专利名称：用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试纸条，特别是一种用于检测微囊藻毒素的试纸条。
背景技术：
目前检测水样中微囊藻毒素的方法一般为化学分析法、生物分析法和免疫学方法 主要包括酶联免疫吸附法。化学分析法包括反相高效液相色谱(HPLC)与二极管阵列检测器(DAD)或电化 学检测器联用、HPLC-UV(紫外检测器)、高效液相色谱一质谱(HPLC-MS)、气相色谱和质谱 (GC-MS)联用、毛细管电泳(CE)、薄层色谱(TLC)等方法。利用不同物质在色谱柱中的分离 速度进行分离，从而得到不同的色谱峰，根据保留时间和峰高或峰面积进行计算浓度。其不 足有HPLC和HPLC-MS联用技术是对不同类型的MCs进行定性分析和定量检测最为经典的 技术，测定水样时需要专业人员经过复杂的预处理，比较耗时，该方法使用的仪器技术含量 高，需要进行专业培训后才能掌握操作技术，且仪器精度要求高，价格昂贵，同时还必须备 有标准毒素或某毒素在相同实验条件下的保留值。并且由于采集水样的塑料容器中某些塑 料添加剂可干扰HPLC对MC-LRMC-YR的检测。使用生物分析法一般无法准确定量，且灵敏 度较低，工作量较大，无法确定MCs的毒素类型和异构体。免疫学方法主要包括酶联免疫吸附法(Enzyme-1 inkedimmunosorbentassay， ELISA)、蛋白磷酸酶抑制法和胶体金免疫层析法。ELISA使抗原或抗体结合到某种固相载体 表面，并保持其免疫活性。再与某种酶连接成酶标抗原或抗体。酶标记的抗原或抗体既保留 其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与 固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与 其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入 酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关， 可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。蛋白磷酸酶抑制分析(PPIA)利用待测物质对荧 光物质蛋白磷酸酶I(PPl)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)的抑制效应进行定量分析。其不足有 免疫学方法干扰因素多，不能很好的鉴别毒素，会出现假阳性反应，常常需要HPLC等化学 分析方法的进一步确认。
发明内容本实用新型的目的就是提供一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸条，它 可以对水中的MC-LR、MC-RR和MC-YR三种微囊藻毒素进行简单准确的检测辨认。本实用新型的目的是通过这样的技术方案实现的，它包括有背衬板、加样纸、第一 膜、第二膜和吸水纸，在背衬板表面上设置有第二膜，在第二膜的一端和背村板表面上设置 有第一膜，在第二膜的另一端和背衬板表面上设置有吸水纸，第一膜的表面上设置有一层 免疫胶体金，在第一膜和背衬板表面上设置有加样纸，在第二膜的表面上，设置有含有微囊 藻毒素抗原的检测层和含有二抗的质控层。[0007]使用时，在加样纸上加入水样，水样浸至第一膜，与第一膜上的免疫胶体金接触， 免疫胶体金溶解在水样中。胶体金中了抗体称为免疫胶体金。若被检水样中含有与检测层的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金含 有抗体，水样中的微囊藻毒素与免疫胶体金中的抗体充分反应，使含有免疫胶体金的水样 中微囊藻毒素抗体的抗原结合位点饱和，水样通过虹吸作用泳动至检测层，由于水样中微 囊藻毒素抗体抗原结合位点饱和，所以不与检测层中的微囊藻毒素抗原反应，水样中的有 颜色的免疫胶体金不会被截留，检测层不显色，水样继续泳动至质控层，免疫胶体金与质控 层中的二抗结合，免疫胶体金被截留，质控层显色，反之质控层不显色则证明免疫胶体金失 去活力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸，被吸水纸所吸收；若水样中含有少量与检测层的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金含 有抗体，水样中的少量微囊藻毒素与免疫胶体金中的部分抗体反应，含有免疫胶体金的水 样中还有未被结合完的抗体，水样通过虹吸作用泳动至检测层，水样中的抗体与检测层中 的微囊藻毒素抗原反应，水样中有颜色的免疫胶体金部分被截留，检测层显色很淡，水样继 续泳动至质控层，免疫胶体金与质控层中的二抗结合，免疫胶体金被截留，质控层显色，反 之质控层不显色则证明免疫胶体金失去活力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸，被 吸水纸所吸收；若水样中缺乏与检测层的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金含有抗体，水样中微囊藻毒素与免疫胶体金中的抗体，含有免疫胶体金的水样中含有富余抗原结 合位点的微囊藻毒素抗体，水样通过虹吸作用泳动至检测层，由于水样中含有富余抗原结 合位点的微囊藻毒素抗体，所以与检测层中的微囊藻毒素抗原反应，水样中的有颜色的免 疫胶体金被截留，检测层显色，水样继续泳动至质控层，剩余的免疫胶体金中与质控层中的 二抗结合，免疫胶体金被截留，质控层显色，反之质控层不显色则证明免疫胶体金失去活 力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸，被吸水纸所吸收。使用此方法只需将水样加在加样纸上既可，操作方便、快捷迅速，本实用新型生产 方便成本低廉，并且可以同时对两种及三种微囊藻毒素进行同时检测。二抗可以是羊抗兔 抗体，也可以是兔抗鼠抗体，也可以是羊抗鼠抗体，还可以是其它的符合要求的二抗体。第 一膜可以是玻璃膜、硝酸纤维素膜、聚二氟乙烯树脂膜等能结合免疫胶体金颗粒，在一定条 件下能够最大限度的使免疫胶体金复溶，泳动性好的膜。第二膜可以是玻璃膜、硝酸纤维素 膜、聚二氟乙烯树脂膜等泳动性好、分离性好，具吸附性的膜。由于采用了上述技术方案，本实用新型具有如下的优点(1)快捷迅速(2)操作简 便(3)试剂稳定，检测灵敏、准确(4)成本低廉(5)多元检测系统。
本实用新型的附图说明如下图1为本实用新型的第一种结构示意图；图2为本实用新型的第二种结构示意图；图3为本实用新型的第三种结构示意图；图4为图1的立体图；图中1.背衬板；2.加样纸；3.第一膜；4.第二膜；5.吸水纸；6.免疫胶体金；7.检测层；8.质控层。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明如图1、图2、图3、图4所示，一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，它包 括有背衬板1、加样纸2、第一膜3、第二膜4和吸水纸5，在背衬板1表面上设置有第二膜4， 在第二膜4的一端和背村板1表面上设置有第一膜3，在第二膜4的另一端和背衬板1表面 上设置有吸水纸5，第一膜3的表面上设置有一层免疫胶体金6，在第一膜3和背衬板1表 面上设置有加样纸2，在第二膜4的表 面上，设置有含有微囊藻毒素抗原的检测层7和含有 二抗的质控层8。 使用时，在加样纸2上加入水样，水样浸至第一膜3，与第一膜3上的免疫胶体金接 触6，免疫胶体金6溶解在水样中。胶体金中掺入了抗体称为免疫胶体金6。若水样中含有与检测层7的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金含有 抗体，水样中的微囊藻毒素与免疫胶体金6中的抗体充分反应，含有免疫胶体金6的水样中 微囊藻毒素抗体的抗原结合位点饱和，水样通过虹吸作用泳动至检测层7，由于水样中微囊 藻毒素抗体的抗原结合位点饱和，所以不与检测层7中的微囊藻毒素抗原反应，水样中的 有颜色的免疫胶体金6不会被截留，检测层7不显色，水样继续泳动至质控层8，免疫胶体金 6与质控层8中的二抗结合，免疫胶体金6被截留，质控层8显色，反之质控层8不显色则证 明免疫胶体金6失去活力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸5，被吸水纸5所吸收；若水样中含有少量与检测层7的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金 6有抗体，水样中的少量微囊藻毒素与免疫胶体金6中的部分抗体反应，含有免疫胶体金6 的水样中还含有富余抗原结合位点的微囊藻毒素抗体，水样通过虹吸作用泳动至检测层7， 水样中的少量抗体与检测层7中的微囊藻毒素抗原反应，水样中有颜色的免疫胶体金6部 分被截留，检测层7显色很淡，水样继续泳动至质控层8，免疫胶体金6与质控层8中的二抗 结合，免疫胶体金6被截留，质控层8显色，反之质控层8不显色则证明免疫胶体金6失去 活力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸5，被吸水纸5所吸收；若水样中缺乏与检测层7的抗原相对应的微囊藻毒素抗原，由于免疫胶体金6含 有抗体，水样中的微囊藻毒素不与免疫胶体金6中的抗体充分反应，含有免疫胶体金6的 水样中含有富余抗原结合位点的微囊藻毒素抗体，水样通过虹吸作用泳动至检测层7，由于 水样中含有富余抗原结合位点的微囊藻毒素抗体，所以与检测层7中的微囊藻毒素抗原反 应，水样中的有颜色的免疫胶体金6被截留，检测层7显色，水样继续泳动至质控层8，剩余 的免疫胶体金6与质控层8中的二抗结合，免疫胶体金6被截留，质控层7显色，反之质控 层7不显色则证明免疫胶体金6失去活力，检测无效，多余的水样继续泳动至吸水纸5，被吸 水纸5所吸收。使用此方法只需将水样加在加样纸5上既可，操作方便、快捷迅速，本实用 新型生产方便成本低廉，并且可以同时对两种及三种微囊藻毒素进行同时检测。二抗可以是羊抗兔抗体，也可以是兔抗鼠抗体，也可以是羊抗鼠抗体，还可以是其 它的符合要求的二抗体。第一膜3可以是玻璃膜、硝酸纤维素膜、聚二氟乙烯树脂膜等能结 合免疫胶体金颗粒，在一定条件下能够最大限度的使免疫胶体金复溶，泳动性好的膜。第二 膜4可以是玻璃膜、硝酸纤维素膜、聚二氟乙烯树脂膜等泳动性好、分离性好，具吸附性的膜。如图1所示，为了避免免疫胶体金与第一膜3和第二膜4发生反应而失去活性，第 一膜3和第二膜4表面设置有隔离层9。隔离层9可以是由牛血清白蛋白组成的封闭液，隔 离层9也可以是由卵清蛋白组成的封闭液，隔离层9也可以是由脱脂奶粉组成的封闭液，隔 离层9也可以是由聚乙二醇组成的封闭液，隔离层9还可以是由其它任意符合要求的封闭 液。微囊藻毒素包括有三种类形，分别为MC-LR、MC-YR和MC-RR。针对微囊藻毒素 MC-LR、MC-YR、MC-RR其中一种进行分类检测，只需要第二膜4表面上涂有一条含有MC-LR 抗原或MC-YR或MC-RR抗原的检测层7。如图2所示，针对微囊藻毒素MC-LR、MC-YR、MC_RR其中两种形进行分类检测，若需 检测MC-LR和MC-YR，只需在第二膜4表面上涂含有MC-LR抗原和MC-YR抗原的两条检测 层。若需检测MC-LR和MC-RR，只需在第二膜4表面上涂两条含有MC-LR抗原和MC-RR抗 原的检测层若需检测MC-RR和MC-YR，只需在第二膜4面上涂两条含有MC-RR抗原和MC-YR 抗原的检测层7，两条检测层7彼此隔开，不相互干扰。如图3所示，若需要对微囊藻毒素中的MC_LR、YR、MC-RR三种进行同时分类检测， 只需要在第二膜4表面上涂有三条含有MC-RR抗原、MC-YR抗原和MC-LR抗原的检测层7， 三条检测层7彼此隔开，不相互干扰。
权利要求一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征在于它包括有背衬板(1)、加样纸(2)、用于承载免疫胶体金(6)的第一膜(3)、用于承载水样发生抗原抗体反应的第二膜(4)和吸水纸(5)，在背衬板(1)表面上设置有第二膜(4)，在第二膜(4)的一端和背村板(1)表面上设置有第一膜(3)，在第二膜(4)的另一端和背衬板(1)表面上设置有吸水纸(5)，第一膜(3)的表面上设置有一层免疫胶体金(6)，在第一膜(3)和背衬板(1)表面上设置有加样纸(2)，在第二膜(4)的表面上，设置有含有微囊藻毒素抗原的检测层(7)和含有二抗的质控层(8)。
2.如权利要求1所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征在于 第一膜(3)和第二膜(4)表面设置有隔离层(9)。
3.如权利要求2所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征在于 隔离层(9)是由牛血清白蛋白或卵清蛋白或脱脂奶粉或聚乙二醇组成的封闭液。
4.如权利要求1或2所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征在 于检测层(7)中的微囊藻毒素抗原是MC-LR。
5.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征 在于检测层(7)中的微囊藻毒素抗原是MC-RR。
6.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征 在于检测层(7)中的微囊藻毒素抗原是MC-YR。
7.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征 在于检测层(7)为两条，两条检测层(7)中的微囊藻毒素抗原分别是MC-LR和MC-RR。
8.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征 在于检测层(7)为两条，两条检测层(7)中的微囊藻毒素抗原分别是MC-LR和MC-YR。
9.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特征 在于检测层为两条(7)，两条检测层(7)中的微囊藻毒素抗原分别是MC-YR和MC-RR。
10.如权利要求1、2或3所述的一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，其特 征在于检测层(7)为三条，三条检测层(7)中的微囊藻毒素抗原分别是MC-LR、MC-RR和 MC-YR0
专利摘要一种用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸，它包括有背衬板、加样纸、用于承载免疫胶体金的第一膜、用于承载水样发生抗原抗体反应的第二膜和吸水纸，在背衬板表面上设置有第二膜，在第二膜的一端和背村板表面上设置有第一膜，在第二膜的另一端和背衬板表面上设置有吸水纸，第一膜的表面上设置有一层免疫胶体金，在第一膜和背衬板表面上设置有加样纸，在第二膜的表面上，设置有含有微囊藻毒素抗原的检测层和含有二抗的质控层。它用于检测水体中微囊藻毒素的胶体金试纸条，可以对水中的MC-LR、MC-RR和MC-YR三种微囊藻毒素进行简单准确的检测辨认。
文档编号G01N33/558GK201569656SQ20092029407
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者张亮, 曾惠, 杨澜, 罗教华, 舒为群, 谭瑶, 赵清, 邱志群, 陈济安, 黄玉晶 申请人:中国人民解放军第三军医大学军事预防医学院