专利名称：一种炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条及其应用。
背景技术：
炭疽(anthrax)是由炭疽杆菌(Bacillus anthrax)引起的一种人畜共患急性传染病。牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
80年代以来，在炭疽实验诊断技术方面有了长足的发展，常用的抗体检测方法有ELISA法、酶标-SPA法、PCR法、荧光免疫法等。但这些检测技术与实际需求仍有不少的差距，主要表现在需要特殊的仪器设备，并且要求专业技术人员在专业的实验室进行检测，操作复杂，耗时长，不适宜于现场即时检测。
发明内容
(一)要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷的检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体的试纸条。发明人通过在硝酸纤维膜(NC膜)上包被荚膜抗原和荚膜抗原多克隆抗体二条带，并结合胶体金标记的荚膜抗原，实现了用试纸条快速检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体的目的，完成了本发明。克服了现有技术操作复杂、繁琐、耗时长、需要特殊的仪器、且必需专业人员才能操作的不足。
(二)技术方案本发明提供了一种检测试纸条，它包含(1)包被炭疽荚膜抗原和抗荚膜抗原多克隆抗体二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记炭疽荚膜抗原的玻璃纤维膜。
优选的，本发明所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；
(2)吸水垫；(3)金标抗原保护膜，同时具有吸水功能。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗体保护膜同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体中的应用。
本发明的技术方案是采用纯化的炭疽芽孢杆菌荚膜抗原和抗荚膜抗原多克隆抗体分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的荚膜抗原，应用膜层析双抗原夹心法的原理检测样本中炭疽芽孢杆菌荚膜抗体。
(三)有益效果本发明的有益效果是用试纸条检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体，可以提供炭疽感染的直接证据，对炭疽的诊断起到辅助检测作用。该方法简便、快捷、准确，不需特殊仪器设备，不需专业培训，检测结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合医院等基层单位的即时检测和大规模的流行病学调查。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(T包被炭疽芽孢杆菌荚膜抗原；C包被抗荚膜抗原多克隆抗体的质控条带)；3含有胶体金标记的荚膜抗原的玻璃纤维膜；4金标抗原保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线未显色为无效。
具体实施例方式
实施例1炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包炭疽芽孢杆菌荚膜多克隆抗体、炭疽芽孢杆菌荚膜抗原；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2.5cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条。
实施例2炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包炭疽芽孢杆菌荚膜多克隆抗体、炭疽芽孢杆菌荚膜抗原；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2.5cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条。
实施例3炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包炭疽芽孢杆菌荚膜多克隆抗体、炭疽芽孢杆菌荚膜抗原；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2.5cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗体胶体金检测试纸条。
实施例4检测方法(参见图2)按照炭疽诊断国家标准(GB17015-1997)实验室检测的有关规定，留取可疑患者的血清，于实施例1试纸条“4”处，用吸管加入血清3-4滴(150ul)，液体吸起上行，10-15分钟判读结果如样本中含有炭疽芽孢杆菌荚膜抗体，则与试纸条上胶体金标记的荚膜抗原形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的荚膜抗原结合形成双抗原夹心复合物，聚集而成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗体，胶体金标记的炭疽芽孢杆菌荚膜抗原继续向上爬行与包被在膜上的荚膜抗原多克隆抗体形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色质控条带。如此线不出现，说明试纸条失效。
实验例1临床检测结果经检测62例疑似病人的血清标本，试纸条法(T2)与目前应用ELISA法(T1)相比较，具体结果见下表。
ELISA法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被炭疽荚膜抗原和抗荚膜抗原多克隆抗体二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记炭疽荚膜抗原的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗原保护膜。
3.根据权利要求2所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
4.根据权利要求2所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
5.根据权利要求2所述试纸条，其中金标抗原保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
6.权利要求1-5之任一所述试纸条在检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体的胶体金检测试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上，包被炭疽芽孢杆菌荚膜抗原及荚膜抗原的多克隆抗体，结合胶体金标记的荚膜抗原，应用膜层析双抗原夹心法，检测标本中炭疽芽孢杆菌荚膜抗体。用本发明所述的试纸条检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗体，可以提供炭疽感染的直接证据，对炭疽的诊断起到辅助检测作用。该方法简便、快捷、准确，不需特殊仪器设备，不需专业培训，检测结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合医院等基层单位的即时检测和大规模的流行病学调查。
文档编号G01N33/558GK1963508SQ200510086849
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司