专利名称：一种a组轮状病毒抗原胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种A组轮状病毒(RV-group A)抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
对于轮状病毒(RV)感染的诊断，经典方法是病毒分离和双份血清呈4倍增高，至今仍是临床诊断的金标准。现代生物技术的发展为RV感染的诊断提供了许多新的检测方法，如电镜或免疫电镜从粪便提取物中检测轮状病毒颗粒抗原；应用酶联免疫吸附法(ELISA)和核酸探针技术检测病毒颗粒和抗原；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)可直接检测粪便提取物中的病毒RNA；应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对轮状病毒抗原进行检测等。但以上方法均存在着操作复杂，时间长，需要昂贵的仪器、设备、需要专业人员在有条件的实验室进行等，不适合流行病学调查和现埸检测。
发明内容
(一)、要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷地检测A组轮状病毒抗原的试纸条。
本发明再一个目的是提供所述试纸条在检测A组轮状病毒抗原中的应用。
(二)、技术方案本发明为一种检测试纸条，它包含(1)包被A组轮状病毒单克隆抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记A组轮状病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜。
本发明所述的试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；
(3)金标抗体保护膜。
本发明所述的试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
本发明所述的试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
本发明所述的试纸条，其中金标抗体保护膜同时具有吸水功能，选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测A组轮状病毒抗原中的应用(见图2)。留取患者粪便，放入装有稀释液的小瓶内，将试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有A组轮状病毒抗原，则与试纸条上胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的A组轮状病毒单克隆抗体结合，形成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
本发明的技术方案是采用纯化的A组轮状病毒单克隆抗体和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测粪便中的A组轮状病毒。
(三)、有益效果用本发明试纸条检测A组轮状病毒抗原，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备、不需专业培训，结果清晰易辨；操作简单，易于推广，适合基层，适合于大批量检测，适合流行病学调查，对A组轮状病毒引起的婴幼儿腹泻的诊断起到辅助检测作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(T包被A组轮状病毒单克隆抗体的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记A组轮状病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线未显色为无效。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 A组轮状病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、A组轮状病毒单克隆抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了A组轮状病毒抗原检测试纸条。
实施例2 A组轮状病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、A组轮状病毒单克隆抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了A组轮状病毒抗原检测试纸条。
实施例3 A组轮状病毒抗原检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、A组轮状病毒单克隆抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了A组轮状病毒抗原检测试纸条。
实施例4 检测方法(参见图2)留取患者粪便，放入装有稀释液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有A组轮状病毒抗原，则与试纸条上胶体金标记的A组轮状病毒单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的A组轮状病毒单克隆抗体结合，形成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1 临床检测结果经检测186例患有腹泻婴幼儿患者粪便标本，A组轮状病毒感染，出现两条带92例，占49.5％。试纸条法(T2)与目前应用的ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法相比较，灵敏度为99％，特异度100％。
ELISA(T1a)和PAGE(T1b)法与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被A组轮状病毒单克隆抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记A组轮状病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
3.根据权利要求2所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
4.根据权利要求2所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
5.根据权利要求2所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
6.权利要求1-5之任一所述试纸条在检测A组轮状病毒抗原中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种检测试纸条，它包含1)包被A组轮状病毒单克隆抗体和抗鼠IgG二个条带的硝酸纤维膜；2)含有胶体金标记A组轮状病毒单克隆抗体的玻璃纤维膜，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测粪便中的A组轮状病毒。应用本发明试纸条检测，减少了许多繁琐的程序，且方便快捷，特异准确，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器也不需专业培训，适合医院等基层单位，适合大规模的流行病学调查及应对突发事件。
文档编号G01N33/558GK1963519SQ20051008685
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司