专利名称：一种o157∶h7大肠杆菌抗原胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种O157:H7大肠杆菌抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
O157:H7大肠杆菌中“O”是指脂多糖的表面抗原性，按其结构可分为173种；“H7”是指鞭毛的抗原，它有57种。这样单一的检测“O”抗原或“H”抗原交叉菌都很多，不能确诊O157:H7大肠杆菌。同时检测O157和H7抗原都阳性方可确诊。目前O157:H7大肠杆菌的实验室检测方法包括生化反应常用山梨醇麦康凯琼脂、H7抗血清-山梨醇发酵培养基有助于O157:H7菌株的分离与筛选根据96％大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶，故能水解MUG，产生荧光，而O157:H7则为阴性的特征设计的MUG试验可提高筛选O157:H7特异性和敏感性。血清学反应方法有试管凝集和玻片法不适合大量流行病学调查。免疫学检测常用ELISA、IHA(间接血凝试验)、LAT(乳胶凝集试验)进行快诊。在分子生物学检测常用基因探针和多聚酶链反应(PCR)，但以上方法需在有条件的实验室内进行，需要昂贵的仪器，操作繁琐复杂、时间长、需专业人员等问题。
发明内容
(一)、要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷地同时能够检测O157:H7大肠杆菌中含有的O157和H7抗原试纸条。
本发明再一个目的是提供所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用。
(二)、技术方案本发明为一种检测试纸条，它包含(1)同时包被O157抗体、H7抗体和抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；
(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜。
本发明所述的试纸条中，O157抗体为抗O157抗原的单克隆抗体或多克隆抗体；H7抗体为抗H7抗原的单克隆抗体或多克隆抗体。
本发明所述的试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
本发明所述的试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
本发明所述的试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
本发明所述的试纸条，其中金标抗体保护膜同时具有吸水功能，选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用(见图2)。将0.5克或0.3ml的标本，放入装有稀释液的小瓶内，将试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有O157和/或H7抗原，则与试纸条上胶体金标记的O157和/或H7单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的O157和/或H7抗体结合，形成红色线条，即在“A”或“B”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条或3条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
本发明的技术方案是采用纯化的O157抗体、H7抗体和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的O157:H7大肠杆菌。
(三)、有益效果使用本发明，一份标本、一个试纸条同时能检测O157和H7两种抗原，一举三得其一能够一次性的捕获出血性大肠杆菌O157:H7；其二单独的O157阳性表明，所检测到的是含有O157的大肠杆菌；其三如果单独H7阳性，表明检测到的是含H7鞭毛的一类细菌。这为下一步的分离鉴定创造了有利条件，节省了大量人力物力，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于突发事件的大批量现场检测，适合流行病学调查，对O157:H7的感染诊断起到辅助作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(A包被O157抗体的条带；B包被H7抗体的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；从左至右依次为O157:H7阳性A、B、C三条线显色；O157阳性A、C两条线显色；H7阳性B、C两条线显色；阴性C一条线显色；无效三条线均不显色。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。
实施例2 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157单克隆抗体、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。
实施例3 O157:H7抗原联合检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，O157抗体、H7抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O157、H7单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了O157:H7大肠杆菌抗原联合检测试纸条。
实施例4 检测方法(参见图2)将0.5克或0.3ml的标本，放入装有稀释液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有O157和/或H7抗原，则与试纸条上胶体金标记的O157和/或H7单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的O157和/或H7单克隆抗体结合，形成红色线条，即在“A”或“B”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条或3条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1 临床标本检测检测可疑阳性标本52例，在用试纸条(T2法)检测的同时，以传统的细菌培养法和生化鉴定(T1法)为对照，结果见下表细菌培养法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)同时包被O157抗体、H7抗体和抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于O157抗体为抗O157的单克隆抗体或多克隆抗体；H7抗体为抗H7的单克隆抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
4.根据权利要求3所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
5.根据权利要求3所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
6.根据权利要求3所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
7.权利要求1-6之任一所述试纸条在检测O157:H7大肠杆菌中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种检测试纸条，它包含(1)同时包被O157抗体、H7抗体和质控抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记O157单克隆抗体和胶体金标记H7单克隆抗体的玻璃纤维膜。应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的O157∶H7大肠杆菌。应用本发明试纸条检测，减少了许多繁琐的程序，且方便快捷，特异准确，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器也不需专业培训，适合医院等基层单位，适合大规模的流行病学调查及应对突发事件。
文档编号G01N33/569GK1963518SQ20051008685
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司