一种不完全抗体筛查胶体金试剂盒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗体检测技术领域，具体涉及一种不完全抗体筛查胶体金试剂盒及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着输血技术的发展，由AB0血型鉴定错误引起的速发性溶血反应发生率显著减 少，而由于输血或妊娠免疫产生的免疫抗体引起的迟发性溶血反应还时有发生。为了保证 患者的临床输血安全，患者输血前需进行抗体筛查，借W发现有临床意义的不完全抗体，对 临床安全输血具有重要的意义。
[0003] 不完全抗体筛查临床意义；虽然不规则抗体在正常人群中检出率为0. 3%?2%， 但它是引起迟发性免疫反应的主要原因。患者一旦输入具有相应抗原的红细胞，抗原、抗体 发生免疫性结合，使输入的红细胞发生溶解，即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、 黄痘和血红蛋白尿，严重时甚至危及其生命。
[0004] 不规则抗体筛查方法有多种，目前市面上的主要检测方法有；盐水法，酶法，抗人 球蛋白法，微柱凝胶法，上述方法大多具有检测时间长，操作不方便的缺点（通常先37C水 浴30分钟，再生理盐水洗涂3次，然后离也观察。），因为都要用到筛查红细胞，试剂要保存 在2-8C下，随着保存时间延长，红细胞抗原活性会降低且出现溶血现象，导致筛查红细胞 试剂的质量极其不稳定，且有效期不超过3个月。另外还有比较相近的方法是磁珠酶免疫 分析法进行血型抗体筛检，将新鲜筛检红细胞制备成磁化筛检细胞试剂，检测时将待检血 清和磁化筛检细胞赔育后，然后再与碱性磯酸酶标记的抗人球蛋白赔育，加入底物显色，终 止后借助酶标仪读值，判断结果，其过程需要洗涂至少6次和赔育3次，同样检测时间较长 (60分钟W上），操作繁杂（需要反复赔育及洗涂），且需要大型辅助设备（酶标仪），其试 剂由磁化的筛检细胞试剂组成，因此也需2-8C保存，有效期通常也不超过3个月。上述检 测方法的缺陷极大地限制了该些方法在实际临床中的应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种不完全抗体筛查胶体金试剂盒。
[0006] 本发明的另一目的在于提供上述不完全抗体筛查胶体金试剂盒的制备方法
[0007] 本发明的具体技术方案如下：
[0008] -种不完全抗体筛查胶体金试剂盒，包括：第一红细胞膜抗原金粒子溶液、第二红 细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液，第一红细胞膜抗原金粒子溶液、 第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱可W有交叉，但不 能完全一致，共包括 D、C、E、C、e、化a、JK\ M、N、S、S、巧a、Fyb、Di。、K、k、Le。、Leb和 P1 抗 原，但不局限于此；且第一红细胞膜抗原金粒子溶液、第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H 红细胞膜抗原金粒子溶液所源自的红细胞为在直接抗人球蛋白试验为阴性的健康人成人0 型红细胞；
[0009] 第一红细胞膜抗原金粒子溶液、第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗 原金粒子溶液的溶剂均为如下配方的基础液：
[0010] Iris 3.5 ?4.5g 巧樣酸钢 2.0?3.0g 浓盐酸 1.5?2.0niL 酪蛋白 3.0?8.0g 聚乙帰化咯烧丽 1.0?2.0g 庶糖 10.0?30.0g PEG20000 0.5?2.0g 叠氮钢 0.5?l.Og
[0011] 超纯水定容至1L。
[0012] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第一红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、C、E、e、化a、jk\ M、N、S、巧3、Di。、k、Leb和 P1 抗原。
[0013] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第二红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、E、C、化a、M、S、巧。、K、k、Le。和 Le b抗原。
[0014] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第H红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、C、E、C、e、N、S、Fya、Fyb、k、Le。和 P1 抗原。
[0015] 上述试剂盒的制备方法包括如下步骤：
[0016] (1)氯金酸在还原剂的作用下，聚合成大小为40?60nm的胶体金颗粒，上述还原 剂为构稼酸轴、白磯、抗坏血酸和稼酸中的至少一种；
[0017] (2)通过通过单克隆IgM抗体或多克隆抗体对在直接抗人球蛋白试验为阴性的健 康人成人0型红细胞进行检测鉴定，获得共同覆盖D、C、E、c、eJka、jK\M、N、S、s、Fya、Fyb、 Dia、K、k、Lea、Leb和P1抗原的第一红细胞、第二红细胞和第H红细胞；
[0018] (3)采用0. 1%的化Cl2溶液分别破碎第一红细胞、第二红细胞和第H红细胞，离 也弃上清、超纯水洗涂，离也弃上清，直到上清无色透明，弃上清和底层杂质，即分别得到第 一红细胞膜抗原提取物、第二红细胞膜抗原提取物和第二红细胞膜抗原提取物；
[0019] (4)将步骤（1)所得的胶体金颗粒溶液调节抑至5. 5?6. 5,再分别与步骤（3) 获得的第一红细胞膜抗原提取物、第二红细胞膜抗原提取物和第二红细胞膜抗原提取物反 应，反应结束后离也弃上清，所得沉淀分别为第一红细胞膜抗原金粒子、第二红细胞膜抗原 金粒子和第H红细胞膜抗原金粒子；
[0020] (5)将步骤（4)所得的第一红细胞膜抗原金粒子、第二红细胞膜抗原金粒子和第 H红细胞膜抗原金粒子分别用所述基础液复溶，即得所述第一红细胞膜抗原金粒子溶液、 第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液；
[0021] (6)用0. 1?0. 5%的Triton X-100溶液浸溃反应板后，将上述第一红细胞膜抗 原金粒子溶液、第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液分别分装于 对应的反应孔中，密封保存。
[0022] 所述试剂盒为干式试剂盒，所述第一红细胞膜抗原金粒子溶液、第二红细胞膜抗 原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液均干燥固定在反应孔上，其基础液配方为：
[0023] Tris 3.5 ?4.5g 巧樣酸钢 2.0~3.0g 浓盐酸 1.5?2.0mL 酪蛋白 3.0?8.0g 聚乙帰化咯烧丽 1.0?2.0g 藤糖 40.0?60雌 PEG20000 0.5?2.0g 叠氮钢 0.5?l.Og 牛血清白蛋白 2.0?6.0g
[0024] 超纯水定容至1L。
[0025] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第一红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、C、E、e、化a、jk\ M、N、S、巧3、Di。、k、Leb和 P1 抗原。
[0026] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第二红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、E、C、化a、M、S、巧。、K、k、Le。和 Le b抗原。
[0027] 在本发明的一个优选实施方案中，所述第H红细胞膜抗原金粒子溶液的抗原谱为 D、C、E、C、e、N、S、Fya、Fyb、k、Le。和 P1 抗原。
[0028] 上述干式试剂盒的制备方法包括如下步骤：
[002引 （1)氯金酸在还原剂的作用下，聚合成大小为40?60nm的胶体金颗粒，上述还原 剂为构稼酸轴、白磯、抗坏血酸和稼酸中的至少一种；
[0030] (2)通过通过单克隆IgM抗体或多克隆抗体对在直接抗人球蛋白试验为阴性的健 康人成人0型红细胞进行检测鉴定，获得共同覆盖D、C、E、c、eJka、jK\M、N、S、s、Fya、Fyb、 Dia、K、k、Lea、Leb和P1抗原的第一红细胞、第二红细胞和第H红细胞；
[0031] (3)采用0. 1%的化Cl2溶液分别破碎第一红细胞、第二红细胞和第H红细胞，离 也弃上清、超纯水洗涂，离也弃上清，直到上清无色透明，弃上清和底层杂质，即分别得到第 一红细胞膜抗原提取物、第二红细胞膜抗原提取物和第二红细胞膜抗原提取物；
[0032] (4)将步骤（1)所得的胶体金颗粒溶液调节抑至5. 5?6. 5,再分别与步骤（3) 获得的第一红细胞膜抗原提取物、第二红细胞膜抗原提取物和第二红细胞膜抗原提取物反 应，反应结束后离也弃上清，所得沉淀分别为第一红细胞膜抗原金粒子、第二红细胞膜抗原 金粒子和第H红细胞膜抗原金粒子；
[0033] (5)将步骤（4)所得的第一红细胞膜抗原金粒子、第二红细胞膜抗原金粒子和第 H红细胞膜抗原金粒子分别用所述基础液复溶，即得所述第一红细胞膜抗原金粒子溶液、 第二红细胞膜抗原金粒子溶液和第H红细胞膜抗原金粒子溶液；
[0034] 做用0. 1?0. 5%的Triton X-100溶液浸溃反应板后，将上述第一红细胞膜抗 原金粒子溶液、第