专利名称：一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法
技术领域：
本发明涉及色谱分析技术，具体的说是一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法。
背景技术：
固相萃取(Solid Phase Extraction,简称SPE)是从20世纪80年代中期开始发展起来的一种样品前处理技术。它是通过固体吸附剂的选择性吸附和洗脱将液体样品(固体样品也可先制成液体样品)中的目标化合物与干扰化合物分离，以达到富集、分离、净化样品的目的。SPE是一个包括液相和固相的物理萃取过程，在固相萃取过程中，吸附剂对目标化合物的吸附力大于样品母液，当样品通过SPE柱时，目标化合物被吸附在固体表面，其他组分则随样品母液通过柱子，最后再用适当的溶剂将目标化合物洗脱并收集，然后进行色谱分析。固相萃取与传统的液液萃取相比有以下4个优点(1)可以获得高的回收率和高的富集倍数；(2)减少了高纯有机溶剂的用量，减少了对环境的污染，同时减少了有机溶剂中的杂质对被测分析物的影响；(3)无相分离操作，避免了乳化影响，易于收集分析物组分；(4)操作简单、快速、易于实现自动化。在过去的二十多年里，SPE已经成为最有用的样品前处理技术，用于色谱分析之前的快速、选择性的样品制备，从而延长色谱系统的寿命，改善定性和定量分析性能。它也可将目标分析物的原始基质环境变成较为简单以适合后续分析的体系，从而一定程度上缓解了对分析仪器的要求。固相萃取技术是目前环境、食品、生物等领域广泛应用的样品前处理方法。但是由于SPE柱与材料种类繁多，不同种类、不同品牌间性能存在很大差异，使得测量结果不确定性增加。针对SPE柱及材料的评价目前还没有形成体系，缺乏行之有效的测试方法。因此，研究SPE柱与SPE材料的评价方法，建立SPE柱测试评价的方法与参数， 对于保证产品质量，正确选择与使用SPE柱非常必要。强阴离子交换固相萃取柱主要应用于滥用药物和生物体液中的药物化合物、除去食品/农产品样品中的脂肪酸、尿液中的有机酸、土壤中的除草剂等医药和环境样品前处理。所以，评价强阴离子交换固相萃取柱有很大的现实意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法将强阴离子交换固相萃取柱特异性吸附目标化合物磺基水杨酸或鸟苷5'-磷酸二钠，而后检测目标化合物在固相萃取柱上的有效保留，进而实现对强阴离子交换固相萃取柱性能的测试。首先强阴离子交换固相萃取柱活化，将强阴离子交换固相萃取柱依次用甲醇、蒸馏水和乙酸钠水溶液冲洗萃取柱，以净化萃取柱，并提高其活性；其次上样将目标化合物溶液逐渐加入到固相萃取柱迫使目标化合物溶液通过固定相，使目标化合物保留在固定相上；最后通过洗脱液氨水水溶液和甲醇的混合溶液洗脱，使目标化合物洗脱下来，而后进行测定，计算回收率。所述强阴离子交换固相萃取柱活化，对强阴离子交换固相萃取柱冲洗，依次采用 3ml甲醇、3ml水、3ml的0. 05mol/L乙酸钠水溶液活化，控制的液体流速在0. 3 1. Oml/ min。所述目标化合物溶液为0. 6 1. 3mg/ml的磺基水杨酸或0. 6 1. 3mg/ml鸟苷5'-磷酸二钠，上样体积为3 6ml。所述目标化合物洗脱前将固相萃取柱依次用3ml蒸馏水、3ml 甲醇淋洗固相萃取柱，控制的液体流速在0. 3 1. Oml/min。所述洗脱液为5%氨水的水溶液和甲醇，5%氨水的水溶液和甲醇的体积比为50-100 50-0，控制的液体流速在0. 3 1. Oml/min。所述测定回收率，将收集的洗脱液定容后通过液相色谱进行分析其浓度，而后计算回收率
回收率 ％= c/c。X100%式中，c为洗脱溶液的浓度，C0为上样标准溶液的浓度。所述液相色谱分析条件当目标化合物为磺基水杨酸时流动相为按体积比为 70 30的乙腈和浓度为0. 05mol/L的磷酸二氢钾；流速为1. O 1. 8ml/min ；柱温为30°C; 紫外检测波长为215nm ；进样量为10 20 μ L ；当目标化合物为鸟苷5’-磷酸二钠时流动相为按体积比为30 70的乙腈和浓度为0. 05mol/L磷酸二氢钾；流速为1. O 1. 8ml/min ； 柱温为30°C ；紫外检测波长为253nm ；进样量为10 20 μ L。本发明所具有的优点1.本发明分别采用磺基水杨酸和鸟苷5’_磷酸二钠为目标化合物，建立了测试评价强阴离子交换固相萃取柱的方法。2.本发明通过优化上样溶剂、淋洗溶剂组成与条件，能够保证在测试中检测化合物在固相萃取柱上的有效保留。3.本发明建立了洗脱保留于固相萃取柱上的目标化合物的溶剂组成条件，能够将吸附于固相萃取柱上的目标物全部洗脱，用于液相色谱检测。4.本发明建立了液相色谱分离条件，并通过测试计算上样回收率的方法进行不同品牌固相萃取柱性能综合比较分析评价。该测试方法的建立，能够有效评价强阴离子交换固相萃取柱的吸附性能、重复性等性能。
图1为磺基水杨酸在不同流动相比例的色谱图。图2为磺基水杨酸在不同品牌强阴离子交换固相萃取柱上回收率结果图。图3为鸟苷5'-磷酸二钠在不同品牌强阴离子交换固相萃取柱上回收率结果图。
具体实施例方式实施例1用磺基水杨酸作为目标化合物对图2中Agela Cleanert强阴离子交换固相萃取柱进行测试
强阴离子交换固相萃取柱依次采用3ml甲醇、3ml水、3ml的0. 05mol/L乙酸钠水溶液活化，流速为0. 5ml/min,然后取目标化合物1. 000mg/ml磺基水杨酸5ml上样。而后依次采用3ml水、3ml甲醇淋洗固相萃取柱，速度为0. 5ml/min，最后用5ml体积比为50/50的 5%氨水溶液和甲醇洗脱，速度为0. 5ml/min，收集洗脱溶液，定容于5ml，过水相滤膜之后， 进行高效液相色谱分析。流动相为按体积比为70 30的乙腈和浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钾；流速为 1. 7ml/min ；柱温为30°C;紫外检测波长为215nm ；进样量为20 μ L(参见图1)。所述测定回收率，将收集的洗脱液定容后通过液相色谱进行分析其浓度。每个溶液进行3次分析取平均值。重复上述实验共两次。而后计算回收率回收率c/cQX100%，式中，c和Cq(Cq为1.000mg/ml)分别为洗脱溶液和上样标准溶液的浓度。按照上述步骤，改变洗脱溶剂中5%氨水溶液和甲醇比例分别为70/30和100/0， 重复进行实验。测试浓度数据和回收率数据见表1和图2。表1 5%氨水水溶液-甲醇不同体积比时磺基水杨酸的回收率
权利要求
1.一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于将强阴离子交换固相萃取柱特异性吸附目标化合物磺基水杨酸或鸟苷5'-磷酸二钠，而后检测目标化合物在固相萃取柱上的有效保留，进而实现对强阴离子交换固相萃取柱性能的测试。
2.按权利要求1所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于首先强阴离子交换固相萃取柱活化，将强阴离子交换固相萃取柱依次用甲醇、蒸馏水和乙酸钠水溶液冲洗萃取柱，以净化萃取柱，并提高其活性；其次上样将目标化合物溶液逐渐加入到固相萃取柱迫使目标化合物溶液通过固定相，使目标化合物保留在固定相上；最后通过洗脱液氨水水溶液和甲醇的混合溶液洗脱，使目标化合物洗脱下来，而后进行测定，计算回收率。
3.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述强阴离子交换固相萃取柱活化，对强阴离子交换固相萃取柱冲洗，依次采用Siil甲醇、3ml 水、3ml的0. 05mol/L乙酸钠水溶液活化，控制的液体流速在0. 3 1. Oml/min。
4.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述目标化合物溶液为0. 6 1. 3mg/ml的磺基水杨酸或0. 6 1. 3mg/ml鸟苷5'-磷酸二钠， 上样体积为3 6ml。
5.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述目标化合物洗脱前将固相萃取柱依次用3ml蒸馏水、3ml甲醇淋洗固相萃取柱，控制的液体流速在 0. 3 1. Oml/min。
6.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述洗脱液为5%氨水的水溶液和甲醇，5%氨水的水溶液和甲醇的体积比为50-100 50-0，控制的液体流速在0. 3 1. Oml/min。
7.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述测定回收率，将收集的洗脱液定容后通过液相色谱进行分析其浓度，而后计算回收率回收率 ％= c/c0X100%式中，c为洗脱溶液的浓度，C0为上样标准溶液的浓度。
8.按权利要求2所述的测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法，其特征在于所述液相色谱分析条件当目标化合物为磺基水杨酸时流动相为按体积比为70 30的乙腈和浓度为0. 05mol/L的磷酸二氢钾；流速为1. O 1. 8ml/min ；柱温为30°C ；紫外检测波长为 215nm ；进样量为10 20 μ L ；当目标化合物为鸟苷5’ -磷酸二钠时流动相为按体积比为 30 70的乙腈和浓度为0. 05mol/L磷酸二氢钾；流速为1. O 1. 8ml/min ；柱温为30°C ； 紫外检测波长为253nm ；进样量为10 20 μ L。
全文摘要
本发明涉及色谱分析技术，具体的说是一种测试强阴离子交换固相萃取柱性能的方法。将强阴离子交换固相萃取柱特异性吸附目标化合物磺基水杨酸或鸟苷5′-磷酸二钠，而后检测目标化合物在固相萃取柱上的有效保留，进而实现对强阴离子交换固相萃取柱性能的测试。发明建立了液相色谱分离条件，并通过测试计算上样回收率的方法进行不同品牌固相萃取柱性能综合比较分析评价。该测试方法的建立，能够有效评价强阴离子交换固相萃取柱的性能。
文档编号G01N30/02GK102192957SQ201010118320
公开日2011年9月21日 申请日期2010年3月5日 优先权日2010年3月5日
发明者张庆合, 马康 申请人:中国计量科学研究院