，抗白色念珠菌抗体与兔IgG多克隆抗体的质量比为1 :1(人抗白色念 珠菌IgE抗体购自上海邦景实业有限公司，兔IgG多克隆抗体购自MAXMEDLABORATORIES INC.)，溶液中胶体金与复合物的质量比为5:1，溶液的浓度为10mg/ml，喷涂量为4ul/cm ;
[0042] 2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂lmg/ml的Abeam?Anti-Candida albicans antibody [6401] (ab23368)溶液和羊抗兔 IgG 多克隆抗体（购自 MAXMED LABORATORIES INC.)溶液，喷涂量为lul/cm，制得包被后的硝酸纤维素膜；
[0043] 3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴 在PVC底板上，切裁制得宽3-5mm的检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂 盒。
[0044] 实施例2对比试剂盒的制备
[0045] 对比例试纸卡的制备：采用25mM甘氨酸缓冲液预处理金标垫，其他试剂及实验方 法均同实施例1。
[0046] 1)采用25mM甘氨酸缓冲液预处理金标垫，然后用胶体金标记的抗白色念珠菌抗 体、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包被抗白色念珠菌抗体、 兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫，抗白色念珠菌抗体与兔IgG多克隆抗体的质量比为1 : 1 (人抗白色念珠菌IgE抗体购自上海邦景实业有限公司，兔IgG多克隆抗体购自MAXMED LABORATORIES INC.)，溶液中胶体金与复合物的质量比为5:1，溶液的浓度为10mg/ml，喷涂 量为 4ul/cm ;
[0047] 2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂lmg/ml的Abcam?Anti-Candida albicans antibody [6401] (ab23368)溶液和羊抗兔IgG多克隆抗体溶液，喷涂量为lul/ cm，制得包被后的硝酸纤维素膜；
[0048] 3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴 在PVC底板上，切裁制得宽3-5mm的检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂 盒。
[0049] 实施例3检测试剂盒的灵敏度实验
[0050] 取实施例1、2制得的白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒，将试剂盒放置在水平台 面上，分别检测 0? 03ng/ml、0? 05ng/ml、0? 08ng/ml、0? lng/ml、0? 2ng/ml、0? 5ng/ml 的白色 念珠菌抗原标准品，每个浓度重复5次。用吸管吸取样品液2-3滴加入到样品槽中，在滴加 样品后8-15分钟判读结果。
[0051] 表1试剂盒灵敏度结果
[0052]
[0053] 表1结果证实，本友明制得的白色念珠菌抗原股体金检测试刑盒灵敏度 < 0. 03ng/ml，具有很高的灵敏度。进一步对实施例2的检测试剂盒进行灵敏度测试得知， 实施例2的检测试剂盒灵敏度为多5ng/ml。
[0054] 实施例3
[0055] 白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒与细菌培养对比实验：
[0056] 试剂盒检测：
[0057] 待测样品为女性阴道分泌物，使用10倍体积的0. 01MpH7. 2的PBS缓冲液稀释。
[0058] 待测样品及试剂盒均平衡至室温开始检测，用滴管在每个试剂盒的加样孔内滴加 3滴样本（约120-150ul)。15分钟时判读检测结果。
[0059] 实验结果与细菌培养结果对比验证。白色念珠菌抗原检测试剂盒与阴道分泌物细 菌培养结果如表2所示：
[0060] 表 2
[0061]
[0062] 实施例4
[0063] 交叉实验：
[0064] 在白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒分别滴加制备好的粪肠球菌、屎肠球菌、大 肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、克雷伯菌、乳酸杆菌、淋病奈瑟菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、人型 支原体、解脲脲原体、金黄色葡萄球菌、链球菌及幽门螺旋菌菌液（IX 106CFU/ml)，进行交 叉实验检测，检测以上细菌是否对本试剂盒检测结果产生影响，白色念珠菌抗原胶体金检 测试剂与细菌交叉实验结果如表3所示，各细菌交叉实验中均无交叉反应发生：
[0065] 表 3
[0066]
[0067] 实施例4检测试剂盒的重复性和稳定性实验
[0068] -、试剂盒的批内和批间重复性实验
[0069] 1 ?实验方法：
[0070] 将同批和不同批次的白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒分别检测0.03ng/ml、 0. 05ng/ml、0. 08ng/ml、0. lng/ml、0. 2ng/ml、0. 5ng/ml 的白色念珠菌抗原标准品，每个浓度 重复5次，观察试剂盒的重复性。
[0071] 2?实验结果：
[0072] 经验证，白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒的批内和批间重复性为100%，假阳性 率和假阴性率均为0。
[0073] 二、试剂盒的稳定性实验
[0074] 1 ?实验目的：
[0075] 将白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒密封保存，并存放于4°C及室温（25°C左右） 下，观察不同存放温度对试剂盒稳定性的影响。
[0076] 2?实验方法：
[0077] 保存于4°C的试剂盒每周取出4盒，分别检测0? 03ng/ml、0. 05ng/ml、0. 08ng/ml、 0. lng/ml、0. 2ng/ml、0. 5ng/ml的白色念珠菌抗原标准品；保存于室温（25°C )的试剂盒每 3 天取出 4 盒，分别检测 0? 03ng/ml、0. 05ng/ml、0. 08ng/ml、0. lng/ml、0. 2ng/ml、0. 5ng/ml 的白色念珠菌抗原标准品。
[0078] 3?实验结果：
[0079] 经验证，试纸盒在4°C下可保存21个月，在室温下可保存12个月；在可保存的期 限内，试剂盒均可达到〇. 〇3ng/ml的检测灵敏度。
[0080] 综上所述，本发明所提供的检测试剂盒具有且具有很好的灵敏性，阴性本底更低， 有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
[0081] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟 悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因 此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完 成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
【主权项】
1. 一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板 表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包 含胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上包被 有检测线和质控线。2. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上，检测线 位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。3. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上包被有抗白色 念珠菌单克隆抗体。4. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，质控线上包被有羊抗兔IgG多 克隆抗体。5. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用缓冲液处理， 所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷 酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50~lOOmM。6. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述金标垫采用缓冲液处理， 所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲 液的浓度为10~40mM。7. 根据权利要求6所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液中还包括NaCl 和冠酿，所述冠酿选自二环已基-18-冠-6、15-冠酿-5、18-冠酿-6中的一种或多种的组 合，冠醚在缓冲液中的浓度为0. l_20mg/ml，NaCl在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml。8. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背 卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测 试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位 置与所述样品垫的位置相配合。9. 如权利要求1所述的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于检测样 品中的白色念珠菌抗原。10. 根据权利要求1~9任一权利要求所述的胶体金检测试剂盒的制备方法，具体包括 如下步骤： 1) 用胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物溶液喷涂经预处理的 金标垫，制得包含抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物的金标垫； 2) 在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂抗白色念珠菌单克隆抗体及羊抗兔 IgG多克隆抗体，制得包被后的硝酸纤维素膜； 3) 将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底 板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明提供一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗白色念珠菌抗体、兔IgG多克隆抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。本发明所提供的白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
【IPC分类】G01N33/558, G01N33/569
【公开号】CN104991060
【申请号】CN201510292013
【发明人】王晓丽, 姜伟民
【申请人】上海凯创生物技术有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月1日