专利名称：：一种血清钙测定试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物试剂，具体涉及一种血清钙测定试剂。
背景技术：
：钙是人体内含量最多的无机物之一，约占体重的1.5~2%，99%以上分布在骨骼中，其余寸在于体液及其他组织。血钙大部分存在于血清中，红细胞内含量甚微。血清钙约50%以游离的钙存在，45%与血浆蛋白结合。通常，具有生理活性的是游离的钙离子，而无生理活性的叫结合钙，但是，它们二者可以互相转化。一般认为血清钙指的是血清总钙，而游离钙离子即是离子钙。血清钙在维持人体神经、肌肉的应急功能、维持细胞的正常新陈代谢等方面具有重要的作用。目前，用于测定人体血清钙的方法主要有以下几种一、邻甲酚肽络合酮比色法该方法采用邻甲酚肽络合酮作为金属络合指示剂，在碱性溶液中，可与钙作用，生成紫色络合物。但该方法由于受其他金属离子的干扰，重复性较差。二、酶法酶法测定钙虽然具有准确度好，精密度高的优点，但因其试剂成本很高，且酶容易受环境影响，试剂也不很稳定。三、电极法该法使用比较简便、快速，但需要特殊的仪器设备。因而，上述方法用于测定人体血清钙都有一定缺点。本发明要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种准确度好，试剂成本低的用于测定人体血清钙试剂。本发明提供了一种测定人体血清钙试剂。本发明的测定人体血清钙试剂由下列试剂1和试剂2组成试剂l:缓冲液其浓度为0.01-0.1摩尔/升、叠氮钠pH6.0试剂2:显色剂其浓度为O.Ol—l.O克/升、遮避剂其浓度为0.02—2.0克/升。上述试剂中显色剂偶氮胂m0.0l—i.o克/升；缓冲液MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)，TAPSO(N-三(羟甲基)甲氨基-2-羟基丙烷磺酸)，ADA(N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸)，ACES(N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙磺酸)，DIPSO(3-[N,N-二(羟乙基)氨基)-2-羟基丙磺酸)，BES(N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸)，MOPS(吗啉代丙烷磺酸)之一；浓度为1.0-200摩尔/升；遮避剂8—羟基喹啉，琥珀酸，邻苯二甲酸，酒石酸，邻苯二甲酸之一或它们的两种或两种以上的混合物；浓度为0.02—2.0克/升；本发明试剂可用于人体血清钙的测定。采用新的检测方法一偶氮胂III比色法进行测定。其具有准确度好，抗干扰强，重复性高，试剂成本低的特点。图1本发明实例1测定结果；X:电极法检测结果，Y:本发明的检测结果。具体实施方式实例l试剂lMES:20.4克叠氮钠l克TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)1毫升Brij35(聚环氧乙烯月桂酰醚)l毫升pH6.0试剂28—羟基喹啉0.8克偶氮胂m0.09克TritonX-100:1毫升Brij35:1毫升叠氮钠l克试剂1的配制在1升的烧杯种加入800毫升的去离子水，再依次加入MES20.4克的缓冲液，l克叠氮钠，l毫升TritonX-IOO，l毫升的Brij35，待溶解完全后，用盐酸调节pH值至6.0，然后添加去离子水至l升。试剂2的配制在1升的烧杯种加入800毫升的去离子水，再依次加入0.09克偶氮胂m，0.8克8—羟基喹啉，l克叠氮钠，l毫升TritonX-IOO，1毫升的Brij35，待溶解完全后添加去离子水至l升。检测实验步骤一、加3微升的标准液与200微升本法配制的试剂1，5分钟后读取吸光度Al标麯，再添加100微升本法配制的试剂2，5分钟后读取吸光度A2标准液，计算吸光度变化值厶A标准液s实验步骤二、制作标准工作曲线实验步骤三、加3微升的标准液与200微升本法配制的试剂1，5分钟后读取吸光度Al样本,再添加100微升本法配制的试剂2，5分钟后读取吸光度A2样本，计算吸光度变化值厶A样本实验步骤四、计算样本测值-(AA样^/AA标准液)XC标准液用配制的试剂对40例血清样本进行检测，同时用电极法对这40例样本进行平行测定。检测结果如下相关方程Y-1.0339X+0.001相关系数R-0.985本发明与电极法检测结果的相关性见图1对线性样品进行检测，计算相关系数R<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>故本法试剂线性测定范围可达4.0mmol/L。实例2:试剂lTAPSO:50克叠氮钠1克TritonX-100:1毫升Brij35:l毫升pH6.0试剂2邻苯二甲酸0.1克氮胂mo.9克TritonX-100:1毫升Brij35:1毫升叠氮钠l克实例3试剂lBES:1.5克叠氮钠1克TritonX-100:1毫升Brij35:l毫升pH6.0试剂2邻苯二甲酸2.0克偶氮胂mo.09克TritonX-100:1毫升Brij35:1毫升叠氮钠l克权利要求1、一种血清钙测定试剂，其特征在于该测定试剂由下列试剂1和试剂2组成试剂1缓冲液、叠氮钠pH6.0；试剂2显色剂、遮避剂。2、根据权利要求1所述的一种血清钙测定试剂，其特征在于所述缓冲液为MES，TAPSO，ADA,ACES，DIPSO，BES或MOPS;浓度为0.01-0.1摩尔/升。3、根据权利要求1所述的一种血清钙测定试剂，其特征在于所述显色剂为显色剂为偶氮胂m;浓度为0.0l—i.o克/升。4、根据权利要求1所述的一种血清钙测定试剂，其特征在于所述遮避剂为8—羟基喹啉，琥珀酸，邻苯二甲酸，酒石酸或邻苯二甲酸或它们的两种或两种以上的混合物；浓度为0.02_2.0克/升。全文摘要本发明公开了一种血清钙测定试剂，包括有缓冲液、叠氮钠、pH6.0的试剂1和有显色剂、遮避剂的试剂2组成。本发明的试剂可采用新的检测方法—偶氮胂III比色法进行人体血清钙的测定。其具有准确度好，抗干扰强，重复性高，试剂成本低的特点。文档编号G01N33/84GK101464466SQ20071017269公开日2009年6月24日申请日期2007年12月21日优先权日2007年12月21日发明者孙卫兵申请人:上海复星医药(集团)股份有限公司;上海复星长征医学科学有限公司