专利名称：：用质谱法定量分析源自表面的样品的制作方法用质谱法定量分析源自表面的样品
背景技术：
：本发明涉及表面测量(surface-interrogating)质谱技术。具体而言，本发明涉及用这些技术对处理至表面上的样品进行一步定量分析。美国每年至少对4百万婴儿一超过所有新生儿的98%—进行先天性疾病的测试，未确诊的先天性疾病可能引起智力迟^^、严重疾病和婴儿早夭。每种特定的代谢病症(例如苯丙酮酸尿症[PKU])、血液系统病(例如镰状细胞贫血病)和内分泌病(例如曱状腺机能减退)都可通过测定分别对应于特定病症的被分析物、例如氨基酸、异常血红蛋白或激素的血液水平是否在预期的正常水平内来诊断。通常将在医院于出生后48小时内采自婴儿脚后跟的血液样品置于滤纸卡上。以该方式固定在卡上的"血斑点"在进行样品制备和分析前稳定并易于管理。一般而言，这些步骤不在采集样品的医院处理，而是将样品送到州公共卫生机构或其它参与的实验室，以较大批量来处理。质谱法很适合该分析，因为其能够同时证明几种独特的被分析物的量，因此可用于在一次测定中筛选多种疾病。但是，每一次测定都包括若干制备步骤，每一步都提供由于样品污染或被分析物损失而引入错误的机会。也就是说，为了通过该方法检测感兴趣的被分析物，将滤纸卡载荷样品的部分打孔，并置于样品孔中以用溶剂提取血液。在某些情况下，还将被分析物衍生。此外，为了定量测定所检测的被分析物，样品制备必须包括将每一被分析物的已知量的内标加入到洗脱的样品中。质谱法的最近进展业已促进直接从表面上的样品中对被分析物的检测，除去了样品制备程序中将所述样品置于溶液中的需要。第一个开放式质谱技术DESI(电喷雾解吸电离)用例如甲醇或甲醇水溶液的液态喷雾，将其喷雾到目的样本构成的表面上，以从样本产生离子。这些离子被吸入质谱仪用于分析。(参见例如Tak&s等，"MassSpectrometrySamplingUnderAmbientConditionswithDesorptionElectrosprayIonization(用电喷雾解吸电离在环境条件下的质谱分析制样)"5Wewce;2004;36，471-3;和美国专利申请公开第2005/0230635号。)在称为DART(实时直接分析)的商业技术中，激发态的核素(亚稳态的氦或氮分子)与样品中的分子并与大气中的分子例如水反应，形成吸入到质谱仪的离子。(参见例如Cody等，"VersatileNewIonSourcefortheAnalysisofMaterialsinOpenAirunderAmbientConditions(在环境条件下开放空气中用于物质分析的挥发性新型离子源)，，,v4"a/.C/em.;2005;77(8),2297-2302和美国专利申请公开第2005/0196871号。)DESI和DART业已用于直接定性测量各种表面，藉此获得各种分子的高品质质i普。通过这些方法业已成功将包括炸药、化学战模拟物、氨基酸、肽、蛋白质、药物分子、生物碱、萜类化合物和类固醇在内的化合物电离。应该注意生物学流液可呈在纸上或其它合适表面的干斑点形式通过DESI直接分析。(参见例如TaMts等，"JmZ^Waw/6/o/ogy(9^右资,岸^冶/f(Z)i^/」W矛放4',,法,^法屋夢、必夢和4參^哞^议器设务、农理和^^T'J.MassSpectrom.;2005;40:1261-1275)。可在不到1分钟内收集含鉴别干流液例如血液、尿或血浆等样品组分的几百个峰的DESI谱。此外，业已提出通过DESI定量测定诊断相关的血液组分一例如酰基肉碱、胆汁酸、葡萄糖、肌酸酐和胆红素。这样的定量测定可通过在将同位素标记的内标加到血液样品中再沉积到衬底上来实现。与7现行实践比较，将DESI型技术用于血液筛选将减少制备步骤。然而，与现行定量血液筛选实践相反，其要求将其余的样品制备湿化学法从特定分析场所移到医院。将更多的筛选程序责任移到医院，将会在更多场所和执行者中扩散该方法的复杂性，将更多可变性引入样品制备，因此，将更大的误差风险引入到分析结果中。发明概述本发明提供用于通过表面测量质谱分析技术定量分析样品中的一种或多种被分析物的方法。所述方法通过掺入内标的新型载荷样品的固态衬底构造来实现。本发明衬底包含载体材料和各待定量被分析物的已知量的内标，在将样品沉积到表面之前掺入内标。依照本发明方法，将待分析的样品沉积到已制备好的;H"底上。然后，对衬底施行表面测量的质谱分析技术，该技术需要将能量转移至衬底表面，以使各指定的被分析物、样品中的组分和相应的内标电离，然后在质谱仪中分选离子，测定相对信号强度。用得到的凄史据，评估被分析物的存在及其量。质谱技术分选的能力使若干个被分析物得以在一次运行中定量。大体上，该能力可归纳为一步分析含许多被分析物的样品。例如，为了评估婴儿血液中氨基酸和肉碱在诊断上的相应水平，本发明提供掺入内标的已制备好的村底，该内标为同位素标记的氨基酸和肉碱类似物形式。血液样品可在从新生儿采集后立即或采集后不久在医院实验室沉积到衬底上。然后载荷样品的衬底即可取走用于分析，无需任何的进一步制备。在分析期间，被分析物和内标一起被电离，得到的质谱指示被分析物和相应内标的水平。可从这些数据可计算血液样品中各被分析物的浓度。对于具有最直接诊断的疾病而言，血液样品可根据未超出或超出单个指示性被分析物的预期正常范围来判断。对于具有更为复杂的诊断的疾病而言，可关联若干被分析物的水平。本发明不限于将血液或甚至生物学流液作为质镨分析种类。更正确地，本发明方法适合定量分析具有如下相应内标的任何^皮分析物易于加到载体材料中以形成本发明衬底，并然后易于在表面测量过程中电离的相应内标。本发明方法也不限于用于电离村底的感兴趣组分的任何特定技术。能够电离表面上存在的被分析物的任何技术均可用于产生用于输入质谱仪的带电荷核素。例如，比在表面测量的方法中已经提到的将粒子导向衬底更强的是，辐射可能用于解吸被分析物和内标。基质辅助激光解吸电离(MALDI)是适合本发明的一种这样的方法。(参见例如美国专利申请公开第加O7/0065949号。)本发明的固态衬底可包括载体材料，例如用于血液筛选中的滤纸卡(例如市售纸质材料，例如FTA⑧和Schleicher、Schueil903和CEP纸以及其他商用"血卡"材料)、玻璃、纺织品、陶瓷、树脂、金属和非金属一适于接受样品并能够在分析前稳定地保留所选择的内标的任何材料。此外，本发明衬底可具有多种物理形态中的任何一种。除了用于保存血点的熟悉的纸卡之外，实例还包括膜；药签；管形、柱形、滑片或器皿构成的表面；空心或实心珠；；徵粒；凝月交；和基质(matrix)。本文所用"固态衬底"表示与例如液态溶液相对的固相或半固态的衬底一不涉及衬底的多孔性或藉此包裹的任何孔穴。本文所用关于衬底和内标的术语"掺入"表示在正常储存条件下和在暴露于测量手段前的操作下，内标为衬底的稳定组成部分。同样地，衬底可被阐述为结合或附着内标的载体材料。已制备的衬底可用允许在测量期间从内标形成合适内标离子的任何物理方式来掺入内标。同样地，载荷样品的村底上的样品可占有位于该表面的明显的体积，或被部分或完全吸附以便其渗入载体材料。因此，短语"将样品处理至表面上，，指将样品转移至已制备的衬底的方式，不排除从该表面吸附该样品的村底。通过掺入内标构成已制备的衬底，本发明避免了在沉积之前适时地将内标引入到样品的必要。因此，通过表面测量质谱技术提供的简单化样品制备不再限于检测被分析物。本发明将该优点扩展到定量分析。用这样的方法，本发明能够进行快速精确的质语分析。在健康筛选情况下，该优点转化为降低假阳性或假阴性诊断的风险。附图简述以下本发明说明的附图，其中图1A-1D描述具有表面内标涂层的本发明衬底，图1A为俯视平面图，图1B为本发明已制备的衬底的正面图，图1C和1D为相应的已制备的载荷用于分析的样品的衬底的视图2A-2B描述具有扩散到载体材料顶层的内标的本发明衬底，图2A为载荷样品的衬底的俯^f见平面图，图2B为正面图3A-3B描述具有渗入到衬底一端的载体材料内的内标的本发明衬底，图3A为载荷样品的衬底的俯视平面图，图3B为相应的正面图4A-4B描述具有渗入到整个载体材料的内标的本发明衬底，图4A为载荷样品的衬底的俯4见平面图，图4B为相应的正面图；和图5示意性描述与本发明兼容的表面测量质谱系统。一般而言，附图中的要素并不是按比例画出。例示性实施方案详述已制备的本发明固态衬底包含加入到载体材料的内标。图l表示例示性实施方案的固态衬底10的具体要素。将具有顶面14的载体材料平板12通过基本不同的含内标涂层16覆盖。为了用于质谱分析，将样品沉积到衬底10上以便将所述样品S处理至涂层16上。关于图2，在另一实施方案中，内标包含在渗入载体材料平板12的浸渍层26内。为了分析，将样品S处理至在浸渍层26上的载体材料的面14上。关于图3，在另一实施方案中，内标在一端浸透载体材料平板12的整个厚度形成浸渍区36。为了分析，将样品S处理至载体材料平板12的面14上。关于图4,在又一实施方案中，内标浸透平板12的整个厚度，由此整个载体材料为浸渍体积46。为了分析，将样品S沉积到平板12的面14上，>夂人该处该样品被吸附到平板12。衬底10的载体平板12包括纸、玻璃、纺织品、陶瓷、金属、或塑料诸如聚苯乙烯、聚乙二醇、二乙烯基苯；异丁烯酸酯、聚异丁烯酸酯、聚丙烯酰吗啉、聚酰胺、聚(四氟乙烯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-曱基丁烯)、聚(对苯二曱酸乙二酯)、尼龙、聚(丁酸乙烯酯)、聚偏氟乙烯(PVDF)、硅酮、聚曱醛。硅酸盐琼脂糖(silicateagarose)、乙酸纤维素、硝酸纤维素、棉花、人造纤维，天然塑料也是载体材料的候选材料。本发明不限制将内标结合至衬底10的载体材料的方式。所述内标可在载体材料的所有或部分面上干燥，浸渍或扩散到载体材料的部分或全部，与载体材料化学结合，或另外经由氢键结合、毛细管力或表面张力共价或非共价结合至载体材料。通过以下方法可达到让内标与载体材料结合的目的例如将内标喷雾到载体材料面上；将载体材料浸泡于含有内标的溶液中；或通过从包含内标以及形成载体材料的前体的浆料形成衬底。例如，用于浸透含化学原料的纸的方法为本领域技术人员所熟知，其如美国专利第6,890,481号中所述。图4示意性地例示用于表面测量质谱系统的图1-3的衬底10。适用于本发明的DESI系统40使用常规电喷雾装置41来产生喷雾42。能够产生由喷雾气体射流载运的液滴流的任何装置可用于形成DESI喷雾42。装置40包括喷雾毛细管43，通过该毛细管输送液态i^剂44。喷雾器毛细管45围绕喷雾毛细管43形成环形空隙，通过该空隙将喷雾气体46高速输送。氮为喷雾气体46的典型候选物。业已将曱醇水溶液用作液态溶剂44。电源47给液态溶剂44施以高电压。快速流动的喷雾气体46和离开毛细管43的液体44之间的相互作用形成包含液滴的解吸离子化喷雾42。喷雾42还可包括中性大气分子、雾化气体和气态离子。将喷雾42导向样品材料S，后者载荷于已制备的掺入内标的衬底10上。衬底IO可在可移动平台上，通过熟知的驱动手段随时间解吸和电离不同区域的样品S，例如以产生整个衬底表面的光栅。这样的平台的电压和温度也可通过已知方法来控制。离子传输线52收集离开衬底10的解吸离子54,并将其导入大气入口或质谱接口56用于分析。通常在质谱仪里发现的任何大气接口适合用于DESI型系统。业已发现运转良好的接口包括典型的加热的毛细管大气接口和经由用金属或绝缘体制成的延长的柔韧离子传输线取样的大气接口。关于选择掺入衬底10的内标的注意事项为本领域^l支术人员所熟知，所述内标用于通过特定实验设置评估特定被分析物。一般而言，合适的内标化学上与被分析物相似，此即意味着内标"对应于，，被分析物。此外，内标必须可用质傳法与被分析物分离。最后，内标在化学上不与被分析物反应，且基本上不含有痕量被分析物。通常发现被分析物的稳定的同位素标记形式满足这些要求。大量的已出版参考资料为本领域技术人员选择内标提供指导。(参见例如Liu等，"Selectinganappropriateisotopicinternalstandardforgaschromatography/massspectrometryanalysisofdrugsofabuse~~pentobarbitalexample(选择合适的同位素内标用于气相色i普/质语分析滥用药物一戊巴比妥实例"，《/.尸o^wWcNov.1995;40(6):938-9。)可通过在具体离子化条件下对掺入特定衬底的特定内标的经验测定来预先确定在样品分析期间所4企测到的内标的绝对量。通常内标的量充分高于定量限但不能高至抑制^L分析物的离子化。用本文所述方法可分析多种类型的样品，包括生物学样品、医学样品、工业样品、农业样品、实验室样品和食物样品。对于生物学和医学应用而言，样品可包括4壬何生物学流液、细胞、组织或其流分，其包括对应于所选择的内标的分子。举例而言，样品可获自对象(例如哺乳动物诸如人类)或源自这样的对象。例如，样品可为通过活检获得的组织切片，或位于组织培养物中或适应组织培养的细胞。因此，例示性样品包括培养的成纤维细胞、经培养的羊水细胞、和绒毛膜绒毛样品。样品还可为生物学流液样本，例如尿、血液、血浆、血清、唾液、精液、痰、脑脊髓液、眼泪、粘液等等。若有需要，可进一步将样品分级分离为含特定细胞类型的部分。例如，血液样品可分级分离为血清或包含特定类型的血细胞诸如红血细胞或白血细胞(白细胞)的部分。若有需要，样品可为来自受试对象的样品的组合，例如组织和流液样品的组合等等。保持样品中的分子的活性或完整性的用于获得样品的方法为本领域技术人员所熟知。这样的方法包括用合适的緩沖剂和/或抑制剂，包括核酸酶、蛋白酶和磷酸酶的抑制剂，其维持或最小化样品中分子的改变。这样的抑制剂包括例如螯合剂，诸如乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙醚)N,N,Nl,Nl-四乙酸(EGTA);蛋白酶抑制剂，诸如苯甲磺酰氟(PMSF)、抑肽酶、亮肽素、抗蛋白酶(antipain)等等；和磷酸酶抑制剂，诸如磷酸盐、氟化钠、钒酸盐等等。分离分子的合适緩沖剂和条件为本领域技术人员所熟知，且可视例如待鉴定的样品中分子的类型而变化(参见例如，Ausubel等CurrentProtocolsinMolecularBiology(现行分子生物学方案)(增刊47),JohnWiley&Sons,NewYork(1999);Harlow和Lane,Antibodies:ALaboratoryManual(抗体实验室手册)(ColdSpringHarborLaboratoryPress(1988);Harlow和Lane,UsingAntibodies:ALaboratoryManual(使用抗体实验室手册)，ColdSpringHarborPress(1999);TietzTextbookofClinicalChemistry(临床化学Tietz教科书),第三版。Burtis和Ashwood,编辑.W.B.Saunders，Philadelphia,(1999))。本发明很适合新生儿血液筛选，其通常涉及测定超过20种的样品中的被分析物。表1和2列举通常在新生儿血液化验中检测的被分析物。对于很多可利用这些被分析物在新生儿血液中的水平诊断的疾病，业已在文献中报道若干诊断标准。例如，苯丙酮酸尿症可单独通过苯丙氨酸水平指示(如CDC，U.S.DepartmentofHealth和HumanServices所才艮道,"UsingTandemMassSpectrometryforMetabolicDiseaseScreeningAmongNewborns(用串联质谱法在新生儿中筛选代谢病),"MMPFR—2001年4月13日；Vol.50,No.RR-3;Rashed等，C/z'w'ca/CAew^o;。/^^/么夢」；1997;43(7):1129-41;和TheWisconsinNBSLaboratory—WisconsinStateLaboratoryofHygiene,"HealthProfessionalsGuidetoNewbornScreening(新生儿筛选健康专业指南),"于2003年10月28日检索自TheBoardofReagentsoftheUniversityofWisconsinSystem网站)。或者，可附加考虑酪氨酸水平(ACMG/ASHGTest和TechnologyTransferCommitteeWorkingGroup,TandemMassSpectrometryinNewbornScreening(新生儿筛选中的串耳关质^普法)，Ge"WcsAfe&cz'"e;2000年7月/8月；2(4);和Schulze等，尸e&a/n'cy;200!3;111(6):U"-l406)。第三种方法考虑苯丙氨酸水平和Phe/Tyr比率(Zytkovicz等，C/!'m'ca/C^em&^y;2001;47(11):1945邻。业已报道用于诊断称为中链酰基-辅酶A脱氢酶缺乏症(MCAD)的脂肪酸氧化失调的6种标准，其中没有一种依靠单一指示物。一个范例是利用C8和C10:l的水平。(ACMG/ASHGTest和TechnologyTransferCommitteeWorkingGroup)。第二个范例附加利用C10和C6(CDC)水平。第三个范例除了这四种单个水平之外，还考虑C8/C10比率(Chace等，C"mWCA謹勿;2001;47:1166-82)。第四种方法仅仅考虑C6、C8、C10:l(Rashed#Zytkovicz等)的水平。第五种方法考虑C6、C8、C10的单个水平和C8/C2、C8/C10和C8/C12的比率(Schulze等)。第六种选择C6、C8和C10:l的单个水平和C8/C10比率(WisconsinNBSLaboratory)。本发明衬底能够掺入用于所有这几个4皮分析物的内标。表1在新生儿血液筛选中化验的氨基酸<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>丙氨酸Ala精氨酸Arg瓜氨酸Cit甘氨酸Gly亮氨酸Leu曱硫氨酸Met鸟氨酸Orn5-羟脯氨酸5-OxoPro苯丙氨酸Phe酪氨酸Tyr缬氨酸Val脯氨酸Pro表2.在新生儿血液筛选中化验的肉碱肉碱缩写游离肉^威C0乙酰肉义咸C2丙酰肉》咸C3丙二醜肉石咸C3DC丁酰肉石咸C43-羟基-丁酰肉;咸C40H异戊酰肉》威C5曱基巴豆酰肉碱C5:1戊二酰肉》威C5DC3-羟基-异戊酰肉石威C50H己酰肉》威C6己二醜肉》威C6DC辛酰肉碱C8辛烯酰肉;威C8:115<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>因此，应该看到上文描绘了非常有优势的定量表面测量质谱法，尤其是用于定量血液组分。本文所用术语和表述用作说明术语，并无限制，无意使用这些术语和表述来排除任何所示和所述的要素或其部分的等同物，但应该认识到，在本发明权利要求范围内的各种修改都是可能的。权利要求1.一种用于通过质谱法测定样品中第一被分析物的量的方法，所述方法包括以下步骤a.提供具有表面并掺入对应于所述第一被分析物的已知量第一内标的固态衬底；b.将所述样品处理至所述表面上；c.将能量转移至所述衬底，以电离所述第一被分析物和第一内标，藉此产生第一被分析物离子和第一内标离子；d.在质谱仪中收集所述第一被分析物离子和第一内标离子，以从所述第一被分析物离子产生第一被分析物信号，并从所述第一内标离子产生第一内标信号；e.基于所述第一被分析物信号、第一内标信号、和第一内标的已知量计算所述第一被分析物的量。2.权利要求l的方法，其中所述样品包括血液。3.权利要求1的方法，其中通过用粒子轰击所述表面以实现将能量转移至所述衬底。4.权利要求3的方法，其中所述粒子通过喷雾转移。5.权利要求4的方法，其中所述粒子带电荷。6.权利要求3的方法，其中所述粒子处于电中性激发态。7.权利要求1的方法，其中通过将激光发射到所述表面以实现将能量转移至所述衬底。8.权利要求l的方法，其中所述被分析物为氨基酸。9.权利要求l的方法，其中所述被分析物为激素。10.权利要求l的方法，其中所述被分析物为异常血红蛋白。11.权利要求l的方法，其中所述衬底掺入对应于所述样品中待定量的第二被分析物的已知量第二内标，将能量转移至衬底的步骤电离所述第二被分析物和第二内标以产生第二被分析物离子和第二内标离子，在质谱仪中收集离子的步骤还收集所述第二被分析物离子和第二内标离子，并进一步包括基于所述第二被分析物信号、第二内标信号、和第二内标的已知量计算样品中所述第二被分析物的量的步骤。12.权利要求11的方法，其中所述衬底进一步掺入已知量的多种内标中的每一种，每种所述内标对应于所述样品中待定量的多种被分析物中的一种，将能量转移至衬底的步骤电离所述多种被分析物中的每一种和多种内标中的每一种，以由所述多种^皮分析物中的每一种产生被分析物离子并由所述多种内标中的每一种产生内标离子，在质谱仪中收集离子的步骤还收集所述多种被分析物离子和多种内标离子，以产生各个被分析物信号和内标信号，并进一步包括基于各被分析物信号、各内标信号、和各内标的已知量计算所述多种被分析物中每一种的量的步骤。13.—种用于至少一种疾病的通过质谱法筛选血液的方法，第一被分析物标示第一疾病，第一内标对应于所述第一被分析物，所述方法包括以下步骤a.提供具有表面并掺入已知量的所述第一内标的固态衬底；b.将所述血液处理至所述表面上；c.将能量转移至所述衬底，以电离所述第一被分析物和第一内标，藉此产生第一被分析物离子和第一内标离子；d.在质i普仪中收集所述第一被分析物和第一内标离子，以从所述第一被分析物离子产生第一被分析物信号，并从所述第一内标离子产生第一内标信号；e.通过基于所述第一被分析物信号、第一内标信号、和第一内标的已知量计算所述血液中第一被分析物的量，确定所述第一疾病是否存在。14.权利要求13的方法，其中所述衬底掺入对应于标示第二疾病的第二被分析物的已知量第二内标，将能量转移至村底的步骤电离所述第二被分析物和第二内标以产生第二被分析物离子和第二内标离子，在质谱仪中收集离子的步骤还收集所述第二被分析物离子和第二内标离子，以由所述第二:f皮分析物离子产生第二被分析物信号并由所述第二内标离子产生第二内标信号，进一步包括通过基于所述第二被分析物信号、第二内标信号、和第二内标的已知量计算所述血液中第二被分析物的量以确定所述第二疾病是否存在的步骤。15.权利要求13的方法，其中所述衬底进一步掺入已知量的多种内标中的每一种，每种所述内标对应于多种被分析物中的一种，每种所述被分析物标示多种疾病中的一种，将能量转移至衬底的步骤电离所述多种被分析物中的每一种和多种内标中的每一种，以从所述多种被分析物中的每一种产生被分析物离子并从所述多种内标中的每一种产生内标离子，在质谱仪中收集离子的步骤还收集所述多种被分析物离子和多种内标离子，以产生各^f皮分析物信号和各内标信号，并进一步包括通过基于所述各^^皮分析物信号、各内标信号、和各内标的已知量计算所述多种被分析物中每一种的量以确定所述多种疾病中的每一种是否存在的步骤。16.—种固态衬底，所述衬底用于接受待测定对应于第一内标的第一被分析物的样品并在质谱分析期间载荷所述样品，所述衬底包括a.载体材料；和b.结合至载体材料的已知量的所述第一内标。17.权利要求16的衬底，其中所述衬底为纸卡。18.权利要求16的衬底，其中所述载体材料具有面，所述第一内标覆盖至少部分所述面。19.权利要求16的衬底，其中所述第一内标浸渍所述载体材料。20.权利要求16的衬底，其中通过将所述第一内标溶于溶剂形成溶液并将至少部分所述载体材料浸泡于所述溶液，使所述内标结合至所述载体材料。21.权利要求16的衬底，其中通过将所述第一内标喷雾到所述载体材料上，使所述内标结合至所述载体材料。22.权利要求16的衬底，其中所述衬底接收稍后在该衬底上干少喿的液态流液。23.权利要求16的衬底，其中所述衬底所接收的样品为血液。24.权利要求17的衬底，其中所述衬底所接收的样品为血液。25.权利要求16的衬底，其中将已知量第二内标结合至所述载体材料，所述第二内标对应于所述样品中待测定的第二被分析物。26.权利要求16的衬底，其中将已知量的多种内标中的每一种进一步结合至所述载体材料，所述多种内标中的每一种对应于所述样品中待测定的多种被分析物中的一种。27.权利要求l的衬底，其中所述样品为生物学样品。28.权利要求27的衬底，其中所述样品选自体液或组织或其流全文摘要掺入内标的衬底有助于通过表面测量质谱技术定量分析样品中的被分析物，而无需湿化学法样品制备。使用者将待分析的样品处理至经预处理的衬底表面。然后载荷样品的固态衬底即可用于测量，所述衬底中掺入待定量的各被分析物的内标。文档编号G01N33/68GK101484808SQ200780025261公开日2009年7月15日申请日期2007年5月4日优先权日2006年5月5日发明者B·塞尔达申请人:珀金埃尔默·拉斯公司