专利名称：分析分离泉多普利及杂质的hplc方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，涉及泉多普利原料药及其制剂中的杂质的分析分 离方法。本发明用高效液相色谱法分离分析泉多普利原料药及其制剂中引入的中 间体以及光学异构体杂质，用该方法可以快速地分析泉多普利原料药以及含泉多 普利制剂的杂质。
技术背景泉多普利是不含巯基的血管紧张素转化酶抑制剂，治疗原发性高血压和继发 性高血压症。其结构式为-其光学异构体杂质的结构式为:其中间体的结构式分别为:<formula>formula see original document page 3</formula><formula>formula see original document page 3</formula>CQ2EtCH3中间体4对于泉多普利的光学异构体杂质和药物合成过程的中间体，是需要进行质量 控制的。实现泉多普利光学异构体杂质和中间体的分离分析，是泉多普利原料药 和制剂质量控制的关键。经反复试验发现，用C18色谱柱，以一定配比的甲醇-缓冲液为流动相，可以将泉多普利的光学异构体杂质及其中间体进行有效分离，从而可以准确控制泉 多普利原料药和制剂的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离分析泉多 普利光学异构体杂质和其中间体。 发明内容本发明的目的在于提供一种分离分析泉多普利光学异构体杂质和其中间体 的高效液相色谱方法，从而实现泉多普利光学异构体杂质及其中间体的分离测 定。本发明所说的用高效液相色谱法分离分析泉多普利光学异构体杂质及其中 间体的方法，是采用十八垸基键合硅胶为填料的色谱柱，甲醇-(磷酸二氢钠缓 冲液，稀磷酸调pH至一定配比的有机相-缓冲液为流动相。上述所说的手性色谱柱选自C18色谱柱。本发明的有机相选自下列化合物甲醇、乙腈。本发明的方法，有机相-缓冲液的体积比为80 : 20 (v/v) 60 : 40 (v/v)。 上述所说的缓冲液选自磷酸盐缓冲液，浓度为0.01 mol/L 0.05 mol/L。 本发明的方法，缓冲液的pH范围为2.5 4。 本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现(1) 分别取泉多普利，及各中间体和光学异构体样品适量，置于容量瓶中， 用甲醇溶解，配制成每l mL含泉多普利，光学异构体及各中间体0.2mg的 混合样品溶液。(2) 设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为208nm，色谱柱柱温箱为室温o(3) 取(I)的样品溶液IO nL注入液相色谱仪，完成泉多普利及其中间体和光 学异构体的分离与分析。糾高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp, SPD-M10Avp， 色谱柱C18 (250mmx4.6mm)色谱柱流动相甲醇一 (0.01 mol/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至2.5) =72 : 28(v/v)。 流速s 1.0mL/min柱温室温检测波长208 nm进样体积10 pL本发明采用C18 (250mmx4.6mm)色谱柱，能够有效的分离分析泉多普利中间体及其光学异构体(杂质)；选择甲醇溶解样品，确保了溶液的稳定性；选择进样体积10pL，柱温为室温，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了含泉多普利中间体及其光学异构体的原料药及制剂的分析与分离问题，从而确保了泉多普利原料药及其制剂的质量可控。(结果见附图I)
图l最优选条件的HPLC1中1号峰为中间体1、2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利 主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中间体3，可以看出 在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间体完全分离开来， 且泉多普利主峰在8 min左右。图2流动相为乙腈一缓冲液=70 : 30的HPLC2中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利 主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中间体3，可以看出 在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间体完全分离开来， 且泉多普利主峰在9 min左右。图3流动相为甲醇一缓冲液-70:30的HPLC3中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利 主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中间体3,可以看出 在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间体完全分离开来， 且泉多普利主峰在11 min左右。图4缓冲液为pH4的HPLC4中1号峰为中间体l、 2号峰为中间体2和中问体4， 3号峰为泉多普利 主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中间体3，可以看出 在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间体完全分离开来， 且泉多普利主峰在9 min左右。图5 离子浓度为0.05mol/L的HPLC5中1号峰为中间体l、 2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利 主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中间体3，可以看出 在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间体完全分离开来， 且泉多普利主峰在8 min左右。
具体实施例方式
实施例1 仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10Av; ， SPD-10Av; ; 色谱柱C18 (250薩x4.6mm);流动相乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至2.5) =60:40 流速1.0mL/min; 检测波长208 nm;柱温室温； 进样体积10pL。实验步骤分别称取各中间体与泉多普利及其光学异构体各5 mg，置于25 mL容量瓶 中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中 间体及泉多普利及其光学异构体各5 mg，分别置于6个25 mL容量瓶中，加流 动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图2，图中1号峰为中间体1、2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中 间体3，可以看出在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间 体完全分离开来，且泉多普利主峰在9min左右。实施例2 仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10AV/7， SPD-10Avp;色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至2.5) =70:30 流速1.0mL/min; 检测波长208 nm;柱温室温； 进样体积10pL。实验步骤分别称取各中间体与泉多普利及其光学异构体各5 mg，置于25 mL容量瓶 中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中 间体及泉多普利及其光学异构体各5 mg,分别置于6个25 mL容量瓶中，加流 动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图3，图中1号峰为中间体1、2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中 间体3，可以看出在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间 体完全分离开来，且泉多普利主峰在llmin左右。实施例3 仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10A甲，SPD-10Av; ; 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至4) =75:25 流速1.0mL/min; 检测波长208 nm; 柱温室温；进样体积10pL。实验步骤分别称取各中间体与泉多普利及其光学异构体各5 mg，置于25 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中 间体及泉多普利及其光学异构体各5 mg，分别置于6个25mL容量瓶中，加流 动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图4，图中1号峰为中间体1、2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中 间体3，可以看出在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间 体完全分离开来，且泉多普利主峰在9min左右。实施例4 仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10Av; ， SPD-10Avp; 色谱柱C18 (250mmx4.6腿);流动相甲醇—(0.05mol/L磷酸二氢钠，稀磷酸调pH至2.5) =75:25 流速1.0mL/min; 检测波长208 nm;柱温室温； 进样体积10pL。 实验步骤分别称取各中间体与泉多普利及其光学异构体各5 mg，置于25 mL容量瓶 中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中 间体及泉多普利及其光学异构体各5 mg，分别置于6个25 mL容量瓶中，加流 动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图5，图中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体2和中间体4， 3号峰为泉多普利主峰，4号峰为泉多普利光学异构体(杂质)峰，5号峰为中 间体3，可以看出在该条件下泉多普利主峰可以和其光学异构体杂质和4个中间 体完全分离开来，且泉多普利主峰在8 min左右。
权利要求
1. 一种分离分析泉多普利的高效液相色谱法，其特征在于采用烷基键合色谱柱，有机相-缓冲液为流动相。
2. 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述的垸基键合色谱柱，选自C8色 谱柱和C18色谱柱，优选C18色谱柱。
3. 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述的有机相选自甲醇，乙腈，优选 甲醇。
4. 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述的有机相一缓冲液的比例范围为 80 : 20 (v/v) 60 : 40 (v/v)，优选75 : 25 (v/v) 70 30 (v/v)，最优选 72 : 28 (v/v)。
5. 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述的缓冲液选择磷酸盐缓冲液和醋 酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，最优选磷酸二氢钠缓冲液。
6. 根据权利要求l所述方法，其特征在于选择缓冲液的pH范围为2 4，优选 pH范围为2 3，最优选pH2.5。
7. 根据权利要求1所述方法，其特征在于所述的缓冲液的浓度选择范围为0.01 mol/L 0.05 mol/L，优选浓度为0.01 mol/L 0.02 mol/L,最优选浓度为0.01 mol/Lo
8. 根据权利要求l所述方法，其特征在于所述的方法包括以下几个步骤(1) 分别取泉多普利，及各中间体和光学异构体样品适量，置于容量瓶中， 用甲醇溶解，配制成一定浓度的混合样品溶液。(2) 设置流动相流速为0.4~1.2 mL/min，检测波长为208 nm,色谱柱柱温箱 为室温。(3) 取(1)的样品溶液2-50 ixL注入液相色谱仪，完成泉多普利及其中间体和 光学异构体的分离与分析。
全文摘要
本发明公开了一种泉多普利原料药及其制剂中的杂质的分析分离的高效液相色谱法方法，采用烷基键合色谱柱和有机相-缓冲液为流动相，可以快速地分析泉多普利原料药及其制剂中引入的中间体以及光学异构体杂质。
文档编号G01N30/02GK101271086SQ20071006457
公开日2008年9月24日 申请日期2007年3月21日 优先权日2007年3月21日
发明者杨 胡 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司