30 μ g/mL的单克隆抗体(可于广州沃维生物科技有限 公司公司购得)，轻轻混匀10分钟，于透射电镜观察胶体硒被抗体包埋的程度，从而确定最 佳标记量。
[0026] 吸取5ml制备的胶体硒颗粒，用碳酸钾溶液调节适宜pH ; 向上述胶体硒溶液中搅拌、缓慢加入鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体，该标记量通按上述 方法确定； 反应10分钟后，加入BSA以稳定体系，继续揽祥至标记完全； 制得的硒标单克隆抗体进行高速低温（12000印111、41€)离心30分钟，弃上清，沉淀用等 体积含BSA和蔗糖的TBS缓冲液重悬，重复三次；若加入适量叠氮钠，则可4°C长期保存。
[0027] 通过该标记方法可以将胶体硒与抗原或者抗体成功结合。
[0028] 2、检测三聚氰胺胶体硒试纸条的组装 如图1所示，试纸条包括底板，样品垫，结合垫，反应垫和吸水垫五部分组成，其中反应 垫上包被有控制带和检测带，结合垫上包被有结合了抗原或抗体的胶体硒。
[0029] 将经过含BSA和Tween-20 10 mM pH 7. 4的PBS活化的玻璃纤维，干燥备用； 在NC膜上适宜距离喷涂0. 1-2. Omg/mL的三聚氰胺完全抗原检测带和0. 5-2. Omg/mL 的羊抗鼠 IgG控制带，该完全抗原与抗体制备免疫小鼠所用完全抗原不同； 将上述制备的胶体硒标记的鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体喷于结合垫上，干燥备用； 于支撑垫PVC板上依次粘贴信号检测垫、硒标结合垫、样品垫和吸水垫，得试纸条，干 燥条件保存备用。
[0030] 实施例三三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的性能检测 三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条结果判定方法（图2):当三聚氰胺胶体硒快速检测试 纸条的控制带和检测带均显色时，则被检样品中不含或者含有灵敏度以内的三聚氰胺；当 三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的控制带显色，而检测带不显色时，则被检样品中含有灵 敏度以上的三聚氰胺；无论检测带显色与否，只要控制带不显色，则三聚氰胺胶体硒快速检 测试纸条检测无效。
[0031] 三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的性能检测实验： 向庄园纯牛奶、Abbott奶粉、澳博动物食品中加入不同浓度标准的三聚氰胺,通过三聚 氰胺胶体硒快速检测试纸条检测样品中三聚氰胺浓度，从而验证三聚氰胺胶体硒快速检测 试纸条的有效性。
[0032] 所用庄园纯牛奶、Abbott奶粉、澳博动物食品通过液质联用色谱鉴定其中三聚氰 胺含量，鉴定结果为庄园纯牛奶、Abbott奶粉、澳博动物食品均为阴性样品。
[0033] 1、庄园纯牛奶中三聚氰胺检测试验：于50mL离心管中加入IOmL庄园纯牛奶 和20mL蒸馏水混匀，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀释获得分别含有 0, 1，5, 10, 50, 100和500 μ g/L的标准三聚氰胺样品，供试纸条检测使用。
[0034] 通过庄园纯牛奶中三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的检测结果（图3)可以看出， 各个三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的控制带均显色，而检测带颜色则随着牛奶中三聚氰 胺含量逐渐增加逐渐减弱，即检测不同浓度庄园纯牛奶中三聚氰胺颜色程度为：〇> 1 > 5 > 10 > 50 μ g/L;当庄园纯牛奶中三聚氰胺浓度大于等于50 μ g/L时,检测带不显色。
[0035] 因此，三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条在检测庄园纯牛奶过程中，灵敏度可达到 50 μ g/L，通过对稀释倍数的调节，则该试纸条对检测庄园纯牛奶灵敏度为150 μ g/kg。
[0036] 2、Abbott奶粉中三聚氰胺检测试验：于50mL离心管中加入2g Abbott奶粉 和40mL蒸馏水混匀，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀释获得分别含有 0, 1，5, 10, 50, 100和500 μ g/L的标准三聚氰胺样品，供试纸条检测使用。
[0037] 通过Abbott奶粉中三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的检测结果（图4)可以看出， 各个三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的控制带均显色，而检测带颜色则随着牛奶中三聚氰 胺含量逐渐增加逐渐减弱，即检测不同浓度庄园纯牛奶中三聚氰胺颜色程度为：〇> 1 > 5 > 10 > 50 μ g/L;当庄园纯牛奶中三聚氰胺浓度大于等于50 μ g/L时,检测带不显色。
[0038] 因此，三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条在检测Abbott奶粉过程中，灵敏度可达到 50 μ g/L，通过对稀释倍数的调节，则该试纸条对检测Abbott奶粉灵敏度为1000 μ g/kg。
[0039] 3、澳博动物食品中三聚氰胺检测试验：于50mL离心管中加入5g澳博动物食品和 40mL蒸馏水混匀，静置30min取上清备用，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀 释获得分别含有〇, 10, 20, 50, 100, 200和500 μ g/L的标准三聚氰胺样品，供试纸条检测使 用。
[0040] 通过澳博动物食品中三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的检测结果（图5)可以看 出，各个三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的控制带均显色，而检测带颜色则随着牛奶中三 聚氰胺含量逐渐增加逐渐减弱，即检测不同浓度庄园纯牛奶中三聚氰胺颜色程度为：〇 > 10 > 20 > 50 > 100 μ g/L;当澳博动物食品中三聚氰胺浓度大于等于100 μ g/L时，检测带 不显色。
[0041] 因此，三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条在检测澳博动物食品过程中，灵敏度可达 到 100 μ g/L，通过对稀释倍数的调节，则该试纸条对检测澳博动物食品灵敏度为800 μ g/ kg。
[0042] 根据上述三种不同样品中三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条实验结果可以得出以 下结论：本发明三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条不仅可以灵敏、快速的检测样品中是否含 有三聚氰胺，同时三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条结果清晰可辨。
[0043] 4、庄园纯牛奶交叉反应试验：于250mL烧杯中加入50mL庄园纯牛奶和IOOmL蒸馏 水混匀，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀释获得含有0和500 μ g/L的标准 三聚氰胺样品，同样的方法获得含有三聚氰胺同系物：三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺和三聚氰 胺二酰胺样品，供试纸条检测使用。
[0044] 通过庄园纯牛奶中三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条交叉反应试验的检测结果（图 6)可以看出，各个三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的控制带均显色，只有检测含有三聚氰 胺庄园纯牛奶的三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条的检测带不显色，其他三聚氰胺胶体硒快 速检测试纸条的检测带均显色，且颜色强度相当。
[0045] 因此，三聚氰胺胶体硒快速检测试纸条同三聚氰胺同系物三聚氰酸、三聚氰胺一 酰胺和三聚氰胺二酰胺没有交叉反应，可以特异性检测样品中的三聚氰胺。
[0046] 结论：该试纸条特异性强、灵敏度高、检测速度快、操作简便、携带容易、无需特殊 设备、无需专业培训、结果清晰易辨。
【主权项】
1. 一种胶体硒快速检测试纸条；该试纸条包括底板，样品垫，结合垫，反应垫和吸水 垫，其中反应垫上包被有控制带和检测带，结合垫上包被有结合了抗原或抗体的胶体硒，其 特征在于：所述胶体硒含有胶体硒纳米颗粒和多聚糖。
2. 根据权利要求1所述的一种胶体硒快速检测试纸条，其特征在于，所述多聚糖为羧 甲基纤维素或阿拉伯树胶粉。
3. 根据权利要求2所述的一种胶体硒快速检测试纸条，其特征在于，所述羧甲基纤维 素浓度为 〇? 01-0. 1% m/v。
4. 根据权利要求2所述的一种胶体硒快速检测试纸条，其特征在于，所述阿拉伯树胶 粉浓度为〇? 1-1. 〇% m/v。
5. 根据权利要求3所述的一种胶体硒快速检测试纸条，其特征在于，所述羧甲基纤维 素浓度为 〇. 04-0. 08% m/v。
6. 根据权利要求4所述的一种胶体硒快速检测试纸条，其特征在于，所述阿拉伯树胶 粉浓度为〇? 2-0. 6% m/v。
【专利摘要】本发明涉及一种胶体硒快速检测试纸条。所述胶体硒快速检测试纸条是由底板、样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫五部分组成，其中反应垫上包被有检测带和控制带，结合垫上包被有与抗原或抗体结合的胶体硒。其中所用胶体硒是由胶体硒纳米颗粒和稳定剂组成，该稳定剂为多聚糖，例如羧甲基纤维素和阿拉伯树胶粉；所述胶体硒纳米颗粒呈均匀球形，粒径大小为40-100nm，稳定性良好。本发明制备的试纸条特异性强、灵敏度高、检测速度快、操作简便、携带容易、无需特殊设备、无需专业培训、结果清晰易辨。
【IPC分类】G01N33-577, G01N33-543
【公开号】CN104807999
【申请号】CN201410041426
【发明人】李红玉, 王志增, 赵阳, 张海龙, 车景敏, 包艳芳, 徐志良, 支德娟, 李洋
【申请人】兰州大学
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2014年1月28日