一种药品、保健食品和食品中PDE₅型抑制剂的快速检测试剂盒的制作方法

专利名称：一种药品、保健食品和食品中PDE₅型抑制剂的快速检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药品、保健食品或食品的分析技术领域，尤其涉及一种基于理 化^JS快速筛查药品、保健食品和食品中PDE5型抑制剂的快速检测试剂盒。
背景絲
补肾壮阳类中成药、保健食品和食品中非法添加化学成分的行为日益猖獗，且 针对标准的高科4iit假行为^^越多，严重 >人民群众的身体<錄。查阅大量国 内外文^j见，非法添加的壮阳类化学成分主要以PDE5型抑制剂(磷酸二酯酶5 型抑制剂，phosphodiesterase type-5 inhibitor)为主。美国食品药品管理局(FDA) 先后批准了西地4立非、伐地拉非和他达拉非三种PDEs型抑制剂。PDEs型抑制剂属 于处方药，月良用时有严格的适应症、禁总症和一定的副作用，某些病人不肯^L用， 患者在不知情的情况下掘4易引起严重的药物不^应，甚至导致死亡。
中药本身成分复杂，各成分之间干扰严重，检验标准还4艮不完善。单味的中药 成分已很复杂，复方中成药、保健食品和食品的化学成分更为复杂多样，加上生产 工艺的影响，使得添加化学成分的4&则方法要求更具专属性。我国的JiW亍质量标准 尚不肯^hHiii行有岁缓管。虽然国家每年都在药品监督抽查检验上^7v了大量的人 力、物力和财力，但效果却不佳，药品监管的覆盖面太小。开发药品的快速检测技 术力眸决此问题的有效手段之一。快速4^则技术的目的是能够在现场对药品进行快 速分析和筛查，将可疑样品带回实验室后用法定检验方法确证。通过应用快速^*
技术，监督检验的效率将大大提高、成本大大P争4氐、监管M面大大增力口，将成为 打击非法添加的有力工具。因此建立筒单、准确的快速鉴别方法及试剂盒具有重要的意义。采用理化反应方法的试剂盒由于携带方便、操作简单、枱^则逸变快，适合 在现场对样品进行快速筛查，是目前基层主要应用的快速^^则技术及试剂盒之一。
目前，很多种相关试剂盒只^^r测一种PDEs型抑制剂或一类PDEs型抑制剂， 而且涉及使用多种毒性较大的有机溶剂、强腐蚀性酸、水浴蒸干、#^乍复杂等诸多 不利于现场操怍的因素。

发明内容
本发明的目的之一是针对J贿技术的缺陷，提^"-种检测药品、保健食品和食 品中的PDE5型抑制剂的通用快速检测试剂盒。
本发明的一种药品、保健食品和食品中PDE5型抑制剂的快速4^则试剂盒包括 提^i^剂、显色剂和針扰试剂，所述提秘剂分别包括酸性7jc溶液和有才脉剂， 所n色剂包括^肖^^溶'液和辟u酸溶液，所述BH^扰试剂为0.01 ~0.2mol/L的 高锰酸钾溶液。
所述酸性7jc溶液包括盐酸、硫酸、磷酸、高氯酸或硝酸，所述酸性水溶液的重 量百分比浓度为1~20%。
优选的，所述酸性水溶液为重量百分比浓度为3M的辟u酸。 所述有4/U^剂包括曱醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯或丙酮。
伊述的，所述有才;i^剂为乙醇。
优选的，所^5肖^^溶液为^^i^iH^溶液。
优选的，所述硫酸溶液的重量百分比浓度为20 ~ 80%。
伊速的，所述硫酸溶液的重量百分比浓度为45%。
优选的，所述RH^扰试剂为0.01 ~ 0.2mol/L的高锰酸钾溶液。
更优的，所述除干扰试剂为0.04mol/L的高锰酸钾溶液。
本发明的试剂盒不拘于形式，本发明的试剂盒可运用在险测药品、保健食品和食品中的PDEs型抑制剂的检测中。
国内外文献已经报道了 20多种PDEs抑制剂。从化学结构来看，可以把PDEs 型抑制剂分为那非类和拉非类。那非类包括西地那非及期汙生物、伐^W卩非^^期汙 生物、红AMI卩非及期汙生物、艾i帧卩非及期汙生物等；拉非类包括他达拉非及期汙 生物等。由于那非类和拉非类起药理活性作用的母核结构差异较大，相应的物理和 化学性质也差异较大，需要采用不同的理化^方法分別^^则。
运用本发明的试剂盒进行分析，可适用于胶嚢剂、片剂、丸剂、合剂等各种剂 型的药品、保健食品和食品中，已采用对照品配制的才對W羊品马封正能够检测的那非 类PDEs型抑制剂包括枸橼酸西地那非、西^M卩非(如盐酸西地那非、曱磺酸西地 那非等)及期汁生物(如豪莫西地那非、羟基豪莫西地那非、那莫西地那非等)、 伐地那非及其衍生物(如伪伐地那非)、红地那非及期汙生物(如那红地那非等) 和硫代艾地那非及其衍生物(如艾地那非等)、他达拉非及其衍生物(如 ^他达 拉非等)。
同现有技^M目比，本发明具有如下有益效果
本发明的PDEs型抑制剂快速检测试剂盒能够快速检筛查补肾壮阳类中成药、 保健食品和食品中是否添加PDEs型抑制剂，分析成本低、操作简单、佳月安全、 专属性强、灵氣变高、准确度高，不需要专门的设备，能够满a基层、广大^jM寸 及检验技术^f牛相对落后的中小城市开展相关的药品、保健食品和食品的监督检验 需要，对提高监督检验效率、节约监f^检验成本、打击非法添加行为具有重要的意 义。
M实施方式
为使本发明更加容易理解，下面结合胁实施例，进一步阐ii^发明。应理解， 这些实施例仅用于说明本发明而不用于P艮制本发明的范围，下列实施例中未提及的 M实-睑方法，通常4妄照常失见实-验方法进行。实施例一
本发明的试剂盒包括两种提 1剂A和D、两种显色剂C和E和一种l^p扰 试剂B，还酉漆剪刀、滤头、5ml比色管等辅助工具。
试剂瓶a中预先装入提^:剂A，该溶剂为重量百分比浓度为3%的石克酸溶液。 试剂瓶d中预先^^提赠剂D，该溶剂为乙醇。试剂瓶c中预先^7^色剂C， 该显色剂为3肖^iH咏溶液。试剂瓶e中预先^v显色剂E，该显色剂为重量 百分比浓度为45%的硫酸溶液。试剂瓶b中预先^除干扰试剂B,该试剂为 0.04mol/L的高锰酸钾溶液。
实施例二
本发明的试剂盒包括两种提M剂A和D、两种显色剂C和E和一种l^"f扰 试剂B，还@漆剪刀、滤头、5ml比色管等辅助工具。
试剂瓶a中预先装入提^i^剂A，该溶剂为重量百分比浓度为1%的盐酸。试 剂瓶d中预先^^提g剂D，该溶剂为异丙醇。试剂瓶c中预先^^色剂C， 该显色剂为^肖^S^溶液。试剂瓶e中预先^A^色剂E,该显色剂为重量百分 比浓度为20%的硫酸溶液。试剂瓶b中预先"l^f扰试剂B,该试剂为0.01mol/L 的高锰酸钾溶液。
实施例三
本发明的试剂盒包括两种提M剂A和D、两种显色剂C和E和一种ftH^扰 试剂B，还S漆剪刀、滤头、5ml比色管等辅助工具。
试剂瓶a中预先^A提^i^剂A，该溶剂为重量百分比浓度为20%的高氯酸。 试剂瓶d中预先装入提^i^剂D,该溶剂为异丙醇。试剂瓶c中预先^显色剂C, 该显色剂为三硝1^1^#溶液。试剂瓶e中预先^v显色剂E,该显色剂为重量 百分比浓度为80。/。的碌u酸溶液。试剂瓶b中预先^A除干扰试剂B，该试剂为
70.2mol/L的高锰酸钾溶液。 实施例四
本发明的试剂盒包括两种提M剂A和D、两种显色剂C和E和一种除干扰 试剂B，还配备剪刀、滤头、5ml比色管等辅助工具。
试剂瓶a中预先^A提J^剂A，该溶剂为重量百分比浓度为10%的磷酸。试剂瓶 d中预先^A提^i^剂D,该溶剂为乙酸乙酯。试剂瓶c中预先^/v^色剂C，该 显色剂为3肖1^^溶液。试剂瓶e中预先^显色剂E,该显色剂为重量百分比 浓度为60%的减^液。试剂瓶b中预先^ARH^扰试剂B,该试剂为0.1mol/L的 高锰酸钾溶液。
实施例五
本发明的试剂盒包括两种提:^剂A和D、两种显色剂C和E和一种除干扰 试剂B，还S漆剪刀、滤头、5ml比色管等辅助工具。
试剂瓶a中预先装入提^i^剂A,该溶剂为重量百分比浓度为15%的硝酸。试 剂瓶d中预先^A^提^i^剂D,该溶剂为丙酮。试剂并瓦c中预先^显色剂C，该 显色剂为^肖J^S^溶液。试剂瓶e中预先^显色剂E,该显色剂为重量百分比 浓度为50%的硫酸溶液。试剂瓶b中预先^針扰试剂B，该试剂为0.05mol/L 的高锰酸钾溶液。
实施例六
运用上述试剂盒^a'] pde5型抑制剂的理化^i快速检测方法包括以下步骤， 该检测步骤中的枱铡务降所用试剂是最优组合，^旦不局限于以下所列的务降。
1、 #^交囊1粒(片剂约1/2片；丸剂、颗粒剂、散剂等固体制剂约每:^l艮用量 的1/10量；溶液剂2ml)，置具塞试管中(片剂、丸剂需预先研细或剪碎)，加试剂瓶a中的提^i^剂A:重量百分比浓度为3%的硫酸溶液8ml (若待测品为溶液剂， 则加重量百分比为3%的硫酸溶液6ml )，强力l^摇约2 ^^H吏溶散，静置片刻，滤 过，,滤液2ml，滴加试剂瓶b中的BH"扰试剂B: 0.04mol/L的高锰酸钾溶液， 边滴加边振摇，至溶液出现的紫红色在15秒内不褪色，静置片刻，待紫红色褪去 至无色或浅棕色，滴加试剂瓶c中的显色剂C:三硝^IH咏溶液4 5滴(滴加 时和滴完后切勿振摇试管)，观察是否产生黄色浑浊。若3分钟内出现黄色浑法， 静置后形成黄色沉淀物，即初步判断样品中唾哪非类PDE5型抑制剂。
2、 若不呈步骤1的阳性^JS，则^a交嚢剂1粒(片剂1片；丸剂、颗粒剂、 散剂等固体制剂约每;JL^用量的1/2量)，置具塞试管中(片剂、丸剂需预先研细或 剪碎)，加试剂瓶d中的提^i^剂D:乙醇2ml，振摇约l-2^4中，静置约1 ^4中， 取上清液作为供试品溶液。在试管中加入试剂瓶e中的显色剂E:重量百分比浓度 为45。/o的稀硫酸lml，滴加供试品溶液2滴，观察是否产生紫色。若3^4中内供试 品溶液显紫色，则初步判断样品中含拉非类PDEs型抑制剂。
3、 如步骤1和2有一个显阳性反应，表明样品中含PDE5型抑制剂；如步骤l 和2均不显阳性反应，表明样品中不含有PDEs型抑制剂。
4、 注意事项
(1)通过组合步骤1和步骤2两个理化AJl^;则试剂盒^i^刊企测的方法， 可以枱侧目前绝大部分已知的PDE5型抑制剂。根据样品中添加PDE5型抑制剂的实 际情况，如样品以添加那非类PDEs型抑制剂为主，则4安上iy且合4喿作；如样品以 添加拉非类PDEs型抑制剂为主，则也可以交换步骤1和步骤2的顺序使用。步骤l 和步骤2的顺序不受限定，也可以先进行步骤2的4^则，再进行步骤l的检测。
(2 )检测结果为阳性的样品需要现场抽样，进一步用高效液相色镨法或M 联用法确i正。
实施例七用本发明的PDEs型抑制剂试剂:^^则供试品1#'。
供试品r标示为喜来劲中^fiM喜来庆胶嚢，批号20070820，每:^J良用两粒。 旋开试剂瓶a的螺口盖，力口入1粒胶嚢内^^勿，盖紧螺口盖，强力振摇约2分 钟使絲均匀，静置片刻。旋开试剂瓶a螺口盖上的小盖，接上滤头，滤过，赠 滤液2ml至比色管，滴加滴瓶b中的溶液，边滴加边振摇，至溶液出现的紫红色在 15秒内不褪色，静置片刻，待紫红色褪去至无色或浅棕色，滴加滴瓶c中的溶液5 滴，若3^4中内出现黄色浑法，静置后形成黄色沉淀物，由此步判断样品中含PDEs 型抑制剂。
用高效液相色语和';^:联用方法抬嘲，发J^羊品中^"有西地^P非。
实施例八
用本发明的PDEs型抑制剂试剂盒4企测供试品2#'。 供试品2#标示为男霸天胶嚢，批号20080305，每;iUll用两粒。 旋开试剂瓶a的螺口盖，加入1粒胶嚢内^4勿，盖紧螺口盖，强力振摇约2分 钟使錄均匀，静置片刻。旋开试剂瓶a螺口盖上的小盖，接上滤头，滤过，機 滤液2ml至比色管，滴加滴瓶b中的溶液，边滴加边振摇，至溶液出现的紫红色在 15秒内不褪色，静置片刻，待紫红色褪去至无色或浅棕色，滴加滴瓶c中的溶液5 滴，3分沖内不出现黄色浑浊。
旋开试剂瓶d的螺口盖，加入1粒胶嚢剂内^4勿，盖紧螺口盖，振摇约1^4中， 静置约1分钟。旋开试剂瓶d螺口盖上的小盖，滴加滤液3滴至试剂瓶e中，l分 钟内产生紫色，由此判断样品中含PDE5型抑制剂。
用高效液相色谱和M联用方法进一步枱侧，发现样品中含有他达拉非。
实施例九
从市场收集149个补肾壮阳类样品，釆用高效液相色谱法和歸联用法检测发现其中102个添加那非类PDEs型抑制剂，涉及6种PDEs型抑制剂(分别为西iW卩 非、羟基豪莫西地那非、红i^P非、那红地那非、4W也那非和硫代艾iik^非)；用 本发明的理化反应步骤一的方法^^则，出现假阳性样品3个，准确率为98.0%。从 市场收集156个补肾壮阳类样品，釆用高效液相色谱法和M联用法冲^则发现其中 17个添加拉非类PDE5型抑制剂，涉及他ii4立非和"tJ^也达拉非两种PDEs型抑制 剂，用本发明的理化^步服二的方法抬溯，准确率为100%。由此说明本发明的 理化^L快速检测方法及其;f^则试剂盒能够满足监^^验的要求。
M所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明 保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术 人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明 才支术方案的实质和范围。
权利要求
1、一种药品、保健食品和食品中PDE5型抑制剂的快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括提取溶剂、显色剂和除干扰试剂，所述提取溶剂分别包括酸性水溶液和有机溶剂，所述显色剂包括三硝基苯酚溶液和硫酸溶液，所述除干扰试剂为0.01～0.2mol/L的高锰酸钾溶液。
2、 根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述酸性水溶液包 括盐酸、硫酸、磷酸、高氯酸或硝酸，所述酸l"生水溶液的重量百分比浓度为1 ~20%。
3、 才艮据权利要求1所述的快速^;则试剂盒，其特4i^于，所述酸性水溶液为 重量百分比浓度为3%的石克酸溶液。
4、 根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特4碌于，所述有才/li^剂包括 曱醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯或丙酮。
5、 根据权利要求1所述的快速4^则试剂盒，其特征在于，所述有才;L^剂为乙醇。
6、 根据权利要求1所述的快速4&则试剂盒，其特征在于，所^HJ:肖^S^^溶 液为三;tt^!H咏溶液。
7、 根据权利要求1所述的快速^^则试剂盒，其特征在于，所述硫酸溶液的重 量百分比浓度为20 ~ 80%。
8、 根据权利要求1所述的快速4&则试剂盒，其特征在于，所述石克g液的重 量百分比浓度为45%。
9、 才M居权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述R^N尤试剂为 0.01 ~ 0.2mol/L的高锰酸钾溶液。
10、 根据权利要求i所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述RH^尤试剂为0.04mol/L的高锰酸钾溶液。
全文摘要
本发明提供了一种药品、保健食品和食品中的PDE₅型抑制剂的快速检测试剂盒。该试剂盒包括提取溶剂、显色剂和除干扰试剂，提取溶剂分别包括酸性水溶液和有机溶剂，显色剂包括三硝基苯酚溶液和硫酸溶液，除干扰试剂为0.01～0.2mol/L的高锰酸钾溶液。本发明的试剂盒能够快速筛查补肾壮阳类药品、保健食品和食品中是否添加PDE₅型抑制剂，分析成本低、操作简单、使用安全、专属性强、灵敏度高、准确度高，不需要专门的设备，能够满足在基层、广大农村及检验技术条件相对落后的中小城市开展相关的药品、保健食品和食品的监督检验需要，对提高监督检验效率、节约监督检验成本、打击非法添加行为具有重要的意义。
文档编号G01N31/02GK101587107SQ20091004085
公开日2009年11月25日 申请日期2009年7月6日 优先权日2009年7月6日
发明者李延志, 杨德忠, 林生文, 罗卓雅, 毅 雷, 魏嘉陵 申请人:广东省药品检验所