专利名称：一种鼠疫菌f1抗原胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种鼠疫菌F1抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
目前检测鼠疫菌抗原的方法有多种如(1)细菌培养，根据细菌的形态、菌落的特征、噬菌体试验及对小鼠致病性进行鼠疫菌的检测，该方法操作复杂、繁琐、时间长。(2)按临床病型取样进行涂片，用抗体荧光染色法检测抗原，该方法需要荧光显微镜。(3)反向血凝集试验(RIHA)用于疫源地区鼠疫抗原的检测，2小时出结果，但敏感性差不如荧光方法。(4)酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法，2小时出结果，需实验室设备和专业人员。(5)PCR方法是近年来核酸工程最重要的技术，能将微量的目的DNA片段扩增到非常大的数量，敏感性极强，但需国家认证实验室，需要扩增仪，需专业人员，费用昂贵不易推广。本试纸条克服了以上方法的不足之处，操作简便快速10-15分钟出结果，结果清晰，不需要复杂的仪器设备，不需要冷藏，适合基层单位和边远地区的流行病学调查和现埸检测，满足生物反恐的需要。
发明内容
(一)、要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷地用于检测鼠疫菌F1抗原的试纸条，克服现有技术操作复杂、繁琐、时间长、需要仪器、需要专门实验室才能操作的不足。
(二)、技术方案本发明提供了一种检测试纸条，它包含
(1)包被鼠疫菌F1抗体和抗鼠IgG二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记鼠疫菌F1单克隆抗体的玻璃纤维膜。
本发明所述的试纸条中，鼠疫菌F1抗体为鼠疫菌F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体。
优选的本发明所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗体保护膜同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测鼠疫菌F1抗原中的应用。
本发明的技术方案是采用纯化的鼠疫菌F1抗体和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的鼠疫菌F1抗原单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的鼠疫菌F1抗原。
(三)、有益效果用本发明的试纸条检测鼠疫菌F1抗原，方便、快速、操作简单、结果清晰易辨、不需特殊仪器设备，，不需要冷藏，易于推广，适合基层，适合于大批量检测，适合流行病学调查，适合生物反恐的需要。对鼠疫菌引起的鼠疫起到辅助检测作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；其中，1吸水垫2硝酸纤维膜(T包被鼠疫菌F1抗体的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)
3含有胶体金标记鼠疫菌F1抗原单克隆抗体的玻璃纤维膜4金标抗体保护膜5反应支持物图2检测结果示意图。其中，从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线均未显色为无效。
具体实施例方式
通过下面给出的本发明的具体实施例和实验例可以进一步清楚地理解本发明，但不是对本发明的限定。
实施例1鼠疫菌F1抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的鼠疫F1单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了鼠疫菌F1抗原检测试纸条。
实施例2 鼠疫菌F1抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的鼠疫F1单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了鼠疫菌F1抗原检测试纸条。
实施例3 鼠疫菌F1抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.＝5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的鼠疫F1单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了鼠疫菌F1抗原检测试纸条。
实施例4 检测方法(参见图2)
将鼠肺匀浆或组织液150μl，用滴管加入实施例1试纸条“4”处，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有鼠疫菌F1抗原，则与试纸条上胶体金标记的鼠疫F1单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的鼠疫F1抗体结合，形成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1临床检测结果经检测3001例疫区鼠肺匀浆标本，鼠疫菌感染，出现两条带91例，占3％。与目前应用的RIHA法(T1a)和ELISA法(T1b)相比较，试纸条法(T2)灵敏度分别为100％、99％，特异度100％。
RIHA法(T1a)和ELISA法(T1b)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被鼠疫菌F1抗体和抗鼠IgG二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记鼠疫菌F1单克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于鼠疫菌F1抗体为鼠疫菌F1抗原的单克隆抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
4.根据权利要求3所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
5.根据权利要求3所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
6.根据权利要求3所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
7.权利要求1-6之任一所述试纸条在检测鼠疫菌F1抗原中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种用于检测鼠疫菌F1抗原的快速检测试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上包被鼠疫菌F1抗体及抗鼠IgG，结合胶体金标记的鼠疫菌F1单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法，检测标本中鼠疫菌F1抗原。应用本发明试纸条检测，操作简单，特异准确，且方便快捷，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器设备，不需要冷藏，适合基层医疗单位，适合大规模的流行病学调查，适合生物反恐的需要。
文档编号G01N33/569GK1963513SQ200510086848
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司