH调节至1.2 士 0.05。内部标准制剂(ISTD)储备内部标准溶液称量27. 8mg金刚胺HCl (C10H17N · HCl)并转移到50mL容量瓶中。添加约40mL介 质。声处理2分钟或直到溶解。用介质稀释至一容积。充分混合。内部标准中间溶液将30. OmL储备内部标准溶液转移到IOOmL容量瓶中。添加5. OmL的1. ON NaOH溶 液。旋转混合。添加20. OmL正己烷。紧密塞住(stopper)。机械摇动5分钟。使静置10 分钟。内部标准工作溶液(ISTD)将来自内部标准中间溶液的5. OmL上层转移到250mL容量瓶中。用正己烷稀释至 一容积。充分混合。(浓度 16.7 μ g/mL 金刚胺 HCl)。标准储备溶液精确称量约22. 2mg美金刚HCl RS (C12H21N-HC1)并转移到IOOmL容量瓶中。添加 约30mL介质并声处理约2分钟或直到溶解。用介质稀释至一容积并充分混合。(浓度 222μ g/mL 美金刚 HCl)。对于lOmg片剂将5. OmL标准储备溶液吸移到IOOmL容量瓶中。用介质稀释至一容积并混合。(浓 度 11. 1 μ g/mL美金刚HCl)。对于片剂将5. OmL标准储备溶液吸移到200mL容量瓶中。用介质稀释至一容积并混合。(浓 度 5. 56 μ g/mL美金刚HCl)。对于lOmg片剂 将6. OmL标准储备溶液吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的1. ON NaOH溶液。通 过旋转加以混合。添加4. OmL的ISTD。紧密塞住。机械摇动5分钟。使静置10分钟。利 用一次性玻璃吸移管，将上层小心转移到GC瓶中。(浓度 16.7 μ g/mL美金刚HCl以及 16. 7 μ g/mL金刚胺HCl)。对于片剂 将6. OmL标准储备溶液吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的1. ON NaOH溶液。通 过旋转加以混合。添加4. OmL的ISTD。紧密塞住。机械摇动5分钟。使静置10分钟。利 用一次性玻璃吸移管，将上层小心转移到GC瓶中。(浓度 8.33 μ g/mL美金刚HCl以及 16. 7 μ g/mL金刚胺HCl)。
将6. OmL介质吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的1. ONNaOH溶液。通过旋转加以混合。添加4. OmL的ISTD。紧密塞住。机械摇动5分钟。使静置10分钟。利用一次性 玻璃吸移管，将上层小心转移到GC瓶中。(浓度 16. 7 μ g/mL金刚胺HCl)。样品储备溶液将900mL介质放入六个溶解容器(溶出容器)中的每一个中并使介质平衡至 370C 士0. 5°C。预设篮速度(basket speed)为lOOrpm。将一个片剂放入每个干燥的篮中。 使篮下降到介质中并开始旋转篮。在30分钟以后，利用探针从每个容器的介质表面与旋转 篮顶部(离容器壁不小于Icm)之间的中部区域提取IOmL样品。立即过滤溶液。对于IOmg片剂将6. OmL样品储备溶液吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的1. ON NaOH溶液。通过旋转加以混合。添加4. OmL的ISTD。紧密塞住。机械摇动5分钟。使静置10分钟。利 用一次性玻璃吸移管，将上层小心转移到GC瓶中。(浓度 16.7 μ g/mL美金刚HCl以及 16. 7 μ g/mL金刚胺HCl)。对于5mg片剂将6. OmL样品储备溶液吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的1. ON NaOH溶液。通过旋转加以混合。添加4. OmL的ISTD。紧密塞住。机械摇动5分钟。使静置10分钟。利 用一次性玻璃吸移管，将上层小心转移到GC瓶中。(浓度 8.33 μ g/mL美金刚HCl以及 16. 7 μ g/mL金刚胺HCl)。实施例3 有关物质测试GC系统 Agilent 6890或等效系统入口套管Agilent分离/无分离套管部件号5183-4711柱ZB-I，60m 长度，0.32mm 内径，Ι.Ομπι薄膜厚度载气流量氦气，2. 5mL/分钟(恒定流量)入口温度250°C分流注射分流比20 1气体节省器开 按时2.0分钟流量20. 0烘箱温度初始温度140°C起始时间1分钟速率12°C/分钟温度 1200°C时间10分钟速率230°C/分钟温度 2300 0C时间25分钟检测器 火焰离子化检测器(FID)，在250°C下氢气40mL/分钟空气400mL/分钟
氦气(补充)22. 5mL/分钟注射体积5 μ L注射器用0.0IM乙醇NaOH*预洗涤5次用乙醇后洗涤5次样品洗涤5次5个注射泵*0. OlM 乙醇 NaOH :100 μ L 的 1. OM 含水 NaOH，用无水乙醇稀释至 IOmL运行时间40分钟标准储备溶液精确称量约5. Omg美金刚HCl RS (C12H21N · HCl)并转移到IOOmL容量瓶中。添加 约60mL的H2。，并声处理30秒(如有必要)至溶解。用H2O稀释至一容积并充分混合。(浓度 50yg/mL美金刚 HC1)。标准中间溶液将4. OmL标准储备溶液吸移到IOOmL容量瓶中。用H2O稀释至一容积并充分混合。 (浓度 2yg/mL美金刚HC1)。标准工作溶液将5. OmL标准中间溶液吸移到25mL容量瓶中。添加1. OmL的6M NaOH溶液和5. OmL 正己烷。确保在添加正己烷以后立即紧密盖好烧瓶以防止任何泄漏和/或蒸发。用手摇动 烧瓶5分钟。静置5分钟以使层分离。将一部分上部有机层转移到GC瓶并立即盖好。(浓度 2μ g/mL美金刚HCl)。样品工作溶液精确称量20个片剂并确定平均片剂重量。利用研钵和研杵，细粉化片剂。精确称 量相当于20. Omg美金刚HCl的片剂粉末并转移到40mL聚碳酸酯离心管(带有Nalgene螺 帽)中。添加10. OmL的H2O并声处理2分钟同时偶尔摇晃。添加2. OmL的6M NaOH溶液和 10. OmL正己烷。确保在添加正己烷以后立即紧密盖好管以防止任何泄漏和/或蒸发。用手 摇动管5分钟。静置10分钟以使层分离。将一部分上部有机层转移到GC瓶并立即盖好。(浓度 2mg/mL美金刚HCl)。实施例4 纯度测定GC系统 Agilent 6890或等效系统入口套管Agilent分离/无分离套管部件号5183-4711柱ZB-I，30m 长度，0.32mm 内径，Ι.Ομπι薄膜厚度预柱去活化熔凝硅石管，5m长度，0. 32mm内径载气流量氦气，2. 5mL/分钟(恒定流量)入口温度340°C分流注射分流比20 1气体节省器开 按时2.0分钟流量20. 0
烘箱温度初始温度140°C起始时间 1分钟速率110°C/分钟温度 1200°C时间10分钟速率240°C/分钟温度 2340 0C时间21分钟检测器火焰离子化检测器(FID)，在340°C下氢气30mL/分钟空气350mL/分钟氦气(补充)22. 5mL/分钟注射体积IyL注射器用稀释剂预洗涤5次用甲醇后洗涤5次样品洗涤5次5个注射泵稀释剂0. 005M甲醇氢氧化钾**用甲醇稀释IOmL的0. 5M甲醇氢氧化钾至IOOOmL运行时间 12分钟内部标准工作溶液(ISTD)精确称量约125mg金刚胺HCl (C10H17N · HCl)并转移到IOOOmL容量瓶中。添加约 600mL稀释剂并声处理约2分钟或直到溶解。使冷却至室温，用稀释剂稀释至一容积并充分 混合。(浓度 125 μ g/mL金刚胺HCl)。标准工作溶液(制备双份)精确称量约25. Omg美金刚HCl RS (C12H21N 'HCl)并转移到200mL容量瓶中。添加 约150mL的ISTD并声处理约2分钟或直到溶解。使冷却至室温，用ISTD稀释至一容积并 充分混合。(浓度 125μ g/mL美金刚HCl以及 125 μ g/mL金刚胺HCl)。样品工作溶液(制备双份)精确称量20个片剂并确定平均片剂重量。利用研钵和研杵，细粉化片剂。精确称 量相当于25. Omg美金刚HCl的片剂粉末并转移到200mL容量瓶中。添加约IOOmL的ISTD。 机械摇动10分钟。声处理5分钟同时偶然旋转。使在室温下静置10分钟。用ISTD稀释 至一容积并充分混合。在3000rpm下离心一部分5分钟。将部分透明上清液转移到GC瓶 中。(浓度 125 μ g/mL美金刚HCl以及 125 μ g/mL金刚胺HCl)。注射空白溶液(ISTD)并确保基线是清洁的和稳定的。 注射标准工作溶液1五次。计算美金刚与ISTD的峰面积比的相对标准偏差(RSD)。RSD是NMT 2. 0%。计算 美金刚峰的拖尾因子(T)和柱效率(N)。T是在0.8和1.2之内，而N为NLT 100000。ISTD和美金刚之间的分辨率(R)是NLT 3.5。注射标准工作溶液2、空白溶液(ISTD)、以及样品工作溶液一次。在每6个样品以后注射标准工作溶液1 一次。在运行结束时各注射标准工作溶液1一次。
权利要求
一种利用气相色谱法来分析美金刚、或其药用盐、以及其杂质的方法。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述美金刚处于它的盐酸盐或游离碱的形式。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，由药物组合物制备的包含美金刚的样品通过 过滤或离心从来自所述药物组合物的任何残留固体中分离。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述包含美金刚的样品通过离心从任何残留固 体中分离。
5.一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚、或其另一种药用酸加成盐、以及其杂质的 方法，其中，通过混合盐酸美金刚或其另一种药用酸加成盐、或包含盐酸美金刚或其另一种 药用酸加成盐的药物组合物与一种或多种有机溶剂以及非水碱性试剂来制备试验样品，其 中所述溶剂能够溶解所释放的美金刚游离碱和所述碱性试剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述有机溶剂是低级烷基醇、四氢呋喃、乙酸乙 酯、乙腈、或它们的混合物。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述低级烷基醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异丙 醇、或它们的混合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述低级烷基醇是甲醇或乙醇。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法，其中，由药物组合物制备的试验样品溶液 通过过滤或离心从来自所述药物组合物的任何残留固体中分离。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述试验样品溶液通过离心从任何残留固体中 分离。
11.一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚以及其杂质的方法，包括(a)制备内部标准参比化合物在第一有机溶剂中的溶液；(b)混合所述内部标准参比化合物溶液与盐酸美金刚或包含盐酸美金刚的药物组合 物、第二有机溶剂、以及非水碱性试剂以将美金刚游离碱释放在溶液中；以及(c)分析上清溶液。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述第一和第二有机溶剂是相同或不同的。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述第一和第二有机溶剂是低级烷基醇、 四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈、或使得完全溶解所述释放的美金刚游离碱以及所述碱性试剂的 任何适宜的有机溶剂、或它们的混合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述低级烷基醇是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异 丙醇、或它们的混合物。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述低级烷基醇是甲醇或乙醇。
16.根据权利要求11至15中任一项所述的方法，其中，在步骤(a)中而不是在步骤(b) 中，将所述碱性试剂加入所述溶液。
17.根据权利要求11至16中任一项所述的方法，其中，在步骤(c)中的所述上清溶液 通过过滤或离心从来自所述药物组合物的任何残留固体中分离。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述上清溶液通过离心从任何残留固体中分罔。
19.一种利用气相色谱法来分析盐酸美金刚、或其另一种药用酸加成盐、以及其杂质的 方法，包括混合盐酸美金刚或其另一种药用酸加成盐、或包含盐酸美金刚或其另一种药用酸加成盐的药物组合物与一种或多种有机溶剂以及含水碱性试剂以将美金刚游离碱释放 在所述有机溶剂中的溶液中，分离双相混合物以提供有机溶剂层，以及分析有机溶剂溶液。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述有机溶剂是烃溶剂。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述烃溶剂是戊烷、己烷、庚烷、辛烷、苯或甲苯。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述烃溶剂是正己烷。
23.根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂溶液通过过滤或 离心从来自所述药物组合物的任何残留固体中分离。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述有机溶剂溶液通过离心从任何残留固体 中分离。
25.根据权利要求5至24中任一项所述的方法，其中，所述碱性试剂是氢氧化钾或氢氧 化钠。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述碱性试剂是氢氧化钾。
27.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，包含美金刚的样品被直接注射到GC柱 上而没有顶空进样。
28.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，使用火焰离子化检测。
29.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，分析了当被制备成药物组合物时的美金 刚API或美金刚，或当被制备成药物组合物时的美金刚盐API或美金刚盐。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，分析了当被制备成药物组合物时的美金刚或 当被制备成药物组合物时的美金刚盐。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述药物组合物是固体或液体组合物。
32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述药物组合物是片剂。
33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述片剂包含一种或多种药用载体或赋形剂。
34.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，使用内部参比标准。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，使用金刚胺、盐酸金刚胺、金刚乙胺或盐酸金 刚乙胺作为内部参比标准。
36.根据权利要求35所述的方法，其中，使用金刚胺或盐酸金刚胺作为内部参比标准。
37.根据任一前述权利要求所述的方法，其中，所述方法用来分析盐酸美金刚、氢溴酸 盐、氢碘酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、草酸盐、乙酸盐、丙酸盐或甲酸。
全文摘要
本发明涉及新的用于分析美金刚和相关化合物的测定方法。
文档编号G01N30/88GK101801911SQ200880106761
公开日2010年8月11日 申请日期2008年7月18日 优先权日2007年7月18日
发明者卡塔里兹纳·沃伊塔赫尼奥-扎瓦达, 尼克·李, 戴维·邓肯, 林恩塞·约翰斯顿, 特蕾西·多伊尔, 约翰·坎贝尔 申请人:基因里克斯(英国)有限公司