专利名称：一种胆石中检测华支睾吸虫卵的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测华支睾吸虫卵的方法，具体涉及一种胆石中检测华支睾吸虫卵的方法。
背景技术：
胆囊结石病是目前全世界范围内普通外科的常见病、多发病之一，在人群中发病 率约为10%。华支睾吸虫在我国有极为广泛的流行，在我国影响人群至少有8. 7亿，感染人 群估计达1500万，是流行我国的最重要食源性寄生虫。镜检发现华支睾吸虫卵是确诊华支 睾吸虫感染的主要方法，目前主要采用粪便和内镜获取十二指肠含胆汁的肠液后，制成薄 片进行普通光学显微镜镜检的方法检测华支睾吸虫卵，结果显示粪便直接薄片法检出率最 低，胆汁沉淀镜检检出率约为42. 6%，检出率低，容易造成漏诊，导致术后胆囊结石的高复 发率和胆囊结石的高发生率，延误了临床预防治疗华支睾吸虫感染的时机。
发明内容
目前研究结果表明华支睾吸虫感染与胆囊结石有密切相关性，针对普通光学镜检 方法，容易造成华支睾吸虫卵漏检的缺点，本发明提出一种胆石中检测华支睾吸虫卵的新 方法，提高了华支睾吸虫感染的检出率，为临床预防治疗华支睾吸虫感染和探索胆囊结石 与华支睾吸虫感染的相关性，从而为降低胆囊结石的发生率提供新的方法，达到早诊断，早 治疗，早预防的目的。为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的一种胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，1)首先将结石磨碎，过滤后制成薄片；2)通过光学显微镜观察上述薄片是否含有华支睾吸虫卵；3)如果未观察到有华支睾吸虫卵，通过扫描电子显微镜对上述薄片或者剖开的结 石进行观察；4)如果仍未观察到华支睾吸虫卵，通过聚合酶链反应检测方法进行检测。进一步，所述结石加入生理盐水进行磨碎，通过纱布过滤后加入生理盐水涂成薄 片。进一步，所述薄片先通过放大倍率为至少为100倍的低倍光学显微镜纵览整个薄 片，然后再用放大倍率为400倍以上的高倍光学显微镜观察其微细结构。进一步，所述聚合酶链反应检测是利用华支睾吸虫的特殊基因引物对可疑样品进 行DNA分析。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明通过胆石检测华支睾吸虫卵，显著提高了华支睾吸虫感染的检出率，为临 床预防治疗华支睾吸虫感染和探索胆囊结石与华支睾吸虫感染的相关性，从而为降低胆囊 结石的发生率提供新的方法，增加了诊断的准确性，达到早诊断，早治疗，早预防的目的。
具体实施例方式本发明所述的胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，首先取胆囊结石1 3颗，直径 0. 2 2. 2cm，加适量的生理盐水，用研钵磨碎结石，再加适量生理盐水，大于或等于260目 尼龙纱过滤。加少量生理盐水涂成薄片并标记好待镜检。每份结石薄片2 3张。然后用 光学显微镜先在低倍镜(至少100倍)纵览整个薄片，然后再用高倍光学显微镜400倍或 以上观察微细结构，如果观察到华支睾吸虫卵，就不再进行下述步骤。如果未观察到有华支睾吸虫卵，再通过扫描电子显微镜进行观察，扫描电子显微 镜镜检是对上述薄片中可疑的部位，至少放大7倍 100万倍或以上进行观察，同时也可对 部分结石直接剖开后进行镜检，如果观察到华支睾吸虫卵，就不再进行下述步骤。如果仍未观察到有华支睾吸虫卵，最后通过聚合酶链反应(PCR)检测方法进行检测。聚合酶链反应检测是在利用上述的磨碎结石过滤普通光学显微镜镜检、扫描电子显微 镜镜检难以观察到华支睾吸虫卵，将利用华支睾吸虫的特殊基因引物对可疑样品进行DNA 分析，以精确判断病人的病原体感染。本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明 的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发 明也意图包含这些改动和变形。
权利要求
一种胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，其特征在于1)首先将结石磨碎，过滤后制成薄片；2)通过光学显微镜观察上述薄片是否含有华支睾吸虫卵；3)如果未观察到有华支睾吸虫卵，通过扫描电子显微镜对上述薄片或者剖开的结石进行观察；4)如果仍未观察到华支睾吸虫卵，通过聚合酶链反应检测方法进行检测。
2.根据权利要求1所述的胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，其特征在于所述结石加 入生理盐水进行磨碎，通过纱布过滤后加入生理盐水涂成薄片。
3.根据权利要求1所述的胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，其特征在于所述薄片先 通过放大倍率为至少为100倍的低倍光学显微镜纵览整个薄片，然后再用放大倍率为400 倍以上的高倍光学显微镜观察其微细结构。
4.根据权利要求1所述的胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，其特征在于所述聚合酶 链反应检测是利用华支睾吸虫的特殊基因引物对可疑样品进行DNA分析。
全文摘要
本发明涉及一种检测华支睾吸虫卵的方法，具体涉及一种胆石中检测华支睾吸虫卵的方法，其步骤包括1)首先将结石磨碎，过滤后制成薄片；2)通过光学显微镜观察上述薄片是否含有华支睾吸虫卵；3)如果未观察到有华支睾吸虫卵，通过扫描电子显微镜对上述薄片或者剖开的结石进行观察；4)如果仍未观察到华支睾吸虫卵，通过聚合酶链反应检测方法进行检测，本发明通过胆石检测华支睾吸虫卵，显著提高华支睾吸虫感染的检出率，为临床预防治疗华支睾吸虫感染和探索胆囊结石与华支睾吸虫感染的相关性，从而为降低胆囊结石的发生率提供新的方法，增加了诊断的准确性，达到早诊断，早治疗，早预防的目的。
文档编号G01N23/225GK101799438SQ20101012355
公开日2010年8月11日 申请日期2010年3月10日 优先权日2010年3月10日
发明者乔铁, 蔡洪英, 谢景夏, 马瑞红 申请人:广州市番禺区胆囊病研究所