一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒及 其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 白色念珠菌（Canidia albicans)又称白假丝酵母菌，是一种条件致病菌，通常存 在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免 疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则易在局部大量生长繁殖，引起 皮肤、黏膜甚至全身性白色念珠菌感染。白色念珠菌可引起女性的外阴及阴道炎症，主要表 现为阴道分泌物粘稠、色黄或奶酪样斑片，外阴、阴道瘙痒或灼热感、豆渣样白带等临床症 状。男性患者较少见，多经性接触传播，引发男性的念珠菌性龟头炎和包皮龟头炎。
[0003] 近年来，念珠菌性阴道炎患病率居高不下，考虑与抗生素的滥用、避孕工具及卫生 用品不洁、不当等因素有关。估计75%的妇女一生至少发生1次外阴阴道白色念珠菌病， 5%~10%的妇女每年发生2次，我国各地感染率为0. 65~39%不等，且白色念珠菌是阴 道念珠菌病的主要病原体。真菌的临床耐药问题一直是国内外面临的重大问题之一，由于 抗真菌药在临床上的大量使用或不规则应用，念珠菌耐药菌株也显著增加。
[0004] 若病原菌不确定，治疗效果常不理想，复发率高，并可诱发耐药性及菌群失调，因 此快速、灵敏、准确的鉴别诊断白色念珠菌对临床治疗十分重要。
【发明内容】
[0005] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种白色念珠菌抗原胶体 金检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
[0006] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明采用以下技术方案：
[0007] 本发明的第一方面，提供一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，所 述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维 素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复 合物，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。
[0008] 优选的，所述底板为PVC底板。
[0009] 优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样 端较远一侧。
[0010] 优选的，所述检测线上包被有抗白色念珠菌单克隆抗体。
[0011] 优选的，所述质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。
[0012] 优选的，所述抗白色念珠菌单克隆抗体为Abeam?Anti-Candida albicans antibody [6401] (ab23368)，所述羊抗兔 IgG 多克隆抗体购自 MAXMED LABORATORIES INC.。
[0013] 优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲 液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液 的浓度为50-100mM。
[0014] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 10_40mM 〇
[0015] 更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括 NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种 的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml。
[0016] 更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0. 25-0. 5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为 4_8mg/ml〇
[0017] 所述预处理缓冲液的溶剂为水。
[0018] 所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1. 5~2h，取出放于36~ 38°C烘干。
[0019] 所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
[0020] 优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡 卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位 置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
[0021] 更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。
[0022] 优选的，所述检测试剂盒用于检测样品中的白色念珠菌抗原，所述样品可选自女 性阴道分泌物。
[0023] 本发明第二方面提供所述白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒的制备方法，包括如 下步骤：
[0024] 1)用胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂金标 垫，制得包含抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫；
[0025] 2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂抗白色念珠菌单克隆抗体及羊 抗兔IgG多克隆抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜；
[0026] 3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴 在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
[0027] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 10_40mM 〇
[0028] 更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括 NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种 的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml。
[0029] 更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0. 25-0. 5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为 4_8mg/ml〇
[0030] 所述预处理缓冲液的溶剂为水。
[0031] 所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1. 5~2h，取出放于36~ 38°C烘干。
[0032]所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
[0033] 本发明第三方面提供所述白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒在白色念珠菌抗原 检测领域的用途。
[0034] 本发明的有益效果为：
[0035] 本发明所提供的白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒兼具高灵敏性和高特异性，能 够快速检测白色念珠菌抗原。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适 用等优点。
【具体实施方式】
[0036] 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书 所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实 施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0037] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中 另外明确指出，单数形式"一个"、"一"和"这个"包括复数形式。
[0038] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0039] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术 领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技 术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook 等 MOLECULAR CLONING :A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001;Ausubel 等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, New York,1987 and periodic updates； the series METHODS IN ENZYMOLOGY, Academic Press, San Diego ；ffolffe, CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, Third edition, Academic Press, San Diego,1998 ；METH0DS IN ENZYMOLOGY, Vol. 304, Chromatin(P. M. ffassarman and A. P. ffolffe, eds.), Academic Press，San Diego，1999;和 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，V〇1.119, Chromatin Protocols (P. B. Becker，ed. ) Humana Press，Totowa，1999 等。
[0040] 实施例1本发明试纸卡的制备
[0041] 1)使用预处理缓冲液对金标垫进行预处理，预处理缓冲液为：18_冠醚-66mg/ml 氯化钠0. 3mg/ml，甘氨酸2. 0mg/ml的水溶液，pH = 7. 4,预处理的具体步骤为：将金标垫在 预处理液中浸泡2h，取出放于37°C烘干；然后用胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多 克隆抗体复合物溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包被抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆 抗体复合物的金标垫