专利名称：一种o139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种O139群霍乱弧菌抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
霍乱是由霍乱弧菌感染机体所致的一种急性传染病，其典型特征是由严重腹泻导致的体液和电解质大量丢失。霍乱弧菌根据其菌体抗原的特异性，可分为200多个血清群，近年发现其中的O139群霍乱弧菌含有与O1群霍乱弧菌相同的毒素基因，并能引起大流行，已将O139群霍乱归为霍乱同类管理。
目前O139群霍乱弧菌传统的检测方法是直接分离培养及增菌后分离培养等，操作复杂，需要专业技术人员在专业实验室进行，费时达16-24小时，无法处理大量可疑标本，因此，对于O139群霍乱弧菌的检测，远达不到逢泻必检的要求，同时在检测时间上也达不到快速筛查的目的。如PCR、乳胶凝集试验及单克隆抗体重氮基乳胶试验(DPRC)，虽然它们都能在几小时内地诊断出霍乱弧菌，具有较高的特异性和敏感性，但同时它们又存在着各种不同的缺陷，如技术条件要求高、设备比较昂贵等。针对O139群霍乱弧菌的流行现状和防治要求，对于霍乱的诊断，不但要求高的特异性和敏感性，还需要快速、简便，适于基层医疗和卫生单位使用。
发明内容
(一)、要解决的技术问题发明的目的是提供一种使用方便、快捷，能够检测O139群霍乱弧菌的试纸条，检测人类中O139群霍乱弧菌，用于O139群霍乱弧菌的辅助诊断。
(二)、技术方案本发明提供了一种检测试纸条，它包含
(1)同时包被O139群霍乱弧菌抗体和抗鼠IgG两个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记O139群霍乱弧菌单克隆抗体的玻璃纤维膜。
本发明所述的试纸条中，O139群霍乱弧菌抗体为O139群霍乱弧菌的单克隆抗体或多克隆抗体。
优选的本发明所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗体保护膜同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测O139群霍乱弧菌中的应用。
本发明的技术方案是采用纯化的O139群霍乱弧菌抗体和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测标本中的O139群霍乱弧菌。
(三)、有益效果本发明的试纸条利用单克隆抗体胶体金标记技术和膜层析技术，用于快速定性半定量检测样本中可能存在的霍乱弧菌，达到快速筛检病人，及时控制疫情的目的。同时也可用于外环境样本增菌后的快速筛查。为下一步的分离鉴定创造了有利条件，节省了大量人力物力，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于突发事件的大批量现场检测，适合流行病学调查，对O139群霍乱弧菌的感染诊断起到辅助作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图。其中1吸水垫；2硝酸纤维膜(T包被O139群霍乱弧菌抗体的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记O139群霍乱弧菌单克隆抗体的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图。其中从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线均未显色为无效。
具体实施例方式
通过下面给出的本发明的具体实施例和实验例可以进一步清楚地理解本发明，但不是对本发明的限定。
实施例1O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、O139群霍乱弧菌抗体，含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条。
实施例2O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、O139群霍乱弧菌抗体，含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条。
实施例3O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、O139群霍乱弧菌抗体，含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了O139群霍乱弧菌胶体金快速检测试纸条。
实施例4检测方法(参见图2)将标本放入装有稀释液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有O139群霍乱弧菌抗原，则与试纸条上胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的O139群霍乱弧菌抗体结合，形成红色线条，即在T处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记O139群霍乱弧菌单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
实验例 临床检测结果检测标本340例，其中阳性标本7例，非O139霍乱腹泻标本73例，腹泻门诊监测病人260例。所有标本在用试纸条(T2)检测的同时，用细菌培养方法(T1)进行检定，结果显示，7份霍乱病人的霍乱弧菌O139快速检测试纸条检测结果均为阳性，与细菌培养结果的符合率为100％；333份细菌培养结果为阴性的标本，霍乱弧菌O139快速检验试纸条检测结果为317份，阳性16份，符合率为95.20％。结果见下表。
细菌培养结果(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)同时包被O139群霍乱弧菌抗体和抗鼠IgG两个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记O139群霍乱弧菌单克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于O139群霍乱弧菌抗体为O139群霍乱弧菌的单克隆抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
4.根据权利要求3所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
5.根据权利要求3所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
6.根据权利要求3所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
7.权利要求1-6之任一所述试纸条在检测O139群霍乱弧菌中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种用于检测O139群霍乱弧菌抗原的快速检测试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上包被O139群霍乱弧菌抗体和抗鼠IgG，结合胶体金标记的O139群霍乱弧菌单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法，检测标本中O139群霍乱弧菌抗原。应用本发明试纸条检测，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于突发事件的大批量现场检测，适合流行病学调查，对O139群霍乱弧菌的感染诊断起到辅助作用。
文档编号G01N33/558GK1963520SQ200510086858
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司