一种胶体硒快速检测试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001] 一种胶体硒快速检测试纸条，属于生物学免疫层析方法的测定领域。
【背景技术】
[0002] 快速检测试纸条的使用兴起于上世纪中后期，最早使用彩色胶体乳做信号探针， 其色彩鲜艳，容易识别，但它易于凝集导致假阳性结果可能性增加；上世纪80年代胶体金 则被引入试纸条的使用，其因稳定，结果可靠而被广泛应用，但是它的制备相对复杂，成本 相对较高；上世纪90年代胶体硒也被引入快速检测试纸条，胶体硒灵敏度高，稳定性好并 且制备更为简单，价格更为低廉。均匀、球形、粒径适宜且重悬性能良好的胶体硒是制备试 纸条的前提条件，但是目前研究所制备的胶体硒不能完全满足上述要求，从而限制了成熟 稳定胶体硒试纸条的发展，因此也阻碍了胶体硒在快速诊断领域的应用。
[0003] 李志林等人(纳米硒的制备和表征，戈滅盈了童，2006 ;十二烷基硫酸钠模板法制 备纳米硒，无放盈了童，2009)采用聚乙烯醇，十二烷基硫酸钠作为模板制备出平均粒径 35nm左右的胶体硒，但形状不均一；史宏伟等人（PVA软模板法制备纳米硒，安徽·乂学学液 冷游#学廣，2009)继续采用聚乙烯醇作为模板制备制备出无定性硒粒子；王红艳等人(奢 庚聚靜#教遂邊/备/欢米濟，安徽大学学报自然科学版，2005)采用葡苷聚糖做模板制备出棒 状、毛刷装、蝌M状以及球形胶体硒；张胜义等人（Synthesis of selenium nanoparticles in the presence of polysaccharidesrifeteria/s _/<9??6?Τ5·，2004)米用壳聚糖、羧甲基纤 维素钠以及阿拉伯树胶制备出蝌蚪状、毛刷状、竹叶状以及球形胶体硒；虽然上述方法都制 备出胶体硒，但是由于其形状不规则、大小不均一、重悬性不佳等原因，使得现有方法不能 制备出形状规则，大小均一，重悬性良好的胶体硒，从而不能满足成熟稳定胶体硒快速检测 试纸条的要求，因此也阻碍了胶体硒在快速诊断领域的应用。
[0004] 本发明提供了一种胶体硒快速检测试纸条，该试纸条中的胶体硒由胶体硒纳米颗 粒和多聚糖组成，该多聚糖可以是壳聚糖、阿拉伯树胶粉、羧甲基纤维素、葡聚糖以及聚乙 烯醇。本发明还提供了一种胶体硒纳米颗粒溶液的制备方法，利用多聚糖作为模板，同时使 用还原剂抗坏血酸还原氧化剂亚硒酸，从而制备出胶体硒纳米颗粒。该胶体硒制备方法克 服了现有技术不能满足胶体硒颗粒均匀、球形、粒径适宜且重悬性能良好的困难，解决了成 熟稳定胶体硒试纸条曾经遇到的难题。本发明经过对稳定剂的反复研究，筛选到效果良好， 浓度考究，价格低廉的稳定剂及其在胶体硒中的含量要求，从而使得该胶体硒制备的试纸 条能够稳定、灵敏的检测目的物。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种胶体硒快速检测试纸条，该试纸条包括底板，样品垫，结合垫， 反应垫和吸水垫五部分组成，其中反应垫上包被有控制带和检测带，结合垫上包被有结合 了抗原或抗体的胶体硒，该胶体硒是由胶体硒纳米颗粒和多聚糖组成。
[0006] 所述多聚糖可以为阿拉伯树胶粉、羧甲基纤维素、壳聚糖、聚乙烯醇和葡聚糖，优 选羧甲基纤维素或阿拉伯树胶粉。
[0007] 所述羧甲基纤维素浓度为0. 01-0. 1% m/v，优选0. 04-0. 08% m/v。
[0008] 所述阿拉伯树胶粉浓度为0· 1-1. 0% m/v，优选(λ 2-0. 6% m/v。
[0009] 所述胶体硒的制备方法为：以羧甲基纤维素问稳定剂； I室温下于洁净的250ml烧杯中，加入98ml纯水和0. 04-0. 08g的羧甲基纤维素搅拌均匀； ?2分别加入1ml 1.6M抗坏血酸和Iml 0.2M亚硒酸，搅拌均匀；?搅拌均匀后继续反应 10分钟，以保证反应完全即可。
[0010] 以阿拉伯树胶粉为稳定剂；X室温下于洁净的250ml烧杯中，加入98ml纯水和 0. 2-0. 6g的阿拉伯树胶粉搅拌均匀；分别加入1ml I. 6M抗坏血酸和Iml 0. 2M亚硒酸， 搅拌均匀；1搅拌均匀后继续反应10分钟，以保证反应完全即可。
[0011] 本发明公开的一种胶体硒快速检测试纸条制备基于抗原抗体免疫反应原理，同时 可细分为竞争法和夹心法两种。但是无论是竞争法试纸条还是夹心法试纸条，均是由底板， 样品垫，结合垫，反应垫和吸水垫五部分组成。胶体硒跟抗原抗体的结合，均是通过半胱氨 酸的SH-，疏水作用，分子间吸引和范德华力等非共价键结合，其结合方式是相同的，因此适 合于竞争法试纸条的胶体硒具有同样适合制备夹心法试纸条的特点，适合标记免疫球蛋白 的胶体硒具有可以标记其他抗原或抗体的特点。因此，该胶体硒可用于标记各种大小分子 抗原或者抗体，且稳定性和灵敏度不会受到影响。
[0012] 本发明提供的胶体硒具有均匀、球形、粒径适宜且重悬性能良好，制备简单、价格 低廉的优势和特点，因此，采用该胶体硒制备的一种胶体硒快速检测试纸条具备了灵敏、稳 定、快速等优势，解决了现有技术中的胶体硒不稳定、重悬性能不佳、粒径不均匀从而不能 制备稳定成熟胶体硒试纸条等问题。另外在保证试纸条灵敏度、稳定性。在其余成本相等 的同时，使得免疫探针的制备方法更为简单、成本更为低廉，胶体硒的制备成本较胶体金也 大大降低。
【附图说明】
[0013] 图1为本发明试纸条示意图；1为支撑板PVC板；2为样品垫；3为硒标结合垫，4为 信号检测垫，I为检测带，4 2为控制带，5为吸水垫。
[0014] 图2为本发明检测结果示意图。其中1为控制带，2为检测带；3显示两条带均显 色，则被检样品中不含或者含有少量三聚氰胺；4控制带显色，检测带不显色，说明样品中 含有至少50 μ g/L的三聚氰胺；5显示控制带不显色的情况，则试纸条失效。
[0015] 图3为本发明试纸条检测液态奶样品结果图；C，控制带；T，检测带；1，预处理庄 园纯牛奶样品；2-7,从左至右分别为终浓度1，5,10, 50,100和500 μ g/L三聚氰胺的预处理 庄园纯牛奶样品。
[0016] 图4为本发明试纸条检测奶粉样品结果图；C，控制带；T，检测带；1，预处理 Abbott奶粉样品；2-7,从左至右分别为终浓度1，5,10, 50,100和500 μ g/L三聚氰胺的预 处理Abbott奶粉样品。
[0017] 图5为本发明试纸条检测动物食品样品结果图；C，控制带；T，检测带；1，预处理 澳博动物食品样品；2-7,从左至右分别为终浓度5,10, 50,100, 200和500 μ g/L三聚氰胺的 预处理澳博动物食品样品。
[0018] 图6为本发明试纸条交叉反应结果图；C，控制带；T，检测带；1，预处理液态奶样 品；2-5,从左至右分别为终浓度500 μ g/L的三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺、三聚氰胺二酰胺 和三聚氰胺的预处理庄园纯牛奶样品。
【具体实施方式】
[0019] 以下提供具体实施例以实现本发明所述的一种胶体硒快速检测试纸条，但不限于 这些实施例。
[0020] 实施例一胶体硒颗粒的制备 1、于干净250ml烧杯中加入98mL的去离子水，搅拌条件下加入0. 2-0. 6g阿拉伯树胶 粉，搅拌均匀。
[0021] 搅拌条件下加入ImL I. 6M的抗坏血酸水溶液和ImL 0. 2M的亚硒酸水溶液，继 续搅拌10分钟，反应体系颜色会发生渐变，逐渐由淡黄色变为橘红色，且澄清透亮，反应完 全后通过12000rpm，30min，使其粒径在40~IOOnm,球形不团聚。
[0022] 2、于干净250ml烧杯中加入98mL的去离子水，搅拌条件下加入0· 04-0. 08g羧甲 基纤维素，搅拌均匀。
[0023] 搅拌条件下加入ImL 1. 6的抗坏血酸水溶液和ImL 0. 2M的亚硒酸水溶液，继续 搅拌10分钟，反应体系颜色会发生渐变，逐渐由淡黄色变为橘红色，且澄清透亮，反应完全 后通过12000rpm，30min，形成均匀、粒径40-100nm，易于分离和重悬的胶体硒溶液。
[0024] 实施例二三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的制备 试纸条制备基于抗原抗体免疫反应原理，同时可细分为竞争法和夹心法两种。但是无 论是竞争法试纸条还是夹心法试纸条，均是由底板，样品垫，结合垫，反应垫和吸水垫五部 分组成。三聚氰胺是小分子，由于其只有一个抗原表位，因此三聚氰胺快速检测试纸条的制 备只能选择竞争法；同时正是因为其选用竞争法制备，检测难度较夹心法更大，所以其检测 更具有代表性。胶体硒跟抗原抗体的结合，均是通过半胱氨酸的SH-，疏水作用，分子间吸引 和范德华力等非共价键结合，其结合方式是相同的，因此适合于竞争法试纸条的胶体硒具 有同样适合制备夹心法试纸条的特点，适合标记免疫球蛋白的胶体硒具有可以标记其他抗 原或抗体的特点。因此，该胶体硒可用于标记各种大小分子抗原或者抗体，且稳定性和灵敏 度不会受到影响。
[0025] 1、胶体硒颗粒标记鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体 胶体硒分别加入终浓度为〇. 5-