专利名称：一种水稻种子的真伪与新旧鉴定方法
技术领域：
本发明涉及水稻种子领域，特别涉及一种水稻种子的鉴定方法。
背景技术：
目前，判断水稻种子的真伪、新旧时，主要通过测量发芽率，如高渗发芽法，或采用同功酶谱分析法等。高渗发芽法的原理是种子在高渗溶液中的发芽能力与其活力呈显著正相关，据此通过检测种子活力来鉴定水稻种子新旧。同功酶谱分析法的原理是同工酶是基因表达的产物，直接反映生物间的遗传差异和系统发育过程中的遗传变异，据此用同工酶电泳分析技术进行种子的真伪鉴定。但是这两种方法存在如下缺点一是时间长，例如用高渗发芽法测量种子的新旧程度需要一个星期，同功酶谱分析法有时需长达一个星期以上；二是种子用量较大，进行单一指标测量，不利于稀有种子的鉴定。
专利号为00117133.X的发明专利“水稻种子的鉴定方法”中公开了一种通过测量水稻种子吸水后的超微弱发光强度来鉴定水稻种子的新与旧、真与伪的方法。但这种鉴定水稻种子的测量时间较长，所需时间约1小时左右；而且测量的是水稻种子吸水后所发出的微弱光，所以测量准确性较差、灵敏度也较低。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种测量速度快、方法简单、测量灵敏度高和准确性高的水稻种子的鉴定方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现本发明提出了一种水稻种子的真伪鉴定方法，即将待测水稻种子吸胀初期在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度变化曲线与已知水稻种子在同一条件下测得的化学发光强度变化曲线比较，鉴定待测水稻种子的真伪。
本发明提出了一种水稻种子的新旧鉴定方法，即将待测水稻种子吸胀初期在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度的平均值与已知值相比，鉴定待测水稻种子的新旧。
测量水稻种子吸胀初期在化学发光试剂介导下化学发光强度变化曲线包括下述步骤(1)将水稻种子去壳研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后将水稻种子粉末浸没在化学发光探针试剂溶液中，测量水稻种子的化学发光强度。
测量10～20分钟得到的水稻种子化学发光强度变化曲线的特异性最明显。
在18～30℃下测量水稻种子化学发光强度变化曲线的准确性较高。
所述化学发光探针试剂可采用鲁米诺、光泽精、海萤荧光素类似物(CLA)或其衍生物(MCLA、FCLA)；优选海萤荧光素类似物或其衍生物；更优选海萤荧光素衍生物。海萤荧光素类似物(CLA)或其衍生物(MCLA、FCLA)只与超氧阴离子(·O2-)或者单线态氧(1O2)发生特异性的化学发光反应，不与生物机体内的过氧化氢(H2O2)或者羟自由基(·OH)发生反应，可有效降低酶、·OH等干扰物质的影响，而且海萤荧光素衍生物的化学发光效率更高。
测量水稻种子的化学发光强度可采用自制或市售的单光子计数测量装置，比如日本“HAMAMATSU”公司制造的单光子计数仪、美国“EG&G”公司制造的单光子计数仪。
本发明的原理植物的细胞膜上存在着NADPH氧化酶，这种酶能催化NADPH与氧气反应产生超氧阴离子，是种子萌发早期的活性氧自由基的主要来源。加水后，不同的水稻种子产生的活性氧数量随时间的变化不同；相同的水稻种子如果代谢越旺盛，产生的活性氧就越多。化学发光探针试剂可与水稻种子代谢过程中产生的活性氧发生化学发光反应，因此这种化学发光的强度即可反映水稻种子的活性氧含量，从而反映出水稻种子的真伪和新旧。
将不同水稻种子去壳研磨成粉末，在加水吸胀的最初几分钟内，水稻种子在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度有明显特异性，所以利用这种化学发光特异性可以快捷地、定性和定量地鉴定水稻种子的真伪与新旧。
同一品种的水稻种子，吸胀初期其化学发光探针试剂介导的化学发光强度变化曲线有一致性，依据这一特异性可将待测水稻种子的化学发光强度变化曲线特性与已知样品对比，从而判断未知水稻种子的真伪。
同一品种但新旧程度不同的水稻种子，其化学发光探针试剂介导的化学发光强度不同，即新旧程度不同的同品种水稻种子的加水后几分钟内化学发光强度的平均值不同，依据这一特异性可判断水稻种子的新旧；水稻种子愈新，活力越高，其加水后化学发光探针试剂介导的化学发光强度越大。
化学发光强度平均值Iavr=1t∫0tptdt,]]>pt为化学发光强度(单位为计速率即cps)，t为时间。在正常的储存条件(即相对湿度40～50％，温度10～25℃)下，储存6个月的水稻种子化学发光强度的平均值Iavr的正常范围为150～180cps；储存12个月的水稻种子化学发光强度的平均值Iavr的正常范围为100～130cps；储存18个月的水稻种子化学发光强度的平均值Iavr的正常范围为50～80cps。
本发明与现有技术相比，具有如下优点1、本发明利用了吸胀期最初几分钟内水稻种子在化学发光探针试剂介导下化学发光的明显特异性，简便、快速、定量地测定水稻种子活力，判断其真伪和新旧。
2、本发明所使用的化学发光测定法，灵敏度很高；而且由于本方法所选用的化学发光探针试剂只发生特异性的化学发光反应，所以测量的准确性也很高。
3、本发明所利用的测量装置简单，投资较少，实现容易，操作简便。
4、本发明种子用量极少。
5、本发明的鉴定时间短，仅需10～20分钟。
图1是储存6个月的水稻种子在以海萤荧光素衍生物MCLA为化学发光试剂介导下的化学发光强度变化曲线图。
图2是储存6个月、12个月和18个月的水稻种子在以海萤荧光素衍生物MCLA为化学发光试剂介导下的化学发光强度变化曲线图。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1鉴定1号、2号水稻种子的真伪首先选取所要检测的大小一致、种皮完好的干水稻种子，测量前存储期间相对湿度50％。测量时，将水稻种子去壳研磨成粉末放入2毫升石英比色皿，置于暗箱中，然后加海萤荧光素衍生物(MCLA)溶液1毫升，使种子粉末全部被水浸没，再用自制的单光子计数仪测量其化学发光强度20分钟，测量温度为30(±2)℃，相对湿度50(±5)％；得到图1所示的化学发光强度变化曲线1(对应1号种子)、曲线2(对应2号种子)。
将图1的曲线与已知曲线比较，鉴定出曲线1代表丰丝占种子，曲线2代表丰秀占种子。
实施例2鉴定3号、4号、5号丰丝占水稻种子的储存时间(即新旧程度)首先选取所要检测的大小一致、种皮完好的干水稻种子，测量前存储期间相对湿度45％。测量时，将水稻种子去壳研磨成粉末放入2毫升石英比色皿，置于暗箱中，然后加海萤荧光素衍生物(MCLA)溶液1毫升，使种子粉末全部被水浸没，再用自制的单光子计数仪测量其化学发光20分钟，测量温度25(±2)℃，相对湿度45(±5)％；得到图2所示的化学发光强度变化曲线3(对应3号种子)、曲线4(对应4号种子)、曲线5(对应5号种子)。
对开始测量后5分钟的化学发光强度取平均值，则有3号种子的化学发光强度的平均值为167cps，由此鉴定出该种子存储时间是6个月；4号种子的化学发光强度的平均值为121cps，由此鉴定出该种子存储时间是12个月；5号种子的化学发光强度的平均值为58cps，由此鉴定出该种子存储时间是18个月。
权利要求
1.一种水稻种子的真伪鉴定方法，其特征在于将待测水稻种子吸胀初期在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度变化曲线与已知水稻种子在同一条件下测得的化学发光强度变化曲线比较，鉴定待测水稻种子的真伪。
2.根据权利要求1所述的水稻种子的真伪鉴定方法，其特征在于测量水稻种子吸胀初期在化学发光试剂介导下的化学发光强度变化曲线包括下述步骤(1)将水稻种子去壳研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后将水稻种子粉末浸没在化学发光探针试剂溶液中，测量水稻发种子的化学发光强度。
3.根据权利要求1或2所述的水稻种子的真伪鉴定方法，其特征在于所述的化学发光强度变化曲线是测量10～20分钟得到曲线。
4.根据权利要求1或2所述的水稻种子的品种鉴定方法，其特征在于测量温度为18～30℃。
5.根据权利要求1或2所述的水稻种子的真伪鉴定方法，其特征在于所述化学发光探针试剂为鲁米诺、光泽精、海萤荧光素类似物或其衍生物。
6.一种水稻种子的新旧鉴定方法，其特征在于将待测水稻种子吸胀初期在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度的平均值与已知值相比，鉴定待测水稻种子的新旧。
7.根据权利要求6所述的水稻种子的新旧鉴定方法，其特征在于测量水稻种子吸胀初期在化学发光试剂介导下的化学发光强度变化曲线包括下述步骤(1)将水稻种子去壳研磨成粉末，放入透光容器，置于暗箱中；(2)然后将水稻种子粉末浸没在化学发光探针试剂溶液中，测量水稻发种子的化学发光强度。
8.根据权利要求6或7所述的水稻种子的新旧鉴定方法，其特征在于所述的化学发光强度变化曲线是测量10～20分钟得到曲线。
9.根据权利要求6或7所述的水稻种子的新旧鉴定方法，其特征在于测量温度为18～30℃。
10.根据权利要求6或7所述的水稻种子的新旧鉴定方法，其特征在于所述化学发光探针试剂为鲁米诺、光泽精、海萤荧光素类似物或其衍生物。
全文摘要
本发明公开了一种水稻种子的真伪与新旧鉴定方法，通过测量水稻种子吸胀初期在化学发光探针试剂介导下的化学发光强度变化曲线特性和平均强度来鉴定种子的真伪和新旧。本方法能简便、快速、定量地测定水稻种子活力，判断其真伪和新旧；测量装置简单，投资较少，实现容易，操作简便。
文档编号G01N1/28GK1865938SQ20061003589
公开日2006年11月22日 申请日期2006年6月12日 优先权日2006年6月12日
发明者邢达, 黎坚 申请人:华南师范大学