专利名称：一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫检测技术领域，涉及ー种检测卡，尤其涉及ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡。
背景技术：
丙型肝炎与こ型肝炎一祥是ー种慢性病毒性肝炎，但前者的致病性更为严重。全球已有2亿人受到感染，占全球人口的3. 1%。1992年国内第一次流行病学调查表明，普通人群抗HCV阳性率为3. 2%，按此计算，我国目前的HCV感染人数约为4000万。目前世界上尚 没有真正有效的HCV疫苗问世，对丙型肝炎也无真正有效的治疗药物，因此对血浆、血制品的HCV筛查一直以来就是世界范围内丙肝防治的最重要手段。世界绝大多数国家已将HCV筛查列为血液、血制品的強制性必检项目。丙型肝炎病毒(HCV)所致的丙型肝炎(HC)是ー种危害严重的传染病，HCV感染呈世界性分布，中国是HCV的高流行区，在中国大约有3-4千万名HCV感染者。HCV感染后80%形成慢性感染，并且最终有约20%-35%的感染者引起肝硬化、肝癌等肝病。目前尚无有效的疫苗能够预防HCV感染和特效的治疗药物，所以对相关高危人群(献血员、静脉吸毒者、血液透析者等)进行筛选和早期检测是控制HC发生和传播的重要手段。HCV的抗体检测是诊断HCV慢性感染和进行献血员筛查的主要方法。最早的第一代HCV抗体检测试剂所用的重组抗原clOO-3只来源于HCV基因组的非结构区NS4，它的特异性和敏感性均欠缺，但是随着检测试剂中先后加入了来自结构区C、非结构区NS3的重组抗原(第二代检测试剂)以及NS5区重组抗原(第三代检测试剂)，HCV抗体检测试剂的特异性和敏感性都得到很大提高，从而对献血员的筛查更为有效。尽管对献血员的筛查已经減少了输血后肝炎发生率，但仍有部分受血者发生输血后肝炎；另外，目前的检测试剂在低危人群中的筛查还会出现假阳性的結果，所以HCV抗体检测试剂仍然不够完善。HCV的基因组高度异质性，不同基因型之间的全序列比较有33%的变异。HCV至少能分为6个基因型，每个基因型又包含多个基因亚型。HCV基因组序列的变异和基因组编码蛋白抗原性、生物学性质的变异相关，这对于HCV的血清学和病毒学检测有重要影响。目前的商业化检测试剂所用的抗原蛋白/人工合成肽均来源于基因型1，对于非I型HCV抗体的检测可能有所影响。
发明内容本实用新型的目的是提供一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检測，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。为了解决上述技术问题，本实用新型通过下述技术方案得以解决—种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡,包括卡壳和试纸,卡壳为长方体，卡壳前方有加样孔和观察窗，试纸固定于卡壳内部。作为优选，试纸包括支持物、样品垫、胶体金垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜、胶体金垫和样品垫从里至外依次粘贴在支持物上。[0008]作为优选，硝酸纤维素膜上有包被质控线和检测线，观察窗与硝酸纤维素膜的位置相对应，加样孔与样品垫的位置相对应。作为优选，包被质控线为包被在硝酸纤维素膜上的HCV融合抗原构成。随着医学和生物技术的不断发展，目前在HCV的免疫检测中以间接法的应用最为广泛。HCV间接法原理是在固相支持物上包被重组抗原，加入待检标本，以合适的方式引入标记有特殊标记物的抗抗体，假如标本中存在HCV抗体，则HCV抗体跟包被抗原，抗抗体形成“包被抗原-HCV抗体-标记抗抗体”的三明治结构，然后通过标记抗抗体上的标记物将信号放大，得出最終判断結果。应用HCV间接法的关键之一在于包被抗原的质量，包被抗原的活性对免疫监测的灵敏度和特异性有着决定性的影响。因此包被抗原活性好坏是由抗原特点決定的。作为优选，HCV融合抗原为重组表达HCV的融合蛋白-抗原，融合蛋白-抗原在抗原上融合一段融合蛋白。抗原表达量大，有利于大量生产。这一点是本领域技术人员公知的。由于很多抗原表达形成包涵体，复性效率低，所以就要在抗原上融合一段融合蛋白，形 成融合蛋白-抗原的嵌合抗原的表达形式，表达出来的重组抗原在可溶性和表达量方面均有更好的表现，从而具备优良的生物活性。作为优选，融合蛋白-抗原使用的融合蛋白为克隆的HCV抗原融合表达。现有的融合蛋白有TRX、GST、SOD、CKS等融合蛋白。这些融合蛋白的运用在一定程度上有利于提高抗原在表达方面的性能，但是均存在一定程度的不足。例如，CKS表达量非常大，単数大部分表达在包涵体，需要复性；GST、SOD与HCV抗原蛋白融合表达结果也大多在包涵体；TRX是目前实际应用中最为常用的ー个，但使用中仍存在很多不足，例如假阳性高，包涵体。本实用新型提供了一种更具优势的融合蛋白，使用克隆的HCV抗原融合表达，在抗原表达量和可溶性方面均有明显优势，表达的融合HCV抗原应用于HCV抗体间接法检测，检测的灵敏度、特异性都有了明显提高。本实用新型的一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检測，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。在免疫检测技术领域具有良好的应用前景。
图I为本实用新型所述ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡的结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图I与实施例对本实用新型作进ー步详细描述。
实施例一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，如图I所示，包括卡壳I和试纸2，卡壳I为长方体，卡壳I前方有观察窗3和加样孔4,试纸2固定于卡壳I内部。试纸2包括支持物、样品垫、胶体金垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜、胶体金垫和样品垫从里至外依次粘贴在支持物上。硝酸纤维素膜上有包被质控线和检测线，观察窗3与硝酸纤维素膜的位置相对应，加样孔4与样品垫的位置相对应。包被质控线为包被在硝酸纤维素膜上的HCV融合抗原构成。HCV融合抗原为重组表达HCV的融合蛋白-抗原，融合蛋白-抗原在抗原上融合一段融合蛋白。融合蛋白-杭原使用的融合蛋白为克隆的HCV抗原融合表达。总之，以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，凡依本实用新型申请专利范围所作的均等变化 与修饰，皆应属本实用新型专利的涵盖范围。
权利要求1.一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，包括卡壳(I)和试纸(2)，其特征在于卡壳(I)为长方体，卡壳(I)前方有观察窗(3)和加样孔(4),试纸(2)固定于卡壳(I)内部。
2.根据权利要求I所述的ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，其特征在于试纸(2)包括支持物、样品垫、胶体金垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜、胶体金垫和样品垫从里至外依次粘贴在支持物上。
3.根据权利要求2所述的ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，其特征在于硝酸纤维素膜上有包被质控线和检测线，观察窗(3)与硝酸纤维素膜的位置相对应，加样孔(4)与样品垫的位置相对应。
4.根据权利要求3所述的ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，其特征在于包被质控线为包被在硝酸纤维素膜上的HCV融合抗原构成。
5.根据权利要求4所述的ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，其特征在干HCV融合抗原为重组表达HCV的融合蛋白-抗原，融合蛋白-抗原在抗原上融合一段融合蛋白。
6.根据权利要求5所述的ー种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，其特征在于融合蛋白-抗原使用的融合蛋白为克隆的HCV抗原融合表达。
专利摘要本实用新型属于免疫检测技术领域，涉及一种检测卡，尤其涉及一种丙型肝炎病毒重组抗原检测卡，包括卡壳和试纸，卡壳为扁平的长方体，卡壳前方有加样孔和观察窗，试纸固定于卡壳内部，试纸包括样品垫、胶体金垫和硝酸纤维素膜，从后向前依次为硝酸纤维素膜、胶体金垫和样品垫，硝酸纤维素膜上有包被质控线和检测线，观察窗与硝酸纤维素膜的位置相对应，加样孔与样品垫的位置相对应，操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强和适合现场检测，而且还具有生产周期短、产量高、成本低等优点。在免疫检测技术领域具有良好的应用前景。
文档编号G01N33/569GK202443019SQ20122006255
公开日2012年9月19日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者周文良, 殷秀飞 申请人:杭州隆基生物技术有限公司