专利名称：可加压加热的环形色谱仪的制作方法
技术领域：
本发明涉及一个在高压釜中可消毒的装置连续的环形色谱仪及该装置的使用方法。
从WO99/12625已知一种环形色谱仪，它有一个作为滑动环形状的固定的洗提液收集环，在其上密封的，滑动的引入一个带有色谱凝胶的圆柱体夹套状的颗粒床的转动体和一体化的塔板。其目的是，一个用此装置连续运作的环形色谱仪(国际上简称为CAC，连续环形色谱仪)保护环境免受污染和有可能进行消毒工作。在洗提液收集环中以小室形式的收集外装有液体导出管。在塔板中有小槽用于收集从CAC柱子的颗料床中流出的馏分和将其继续导向洗提液收集环的小室中。
专门用于分离生物的或生化的物质以及在应用于制药的生物活性物质加工上对色谱仪的无污染的操作过程提出高的要求。还要求它与外界封闭的系统，这些系统能简单进行消毒和此外使之容易适应交替的分离任务，其中要注意的是，无污染运转的装置是由转动部分和固定部分组成的。此外在洗提液取出时还需要防护措施。它使从收集环的颗粒床和小室流出的洗提液和馏分尽可能均匀同时有尽可能高的选择性。此外合适的措施应阻止已分离的馏分事后“拉走”至相邻的小室。
按WO99/12625改善选择性的愿望用设计途径达到，将塔板中的槽数和收集环的室数在技术可行性上和方法经济性上提高到最大值。在此出现的问题通过粘着效应和毛细管效应在减少塔板中槽的横截面的基础上和特别是在收集环的小室的液体导出的基础上这样来解决，即将塔板中槽的直径在径向向上至颗粒床进行楔形扩大，使尽可能形成负压和防止随后未消毒的杂质气体在滑动环密封的上方抽吸到小室中。此外有一压力平衡孔，为消毒操作可用一适当的消毒过滤膜覆盖。
可按WO99/12625先用以下方法减少馏分拉走到相邻的收集环的槽中，选择在塔板中的槽直径，使其比收集环的小室间径向壁的厚度明显的大。因此使从一个槽到达的液流在槽滑动通过径向壁时被一剪切细缝彻底分离，其中槽和室之间存在的和对均匀的液体流出至关重要的液柱，它比两个相邻的室之间的径向壁明显的要厚，仅仅是部分但绝不超过它的总截面部分被中断。
本发明首先提供了对WO99/12625进一步发展的CAC-装置，但不局限于它的特征，而是涉及环形色谱的装置，它带有一个固定的液柱头，一个固定的洗提液收集环，一个存在其中的，围绕垂直轴可转动的转动体以中空套形状构成的双圆柱体，带有包括其中的色谱分离介质、以及一个机械传动装置。其中转动体在其末端与一转动盘相连，盘上有许多连续立式的槽子和将其密封滑动送入固定的带有小室的洗提液收集环。其中转动盘在它的背面有一凸台(Vorsatz)，它可与传动器的转动轴通过一个快速可松开的连接器可耦合。固定的液体柱头，带有转动盘的转动体和随后的洗提液收集连接在CAC-模块上和作为传动轴的部件可取下来。
按本发明装置的可转动的和固定的部件构成一个与传动装置无关的，通过适当的手段结合在一起的单元。为了使长久的结合，尤其是转动体和洗提液收集环之间的滑动密封，本身在操作中如传动装置的拆去或在运输中有保证，可将装置的转动体和固定部件-不考虑传动单元—夹紧在一种外罩里，例如在两块板之间。
此措施的目的是，包括转动体，带有液体流入管线接头的固定柱头，洗提液收集环，由洗提液收集环的小室的液体流出管线和必要的情况还包括洗提液收集槽整个地从传动块中可拆卸的，例如使它可在高压釜中消毒。按本发明的CAC-装置也最好含有全部需要的结构元件，以便能在传动块中就位通入饱和水蒸汽-特别来自发酵技术的-已知的方式和方法进行热蒸汽消毒。为实施消毒过程，最好使供给柱头的进液管线和由洗提液收集环的小室中出来的管线都连上消毒柱头。例如为了导入可采用标准消毒接头，如人们从发酵技术所熟知的。此外可专门在转动体的构件之间的接缝或接触位置附加密封。
作为传动装置有轴，三角皮带，主动链和齿轮传动或磨擦轮传动。三角皮带盘和齿环可直接装在转动体的外围，其中齿轮及磨擦轮也可以装在圆柱体夹套形的转动体的内侧。
优选应用传动轴，转动体可装在传动轴的上面并可与其偶联。这里优选转动体直接经过一个作为转动盘构成的，直接在颗粒床连接的塔板层上与传动轴耦联。为此目的，转动盘的背侧有一短的凸台，它基本上具有传动轴的形状并在其末端形成衬套，它在传动轴的上方可被对准盖住，以便接纳传动轴的转距。对于耦联可采用已知的扭力连接和对轴的扭转的安全措施。例如固定的耦合连接可用于相互对准的轴或齿形端面。决定性的是，转动体可逆的和简单的从传动轴取下-安装工作费用不大—和扭距变换也是可靠的。此外转动体和传动轴之间的合适的连接方式是专业人员熟悉的，例如包括插塞-，倒板-，卡口-，入孔-，和螺旋连接。
传动轴在其耦合端可用原本已知的方法形成圆柱形，圆锥形和多边形的，因此与其连接的转盘的凸台的必须经过补充形成的对准衬套。但带有衬套的传动轴也可反相终止，在衬套中补充形成的转盘的凸台的终端适中地衔接。
在转动的转盘和固定的洗提液收集环之间的滑动环密封必须总是处于所需的接触压力下，这样才能使洗提液收集环上的转动体运转密封。转动体的本身重量可作为压力介质。按本发明优选采用一个或若干个压力预应力的拉力弹簧。当在预应力的弹簧中洗提液收集环在其中挂着，压力弹簧从下方使接触压力作用于洗提液收集环上。为使弹簧力均匀的分布在洗提液收集环的截面上，有利的是，设有在弹簧和洗提液收集环之间具有相当于弹簧放大了的冲压面的压力传输块。
滑动环密封、具有安置其中的小室用于接收从颗粒床流出洗提液的洗提液收集环，以及在塔板层或在转盘中的槽子可按开头描述的，从WO-99/12625中已知的方式和方法实施。在本发明的范围内优选在开头处由WO99/12625描述的CVC-装置的压力波动问题以及负压问题用不同于收集环的小室中压力平衡孔的其它方法解决。
令人惊讶的表明，采用软管作洗提液收集不小室的排出管线，必要时它可放上小室现有的流出接头，负压问题也可无压力平衡孔在室中可以解决，如果软管是从室中或从流出接头引出，例如波浪的形类似卧着的“S”，它形成一个虹吸管。是否将软管或必要时现有的流出接头安装在小室的底部和基本上垂直向下或它是否从旁边安置在小室的外侧和向下，特别是斜的向下都是不重要的。
在此对于按本发明的CAC-装置最佳功能化的决定性作用是在颗粒床和排出软管的虹吸管之间形成一个在相关容器上的直通液体接头，在洗提-和必要时在洗涤-和再生阶段的整个期间虽然颗粒床保持转动。由于此原因也没有必要，使排出软管的末端和最高部分固定在收集环的小室的以下水平，而它们可能特别是应该提高到收集环以上的水平并保持此水平。
本发明除了适用于在高压釜消毒外，装置的模块结构具有整个色谱仪单元简单可替换性的优点。用此方法各按分离问题的种类可将准备好的转动体作为整体的色谱仪单元(模块)无延误时间地一个接着一个装在传动装置上，这样在制备CAC-过程中与此平行的已准备好另外一个模块，例如可进行装料，空气调节。
不仅能用同样的传动块与交替的色谱仪-模块操作，而圆柱体中空套也可用于接受分离介质和洗提液的排出，使适应色谱仪任务。例如圆柱体中空套及转动体在其长度上在同时应用时改变相应不同长度的间距棒。本发明同样适用于复合材料制品，在其中若干颗粒床重叠地或并列地同时进行分离，如它们在WO99/47913所描述的。本发明的基本思想和原理允许完全一般地对颗粒床和CAC-装置所作的所有改变，如它们在国际专利申请WO98/45699，WO99/12625，WO99/29388，WO99/28740和WO99/47913可公开的。关于“颗粒床”的概念此处不仅理解为在转动体的圆柱体中空套中排列的粒状色谱凝胶或树脂，而且也是一块的“单块的”，为液相色谱仪适用的分离介质，例如由陶瓷，塑料(例如嵌段聚合物)，纤维材料和诸如此类制成的。此概念也涉及两种或若干种的结合，必要时是层状的重叠排列，最好是带有相互分开的分离层的色谱分离介质，例如它从上述公开发表的文件中已知的。
以下是本发明借助于实例参考图进一步解释
图1，按本发明CAC-装置通过转动轴的纵视截面图2，图1装置底部范围的详细前视图，它带有附加的，轴状排列的洗提液管线图3，图解说明按本发明的CAC-装置浓缩过程的结果在图1可看到传动块8带有传动轴2，它与马达9的转子10相连。在传动轴2上装有转动体1。
转动体1向外封闭和用于环形色镨仪。为接纳颗粒床在转动体1有一圆柱体中空套作为颗粒床空间3，它载在转动盘4上。在此描述的结构中圆柱体中空套从上方坐在转动盘4上。如在此实例表示的，圆柱体中空套下部与底板管座11相连和在其上用一螺栓连接件12固定在转动盘上和上面用锥形顶盖13封闭。为了给内圆柱体定中心和消毒转动盘4在其上面有一中心高峰，它对准进入在底板座11底边补充形成的槽上。为了无污染地实施该方法，颗粒床空间3分限定的器件接触位置之间的接头应有补充密封34a，34b，34c，34d。
用于传动轴的扭距的传递转动体1与传动轴2可耦合。其中转动盘4包括在其下面的一个凸台(Fortsatz)，它基本上具有传动轴2的中间部件的形状和在其末端修整成轴套32，它经过自由的，按锁-钥匙-原理互补成轴套32形成的传动轴2的末端对准套上。对一个旋转可使耦合通过侧面排列的销钉33在传动轴22固定住，它在轴套32的相应空隙啮合。可以理解的是，相反的变体是适用的和满足同样的目的，在其中传动轴终止于轴套，转动盘4互补形成的凸台啮合其中。
固定在颗粒床空间3下面的转盘4中的截止条(或栅条Ruckhaltegitter)14带着颗粒床和从接着的特别是向上楔形扩大的管道15分离出来，此管道通过转盘4延伸和由颗粒床出来的液体继续引到洗提液收集环5的小室16中(图2)，有时像漏斗状流入的或向外倾斜的洗提液收集环5的小室16的底部将排出管道17(图2)从洗提液收集环引出来。在排出管道连接洗提液引出的管线18(图2)一般是塑料软管-，-必要时消毒-为洗提液收集环5和洗提液收集容器19建立连系。
洗提液引出管线18，如图2所示，优选使用波浪形卧式的“S”管，在开始洗提液引出管线18向下引出的部分18a和随后和向上弯曲部分18b之间构成一种虹吸管和以后再向下弯曲部分18c通向洗提液收集槽19。这样排列的洗提液引出管线18的软管可用简单方法制造，如借助于转动体1提高软管，环状的围绕着，必要时高度可调的支柱(图中没有示出)。
按规定的CAC-装置的传动在颗粒床空间3和每个洗提液引出管线18之间各形成一个相关的液体柱，它由于在开头时在WO99/12625的实例讨论过的特别的相互校准的在转盘4的管道15的几何形状和在洗提液收集环5的小室16之间的径向壁从不完全被切断。由于按本发明的洗提液引出管线18的虹吸管的形成使之确保，由颗粒床出来的液体柱总是至少至虹吸管，有时至跟随虹吸管后的，上面弯曲波浪状排列的洗提液引出管线18和因此维持均匀的洗提液流动。同时因此防止室16完全排空和由于室的可能不连贯的排空形成负压。也许虽然出现的很小的压力波动通过在洗提液流出管线的液柱来缓冲，这样使它不在色谱操作阶段经过滑动环密封吸入杂质空气(未消毒)。
为使无污染的洗提液引出成为可能，将转盘4密封滑动地带到两个同心滑动面上延着液提液收集环5的周围，其中槽16安置在滑动面之间和洗提液收集环5通过螺栓弹簧6对着转动盘4压紧。螺栓弹簧6放在当中，这样使弹簧匝数围着传动轴2，螺栓弹簧通过压力锤7传输压力，此压力锤与洗提液收集环5用螺栓连接件12′连接，作为压力传输块起作用。
内部平放的滑动面和在传动轴间隔的内边缘之间洗提液收集环5含有一个向外边缘倾斜的环绕的凹穴，它与转盘4的下侧形成一个空腔20，从这最深的区域由洗提液收集环5引出一个或若干个井孔。空腔一方面用于限制滑动面的尺寸和另一方面用于使滑动面的热蒸汽消毒成为可能。井孔21可使冷凝水从这里区域引走，此冷凝水是当消毒时或当色谱仪运转时收集的(例如在室温下冷却)。
在此应指出，按本发明的CAC装置优选用介质定温或恒温，特别是配备装在转动体1内部或外部的热和/或冷循环，以便根据色谱仪和采用的原料通过加热或冷却可在最佳的操作条件下进行。定温(恒温)例如可用转动体1的内圆柱体内部的恒温介质和/或用转动体1对外绝热来实现。内圆柱体也可做成夹套，通过它导入恒温介质。
转动体1与转盘4连同固定的柱头，洗提液收集环5压力锤7用螺栓弹簧6在不能旋转的底板22和不能旋转的端板之间拉紧，它用间隔棒24延着它周围相互旋紧和因此保持所需的距离。延着间隔棒24大约在转盘4的高度有个凸台，它与O-形圈密封支撑轴向轴瓦25，在其上装有一个通过螺栓连接件12与转盘连接的环状轴承转子25a和将其滑动引入。
在端板23连成一体的或与此一块相连的(如在图1的实例说明的)是柱头与在其中排列的进料管27a，27b，27c用于进料，和洗提剂的进料(Elueuten)，用于颗粒床装料，等等，(用由发酵技术配知的消毒接头)。将颗粒床3上部封闭的转动体1的端部在端板23通过一个另外的轴向滑动轴承用螺栓旋紧，环状的轴承转子25a′送到O-形环密封上，其中轴向轴瓦25′与不可转动的端板23牢固连接。
基板22包括一个中心开孔，它的内径大约相当于传动轴的直径。此中心开孔的边缘是对着一个垂直向上对准的圆柱体夹套22c形成的，它与它的内面作为导套用作转盘4的凸台32。在基板22的底边是开孔，以锥体的形式扩展，这样使CAC-模块装在传动轴2上明显的变得容易。圆柱体夹套22c在其一面被滑动密封涨圈28包围，它使基板22对压力锤7的垂直调节变得容易。在圆柱体夹套22c的端面插上一个销29，它使压力锤7对着基板旋转时安全。压力锤7有一个直通的中心孔，它在一个靠洗提液收集环5相邻的端区，相应于凸台32的直径和在其中连接的区域相当于圆柱体夹套22c的直径包括涨圈28，这样它一方面可在转盘4的凸台32上方或另一方面在涨圈28和基板的圆柱体夹套22c上方套上。在压力锤7的边缘区域7a是一个环状的向上开放的空腔，螺栓弹簧装在其中，作为轴承座用于螺栓弹簧6对基板23起作用。因压力保险在基板22上，但没有与它牢固连接，基板22对着它延着涨圈28可垂直移动或可调节，以使在任何情况下使弹簧压力和因此使洗提液收集环5和转盘4之间的滑动密封的压紧压力可以变化。其它的保险是底板22带有一个环绕的凸出部分22b，它在环状的圆柱体夹套7a的空腔中向内突出，压力锤最后与洗提液收集环通过螺栓连接12′牢固相连。
按本发明的CAC-模块与基板22和端板23之间拉紧的CAC-装置带有转动体1，洗提液收集环5，压力锤7和螺栓弹簧6，它们是装在传动块8的支架板30上。在支架板30上有一中心孔用于安装传动轴2，它的上侧边缘构成作为环绕的高峰30a，辅以与其连接的基板22的锥体22a。在解开螺栓连接31后在基板22和支架板30之间整体的CAC-模块可简单化，必要时用起重机，从传动块提升起和可用高压釜交换也可用其它CAC-模块交换。
本发明的CAC-装置基本上适用于所有可行的借助于CAC或P-CAC可解决的分离问题，特别是例如在WO99/28740中所描述的。这也包括最不同的色谱仪的凝胶或树脂，以及这种树脂和凝胶的结合，如同样在WO99/28740描述的。单块的(Monolithisch)分离材(包括嵌段聚合物)或适合于液态色谱的其它分离介质，也应包括在内。本发明的CAC-装置优选用于制备的分离目的，提纯目的和/或单个物质的浓缩目的，或有机物的混合物的浓缩目的，特别是蛋白质或来源于植物的，动物的(包括人类的)或生物技术的(例如再组合的蛋白质)蛋白质混合物浓缩目的，如部分已经在WO99/28740中介绍过。
将要处理的样品材料作为进料在一位置逐点的加入在圆柱体中空套的环隙中的分离介质中(例如色谱仪凝胶的颗粒床)和用洗提剂(例如主洗提剂和分洗提剂)通过固定相运动，其中发生吸附和解吸过程。主洗提剂通常均匀分布涂在整个环隙，例如在锥顶上，此锥顶向上将转动体的内圆柱体盖住，当分洗提剂在一定的角矩时，连接在样品进料上，同样的逐点地分布涂在环隙。除了用于进料的流入外洗提剂可作为空调液体流入，特别可作为洗涤剂，再生剂，和/或卫生剂(“消毒剂”)存在，这可按处理任务和样品材料的种类在洗涤剂-入口之前，中间和/或之后安排。这可特别用于处理生物样品材料和一方面用于处理经常有联系的许多不需要的杂质和另方面用于处理有机组分(例如蛋白质)的腐败物和易传染物具有很大意义或甚至是不可缺少的。如果这些材料对人类或动物在医学上用途有关，则其意义更大。
现在提出的是对某些分离-，提纯-，特别是浓缩的任务合适的方法，在其中样品进料和主洗提剂的流入与传统的方法交换，这叫做与通常过程相反不是主洗提剂而是要处理的样品材料分布涂在整个环隙。这样过程然后才有意义，即只有当大容量的样品材料要浸透，例如当医药的生物活性物质要浓缩和要去除杂质提纯，而这种物质在溶液中的浓度仅非常小时此过程才有意义。
这类问题可用“反向”CAC-方法(也称“Head-Space”方法)用传统的改进方法明显经济，因为例如洗提可在小的角度段(Winkelsegment)和小的区域中通过容易和快速的解吸进行。为使被分离介质吸附的样品材料有选择性的解吸，将一个或若干个分-洗提剂-入口和必要时洗涤剂，再生剂和/或消毒剂的其它流入洗提剂-入口之前，之中，和/或之后的入口排列在柱头预定的角距中。必要的情况要注意，在紧挨着的前后进行的洗提阶段和空调阶段(例如洗涤-，再生-和/或消毒阶段)各流入的洗提剂和/或空调剂紧挨着并列排列，其间无样品材料能浸入分离介质。此外可补充的或交替的使样品进料流和消毒剂流的流动速率相互协调；以达到同样的效果。
为此目的使柱配备多数的在紧挨的角距固定安装的延长小管用于液体的导入，其中按分离的任务只有一部分被利用，其它管子关闭。
此外可选择的是在另一实施方式中将比较少数的延长小管装在圆柱体中空夹套的环隙上部的导环上或在环状的导轨上(在图中未表示出)，这样它延着环的周围或导轨的周围可移动和在所需的角度位置在颗粒上可固定。为此目的延长小管可以是直线状的。它们优选通过导环或导轨垂直引入和例如用从滑动轴承技术熟知的将其固定在小管的滑动-或滚动元件上，由导环或导轨携带着。
为垂直的稳定化和为固定的定位在导环或导轨上可将小管用螺栓连接或夹子连接，在导环或导轨的上面或下面或两面夹紧。类似的其它适用悬挂系统也可用于小管上，为此它可以延着环隙的周围在颗粒床上方移动。例如小管也可用环或吊环可活动地挂在单个导环或两个重叠排列的导环上和用适当的夹子连接固定。导环或导轨也可以有进也位，在其中小管可牢固定位。在柱头中的小管和进料孔之间的连接可用柔性的，必要时加固的由惰性材料(例如塑料)制成的软管，它通过软管套管，插件弹簧闭锁器或螺旋闭锁器或类似的可拆卸的连接工具可连接在柱头的小管或进料孔上。
为选择和调节角度位置，延长小管的角距，和/或引入的液体流的流动速率的最佳条件可对每一制备处理问题在予试验范围同进行测定。这可用以下实例说明实施 用反向P-CAC浓缩蛋白质溶液一种由发酵进行微生物制备的重组人类因子VIII(缩写rFVIII)得到的，基本上无颗粒的溶液，为了浓缩其中含有的rFVIII，使用本发明的CAC-装置进行制备连续的环形色谱分析(P-CAC)。
本试验应用的CAC-装置具有含7个入口的柱头；一个主进料口，它将样品材料在内圆柱体的锥顶上方分布在颗粒床的整个环隙(洗提剂或空调剂加入区是例外)和必要时将转动体的整个端部空间(“head-space”)用样品材料充满，以及对洗涤和平衡液(150mM的NaCl)，(10.7M NaCl)、再生剂(2M NaCl)、清洗剂(月桂基硫酸钠)和消毒剂(M NaOH)各有一个进料口，在此实例中一个进料口不用。
多孔的DEAE阴离子交换凝胶(制造厂Perseptive Biosystems)用作转动体的圆柱体中空套中的颗粒床和用约2-3cm高的玻璃珠层复盖。除了主进料口，所有的进料口都配备有相应弯曲的延长小管，此小管浸没在玻璃珠层中和大约超过阴离子交换剂的凝胶床0.5至1.5cm而终止。用此方法可防止由延长小管出来的液流直接“射击”在凝胶床上和防止在其最上部区域扬起。此外也用玻璃珠作保护层和涂敷辅助使直接用延长小管直接在环隙流动的液体流速限制在相当狭的范围，这样使样品进料的涂覆经过此小管中的一个造成决定速度的步骤。此问题可通过本发明用样品进料灌满顶部空间成功的解决。
消毒是将包装好的和用脱离子水或必要时用洗涤液充满的CAC-模块夹紧在柱头的液体流入管线上或优选用可压热煮的薄膜，特别是以相应的螺栓-或插件连接形式，如它从发酵技术熟知的进行密封。同样的收集环的洗提液引出管线的软管。优选90至180根，在其末端紧密夹住。它们也可配备金属套管，它们使软管与消毒的，必要时含有密封膜的洗提液收集槽的无菌连接变得容易，例如在防火下通过刺开密封。
为热压煮的用途套管用可重复利用的保护套保护起来。这样进一步减少可能被污染的危险。
将转动体向上封闭的固定顶板还另外含有至小一个开孔，它用于热压煮时和然后冷动阶段时平衡转动体的压力。为此目的将此开孔用一可热压煮的，两面透气透湿的消毒过滤膜，例如用孔大小最大为0.45μm或此外可选择用深度过滤体系(Tiefenfilter system)，例如玻璃纤维盖住。这种压力平衡体系同样是长久以来从发酵技术熟知的。用于热压煮将整个CAC-模块在松开螺栓后，在基板和转盘之间从马达传动的传动轴，必要时用活动的起重机提升出来和放在适当大小的高压釜中。随即的热压煮过程用已知方法进行。对于在实际中大多数的用途在120℃停留时间为15-20分钟(压力约为0.15Mpa；大约为1.5大气压)就已足够。
P-CAC-过程在热压煮、冷却和流入管线无菌连接在泵上和洗提液流出管线连接在洗提收集槽上后，向连续制备的环形色谱(P-CAC)以为80mlmin的流速开始供应将样品进料的流速开始供应。用于洗涤/平衡，洗提，再生，净化和消毒的5个入口-延长小管是这样安排的，它们在唯一的一个角度段内成45度进入环隙的玻璃珠层中，这样它在此角度位置的范围阻止或完全阻样品材料涌进分离介质。用此方法可保证，在洗提区后和在空调区之间没有样品材料污染分离介质。
洗涤/平衡的流速调节在4ml/min，其它各调到2ml/min，对转动体的转动速度选择角速度为120°/小时。在约1.25小时后取样。虽然还不是最佳的工艺条件，rFVIII的浓缩已达到因子13(图3)。
在另一试验中流速是这样改变的，进料用100ml/min，洗涤/平衡和洗提各用3ml/min，再生，净化和消毒各用12ml/min进行。在角速度为120o/小时和线流速为157cm/h在3小时后开始馏份收集。蛋白质浓缩相对于原料溶液可达到因子74(表1)。
表1用P-CAC浓缩rFVIII
上面数值是标准化成原料溶剂＝OU/ml
权利要求
1.连续环形色谱装置(CAC)它带有固定的柱头，固定的洗提液收集环，一个位于其间的，围着垂直轴可旋转的转动体，它构成双圆柱体的中空夹套形状，其中含有色谱分离介质；和传动装置，其中转动体(1)在其下端与一转盘(4)相连接，它具有惯穿的垂直通道(15)并与小室(16)密封滑动地带入固定的洗提液收集环(5)上，其特征在于，转盘(4)在其背面有一凸台，它与传动装置(8)的传动轴(2)通过一个快速可松开的连接件耦联和固定的柱头，带转盘(4)的转动体(1)和随后的洗提液收集环(5)与CAC-模块相连并作为一个单元从传动装置(2)可取出。
2.按权利要求1的装置，其特征在于，转盘(4)的凸台在其末端被修整成衬套(32)，在其中衔接补充修整的传动轴(2)的末端，或相反的传动轴(2)在其末端有一轴套，在其中衔接转盘(4)的补充形成的凸台。
3.按权利要求1或2的装置，其特征在于，柱头，转动体(1)与转盘(4)和洗提液收集环(5)在基板(22)和顶板(23)之间拉紧，其中基板(22)和顶板(23)必要时被同心围着的转动体(1)排列的间距棒(24)结合在一起。
4.按权利要求3的装置，其特征在于，柱头至少有一液体流入管线(27)和优选在顶板(23)中成一整体或一块与其相连。
5.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，在洗提液收集环的背面，转盘(4)平放在一个被间隔棒(24)承载的环绕着的轴承(25)上和优选通过平放的O-环，滑动装入。
6.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，在洗提液收集环背面邻近安排压力锤(7)，它对着转盘(4)压着洗提液收集环(5)。
7.按权利要求6的装置，其特征在于，压力锤(7)在向下开口的，围绕在边缘区(7a)留出的地方有一起压力弹簧起作用的螺旋弹簧(6)，它同心的围绕传动轴(2)的轴线缠绕并重新安置在直接向下排列的底板(22)上。
8.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，转盘(4)平放在靠洗提液收集环(8)的两二同心滑动面上和洗提液收集环(5)在置于内部的滑动面之间和它的内部，在传动轴(2)相隔的边缘有一向外倾斜的凹槽，它与转盘(4)共同形成一个空间(20)，从此空间最低位置至少有一个孔(21)从洗提液收集环(5)引出。
9.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，洗提液收集环(5)有数个通过径向壁分离的小室(16)，其中每一径向壁的厚度比转盘(4)的通道(15)的直径小。
10.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，洗提液引出管线(18)，优选以柔性软管的形式连接在洗提液收集环(5)的小室(16)中，它开始是向下走和波浪状的成卧式“S”形向上和随后再向下弯曲和必要时通入洗提液收集槽(19)，其中洗提液引出管(18)的最高部分超过洗提液收集环(5)的水平。
11.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，转动体(1)的双圆柱体中的内圆柱体在其下端与底座(11)牢固连接，它平放在转盘(4)上，和与转盘至少用一个连接元件，例如螺栓，销钉或螺丝(12)不移动地连接。
12.按上述权利要求之一的方法，其特征在于，该装置配备有一定数目的延长小管，此小管安置在分离介质上面的顶部空间，在转动体(1)的圆柱体中空夹套的缝隙中向里突出，它们与液体引入管线(27a、27b)的入口相连接和必要时延着分离介质上面环隙的周围环状的移动和在所需的角度位置固定安置。
13.按上述权利要求之一的装置，其特征在于，它具有用于定温和/或恒温，特别是设置在转动体内部和/或外部的热和/或冷循环的手段。
14.在应用连续环状色谱仪(CAC)，特别是应用按权利要求1至13之一的装置，的情况下用液相色谱进行物料的提纯，分离和/或浓缩的方法；其特征在于，样品材料是一种含有物料的液体，将它均匀地分布涂在存在于转动体的圆柱体中空夹套中的色谱分离介质的整个范围，按此物料的洗提和分离介质的空调液体逐点地在预定的角度位置涂覆在分离介质上和在此位置范围防止或阻止样品材料涌入分离介质。
15.按权利要求14的方法，其特征在于，样品材料通过中心进料口加入位于分离介质上部的CAC-装置的顶部区域和优选整个顶部区域充满样品材料。
16.按权利要求14或15的方法，其特征在于，洗提液和/或空调液在角度位置涂覆在分离介质上，如此地进行选择，使其间无样品材料可涌入分离介质。
17.按权利要求14至16之一的方法，其特征在于，样品材料含有有机物，特别是天然的或重组的蛋白质或蛋白质混合物和优选至少一种空调液体用于分离介质的消毒。
18.按权利要求14至17之一的方法，其特征在于，蛋白质材料含有重组人类因子VIII和用此方法可使rFVIII浓缩至原料浓度的四倍付诸实现。
全文摘要
本发明涉及CAC－装置,它带有固定的柱头,固定的洗提液收集环,一个存在其中的围着垂直轴可旋转的转动体,其中含有色谱分离介质,和一个传动装置,其中转动体(1)在其下端与一转盘(4)连接,将它密封地滑动装入洗提液收集环(5),其中转盘(4)在其背面有一凸台,它与传动装置(8)的传动轴(2)通过一个快速可松开的连接件偶联和固定的柱头,带转盘(4)的转动体(1)和随后的洗提液收集环(5)与CAC－模块相连和作为一个单元可从传动装置(2)取出。此发明还涉及在应用本发明装置下的与CAC反向的方法,其中样品材料分布涂覆在分离介质的整个范围内。
文档编号G01N30/58GK1380974SQ01801193
公开日2002年11月20日 申请日期2001年2月24日 优先权日2000年3月7日
发明者A·普里奥, J·普里奥, J·沃尔夫冈 申请人:先前分离技术股份有限公司