专利名称：一种呼吸道合胞病毒抗原胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种呼吸道合胞病毒(RSV)抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
70年代国内外对RSV的诊断主要是病毒分离，但由于许多细胞对RSV不敏感，操作繁琐复杂，时间长，因此病毒分离难以做为RSV感染的有效方法；快速检测中，应用多克隆抗血清IFA(间接荧光技术)法检测患者鼻咽部脱落细胞内的呼吸道合胞病毒抗原，该方法灵敏度好，但存在非特异染色，使该方法在检测的特异性上受到很大影响。80年代单克隆抗体问世，Bell和Kim将单克隆抗体用于IFA法检测RSV抗原获得满意效果，使快速诊断的敏感性、特异性大大提高。以后还有人将IFA、EIA、ELISA三种方法对RSV进行检测，并对实验结果进行比较，结果表明呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于IFA法最优，其特异性＞95％。随着免疫技术的不断发展，先后出现了APAAP桥联酶标法、核酸扩增法(PCR)但均存在需要昂贵的仪器、操作复杂、时间长、需专业人员等问题。
发明内容
(一)、要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷检测呼吸道合胞病毒抗原的试纸条。
本发明另一个目的是提供所述试纸条在检测呼吸道合胞病毒抗原中的应用。
(二)、技术方案本发明为一种检测试纸条，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；
(2)含有胶体金标记呼吸道合胞病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜。
本发明所述的试纸条中，呼吸道合胞病毒抗体为抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体或多克隆抗体。
本发明所述的试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
本发明试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
本发明所述的试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
本发明所述的试纸条，其中金标抗体保护膜同时具有吸水功能，选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明所述试纸条在检测呼吸道合胞病毒抗原中的应用(见图2)。留取鼻咽部分泌物，放入装有细胞裂解液的小瓶内，将试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有RSV抗原，则与试纸条上胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的呼吸道合胞病毒单克隆抗体或多克隆抗体结合，形成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
本发明的技术方案是采用纯化的呼吸道合胞病毒单克隆抗体(或多克隆抗体)和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测鼻咽分泌物中的呼吸道合胞病毒。
(三)、有益效果用试纸条检测呼吸道合胞病毒抗原，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备、专业培训，结果清晰易辨；操作简单，易于推广，适合基层大批量检测，适合流行病学调查，对RSV引起的婴幼儿肺炎和急性下呼吸道感染诊断起到辅助检测作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(T包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体或多克隆抗体的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记呼吸道合胞病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线均未显色为无效。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、抗呼吸道合胞病毒抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条。
实施例2 呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、呼吸道合胞病毒抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条。
实施例3 呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、呼吸道合胞病毒抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了呼吸道合胞病毒抗原检测试纸条。
实施例4 检测方法(参见图2)留取鼻咽部分泌物，放入装有细胞裂解液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，15分钟判读结果如含有呼吸道合胞病毒抗原，则与试纸条上胶体金标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的呼吸道合胞病毒抗体结合，形成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1 临床检测结果经检测203例患有肺炎或毛细支气管炎的婴幼儿患者鼻咽分泌物标本，呼吸道合胞病毒感染，出现两条带92例，占45.3％。与目前常规应用的间接荧光法(T1)相比较，试纸条法(T2)灵敏度98.9％，特异度100％。
间接荧光法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记呼吸道合胞病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于抗呼吸道合胞病毒抗体为抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
4.根据权利要求3所述的试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
5.根据权利要求3所述的试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
6.根据权利要求3所述的试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
7.权利要求1-6之任一所述试纸条在检测呼吸道合胞病毒抗原中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种检测试纸条，它包含(1)包被抗呼吸道合胞病毒抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记呼吸道合胞病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测鼻咽分泌物中的呼吸道合胞病毒。应用本发明试纸条检测，减少了许多繁琐的程序，特异准确，且方便快捷，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器也不需专业培训，适合医院等基层单位，适合大规模的流行病学调查及应对突发事件。
文档编号G01N33/569GK1963517SQ20051008685
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司