专利名称：Hplc法分析分离盐酸兰地洛尔及其中间体的方法
技术领域：
本发明涉及盐酸兰地洛尔分析与分离方法，尤其是一种高效液相色谱法。
技术背景盐酸兰地洛尔用于手术时心动过速性心率失常的紧急处置，如心房纤维性颤 动，心房扑动基窦性心动过速等，其结构式为o在其合成的过程当中会引入四个中间体，其结构式分别为OH对于合成盐酸兰地洛尔的过程中引入的中间体杂质，不论是在原料药还是制 剂的过程中都需要进行控制，因此发现一种盐酸兰地洛尔分析分离方法具有现实 意义。申请人发现，用以十八垸基键合硅胶为固定相的色谱柱(C18 (250mmx4.6 mm))，采用乙腈一 (0.02mol/L憐酸二氢钠，0.01mol/L的十二垸基硫酸钠)=50:50为流动相，可以将盐酸兰地洛尔及其杂质进行有效分离，从而可以准确控 制盐酸兰地洛尔原料药及制剂的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析 盐酸兰地洛尔的纯度和含量并能有效的控制中间体杂质。 发明内容本发明的提供一种分析分离盐酸兰地洛尔及其中间体杂质的高效液相色谱 方法，从而实现盐酸兰地洛尔及其中间体杂质的分离测定。本发明所说的用高效液相色谱法分析分离盐酸兰地洛尔及其中间体杂质的 方法，是采用以烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，以一定比例的有机相一离子对 试剂缓冲液为流动相。上述所说的烷基键合硅胶为固定相的色谱柱选自辛基键合硅胶或十八烷基 键合硅胶为固定相的色谱柱，优选十八烷基键合硅胶的色谱柱。。本发明的流动相中的有机相选自乙腈或甲醇，优选乙腈。本发明的方法，有机相一离子对试剂缓冲液的比例为40:60 60:40，优选50 : 50。本发明采用的离子对试剂缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，最优选磷酸二氢钠缓冲液，缓冲液的浓度范围为0.01mol/L 0.05 mol/L，优选0.01 mol/L 0.03 mol/L，最优选0.02 mol/L。本发明采用的离子对试剂选自10 12个碳的垸基磺酸钠或硫酸钠，离子对 试剂的浓度范围为0.01mol/L 0.05mol/L，优选0.01 mol/L。本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现(1) 取待处理样品适量，用甲醇溶解，配制成每0.2mg/ml的混合样品溶液。(2) 设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为204 nm,色谱柱温度为室温。(3) 取(l)的样品溶液10 注入液相色谱仪。本发明通过选择适当的固定相和流动相，以及适当的测定条件，为准确的完成盐酸兰地洛尔分离分析提供可一种稳定的方法
图l最优选条件的HPLCl中l号峰为中间体l、 2号峰为中间体4， 3号峰为中间体2， 4号峰为 盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条fKF盐酸兰地洛尔主峰 可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在11 min左右。图2流动相为甲醇一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L十二垸基硫酸钠) =60 : 40的HPLC2中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体4， 3号峰为中间体2， 4号峰为 盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件下盐酸兰地洛尔主峰 可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在10min左右。图3流动相为乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L十二垸基硫酸钠) =45 : 55的HPLC3中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体4， 3号峰为中间体2， 4号峰为 中间体3， 5号峰为盐酸兰地洛尔主峰；可以看出在该条件下盐酸兰地洛尔主峰 可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在20min左右。图4流动相为乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L癸垸磺酸钠)= 50 : 50的HPLC4中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体4， 3号峰为中间体2， 4号峰为 盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件下盐酸兰地洛尔主峰 可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在9min左右。图5流动相为乙腈一 (0.05mol/L磷酸二氢钠，0.05mol/L十二烷基磺酸钠) =50 : 50的HPLC5中1号峰为中间体1、 2号峰为中间体4， 3号峰为中间体2， 4号峰为 盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件下盐酸兰地洛尔主峰 可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在11 mm左右。
具体实施例方式
实施例l仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10Av户，SPD-10Ayp; 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L十二烷基硫酸钠)=60:40流速1.0mL/min; 检测波长204 nm;柱温室温；进样体积10|iL。 实验步骤分别称取各中间体与盐酸兰地洛尔各5 mg,置于25 mL容量瓶中，加流动 相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及盐酸 兰地洛尔各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图2，图1中1号峰为中间体l、 2号峰为中间体4， 3号峰 为中间体2， 4号峰为盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件 下盐酸兰地洛尔主峰可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在 11 min左右。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10A甲，SPD-10A甲；色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L十二烷基硫酸钠)=45 55;流速1.0mL/min; 检测波长204 nm;柱温室温； 进样体积10pL。 实验步骤分别称取各中间体与盐酸兰地洛尔各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动 相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及盐酸 兰地洛尔各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图3，图中l号峰为中间体l、 2号峰为中间体4， 3号峰为 中间体2， 4号峰为中间体3， 5号峰为盐酸兰地洛尔主峰；可以看出在该条j牛下 盐酸兰地洛尔主峰可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在206min左右o 实施例3仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10Avp， SPD-10A， 色谱柱C18 (250mmx4.6mm);流动相乙腈一 (0.01mol/L磷酸二氢钠，0.01mol/L癸烷磺酸钠)=50 : 50; 流速1.0mL/min; 检测波长237 nm;柱温室温； 进样体积lOpL。实验步骤分别称取各中间体与盐酸兰地洛尔各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动 相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及盐酸 兰地洛尔各5mg,分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图4，图中l号峰为中间体l、 2号峰为中间体4， 3号峰为 中间体2， 4号峰为盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件下 盐酸兰地洛尔主峰可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在9 min左右0 实施例4仪器与条件高效液相色谱仪日本岛津LC-10Av; ， SPD-10Avp; 色谱柱SAX (250mmx4.6mm)强阴离子交换柱；流动相乙腈一 (0.05mol/L磷酸二氢钠，0.05mol/L十二垸基磺酸钠)=50 50;流速1.0mL/min; 检测波长204 nm;柱温室温； 进样体积10pL。实验步骤分别称取各中间体与盐酸兰地洛尔各5 mg，置于25mL容量瓶中，加流动 相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及盐酸 兰地洛尔各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图5，图中l号峰为中间体l、 2号峰为中间体4， 3号峰为 中间体2， 4号峰为盐酸兰地洛尔主峰，5号峰为中间体3;可以看出在该条件下 盐酸兰地洛尔主峰可以和四个中间体完全分离开来，且盐酸兰地洛尔主峰在9 min左右o
权利要求
1. 一种分离分析盐酸兰地洛尔的高效液相色谱方法，其特征在于以烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，以有机相-离子对试剂缓冲液为流动相。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于选择辛基键合硅胶或十八烷基键合 硅胶为固定相的色谱柱，优选十八垸基键合硅胶的色谱柱。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机相选自甲醇或乙腈，优选 乙腈。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机相与离子对试剂缓冲液的 比例范围为40 : 60 60 40，优选50 50。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的离子对试剂缓冲液选自磷酸 盐缓冲液、醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，最优选磷酸二氢钠缓冲液。
6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的离子对试剂选自10 12个碳 的烷基磺酸钠或硫酸钠，优选十二烷基磺酸钠或十二烷基硫酸钠，最优选十 二烷基硫酸钠。
7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于缓冲液的浓度范围为0.01 mol/L 0.05 mol/L，优选0.0mo/L 0.03 mo/L，最优选0.02 moI/L。
8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于离子对试剂的浓度范围为0.01 mol/L 0.05 mol/L，优选0.01 mol/L。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法包括以下几个步骤(1) 取待处理样品适量，用甲醇溶解，配制成混合样品溶液。(2) 设置流动相流速为0.5 1.5mL/min，检测波长为204nm。(3) 取(1)的混合样品溶液2-50 ^L注入液相色谱仪，完成盐酸兰地洛尔原料 药及其中间体的分离与分析。
10. 根据权利要求9所述的方法，其特征为流动相的流速为1.0 mL/min。
全文摘要
本发明涉及一种盐酸兰地洛尔的分离与分析测定的高效液相色谱法方法，选择辛基键合硅胶或十八烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，优选十八烷基键合硅胶的色谱柱，采用该方法可以实现盐酸兰地洛尔及其杂质的快速分离和分析。
文档编号G01N30/02GK101271085SQ20071006457
公开日2008年9月24日 申请日期2007年3月21日 优先权日2007年3月21日
发明者杨 胡 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司