专利名称：：甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法
技术领域：
：本发明涉及甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，属于化药领域。
背景技术：
：甘油磷酸钠作为营养药，是α-甘油磷酸钠与β-甘油磷酸钠的混合物。其中，β-甘油磷酸钠是药效部分，而α-甘油磷酸钠并不具备药物活性，目前现有合成工艺生产的β-甘油磷酸钠含量较低。甘油磷酸钠制备过程及成品需要检测游离磷酸盐，目前现有技术中没有简单有效的方法
发明内容本发明目的在于提供一种甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法。本发明所述甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法为采用紫外-可见分光光度法测定，波长范围为700-715nm；供试品溶液制备方法为甘油磷酸钠水溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇勻，放置5分钟以上；对照品溶液制备方法为磷酸盐标准溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇勻，放置5分钟以上；其中钼酸铵溶液为钼酸铵水溶液与硫酸水溶液的混合液，钼酸铵与硫酸摩尔比为1140-160，优选为1150；氯化亚锡溶液为氯化亚锡溶液的盐酸水溶液，氯化亚锡与盐酸的摩尔比为17-12，优选为110;所述磷酸盐标准溶液中磷酸盐为4X10_5-6X10_5摩尔/升；优选5.26XΙΟ"5摩尔/升。甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法包括如下步骤供试品溶液取甘油磷酸钠0.5-1.5g，精密称定，置IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取5-15ml至IOOml容量瓶中，加水40_60ml，摇勻，加钼酸铵溶液2_6ml摇勻，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置5_20分钟；对照品溶液取磷酸盐标准溶液10-30ml至IOOml容量瓶中，加水40_60ml，摇勻，加钼酸铵溶液2-6ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置5-20分钟；空白溶液取IOOml容量瓶，加水40-60ml，加钼酸铵溶液2_6ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置5-20分钟；测定法照紫外_可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得；所述供试品溶液中钼酸铵溶液的制备方法为取钼酸铵l_4g，加水10_30ml，加热溶解，取硫酸20-40ml用40-60ml水稀释放冷，混合两液，并用水稀释成IOOml；所述供试品溶液中氯化亚锡溶液的制备方法为取氯化亚锡2_4g，加盐酸0.5-1.5ml溶解，加水至5-15ml，量取0.5-1.5ml加l_3mol/L盐酸溶液5_15ml，混合，即得；所述对照品溶液中磷酸盐标准溶液的制备方法为精密称取磷酸二氢钾0.4-1.Og至1000ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取0.5-1.5ml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得。上述游离磷酸盐的检测方法优选为供试品溶液取甘油磷酸钠1.00g，精密称定，置IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液20ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.Iml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟；测定法照紫外_可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得；所述供试品溶液中钼酸铵溶液的制备方法为取钼酸铵2.5g，加水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释放冷，混合两液，并用水稀释成IOOml；所述供试品溶液中氯化亚锡溶液的制备方法为取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得；所述对照品溶液中磷酸盐标准溶液的制备方法为精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得。本发明提供的检测方法，具有精度高、重复性好、易操作、抗干扰的特点。具体实施例方式实施例1游离磷酸盐的检测方法供试品溶液精密称取甘油磷酸钠1.OOg至IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液(取钼酸铵2.5g，力口水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释，放冷，混合两液，并用水稀释成100ml)4ml,摇勻，加氯化亚锡溶液(取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得。)0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液(精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得)20ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟。测定法照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版附录IVA)，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。实施例2:稳定性试验取实施例1对照品溶液，分别于0分钟、5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、60分钟、90分钟在707nm波长处测定吸收值，结果吸收值在10分钟前不稳定，但在10至90分钟内吸收值几乎无变化，即溶液应放置10分钟使其显色完全，10至90分钟内溶液稳定。表1放置时间与吸收值的关系<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例3线性考察实验(实施例1的方法)分别精密量取磷酸盐标准溶液Iml、2ml、5mlUOml,20ml、25ml、30ml至100ml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.Iml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；以上述空白溶液作空白，在707nm波长测定吸收值，并以吸收值A对相应的浓度C进行线性回归。结果表明，磷酸盐(以PO43-)在0.051.5μg/ml浓度范围内，线性关系良好，回归方程为C=3.673A-0.0073，r=0.999，η=7。表2吸收值与浓度的关系<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例4重复性试验精密称取甘油磷酸钠各l.OOg至IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，作为供试品溶液。分别精密量取磷酸盐标准溶液适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，分别得每Iml中含磷酸盐(以P043_)约0.75μg、1.00g、l.25g的溶液，放置10分钟，即得三种不同浓度的对照品溶液。分别依法测定吸收值，以不同对照品浓度，分别计算游离磷酸盐的含量。结果表明，重复性满意。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例5干扰试验1、供试品溶液1(不加甘油)精密称取三批甘油磷酸钠各1.OOg至IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液(取钼酸铵2.5g，加水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释，放冷，混合两液，并用水稀释成100ml)4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液(取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得。本液应临用新配。)0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。2、供试品溶液2(加甘油)精密称取上述三批甘油磷酸钠各1.OOg至IOOml容量瓶中，加水50ml溶解，再分别加入甘油l.Og，摇勻，加水稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.Iml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。3、供试品溶液3(甘油)精密称取甘油约0.Ig至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。4、对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液(精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得)20ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。5、空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.Iml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟。6、测定法照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版附录IVA)，在707nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得。表4批号0802100-010802140-010803040-01甘油含Ρ0Λ(不加甘油)0.050%0.041%0.048%0%含Ρ0Λ(加甘油)0.052%0.043%0.045%最大偏差0.002%0.002%0.003%/_^___甘油对游离磷酸盐的含量测定无干扰__7、测定结果供试品溶液3(甘油)在707nm的波长处几乎无吸光度，供试品溶液1(不加甘油)和供试品溶液2(加甘油)，测定的游离磷酸盐结果几乎无差别，则证明甘油对游离磷酸盐含量测定无干扰。实施例6甘油磷酸钠的制备方法(1)成盐、酯化将定量的磷酸、甘油投入到酯化反应缸内，再加入碳酸钠，三者按重量计为碳酸钠53g、磷酸98g、甘油184g；通入蒸气；在反应缸内磷酸与碳酸钠发生盐反应生成磷酸二氢钠，然后磷酸二氢钠与甘油发生酯化反应生成双酯甘油磷酸钠；反应过程控制PH值为3.0-5.5、保持蒸气压力0.4-0.5MPa、反应温度130°C；反应完后加适量的纯化水使之稀释；(2)水解待酯化后，加入40ml30%氢氧化钠溶液；双酯甘油磷酸钠与氢氧化钠发生水解反应生成甘油磷酸钠和甘油；此反应过程需煮沸后回流10个小时，PH值控制在8.0-11.0，应加2.5mlNa0H；水解完后根据中检游离磷酸盐的含量，加入1.5g的MgO，以除去反应后的游离磷酸盐；(3)浓缩、分离游离甘油将粗品甘油磷酸钠浓缩，并将游离甘油分离；(4)成品脱色将分离合格后的粗品甘油磷酸钠脱色，取样中检合格后可作液状成品包装，或者通过结晶做固体包装；(5)结晶，甩干，烘干结晶，甩干，烘干，取样全检，合格后包装入库；其中，步骤(2)水解反应中游离磷酸盐的含量用如下方法定量检测实施例7实施例6甘油磷酸钠制备中游离磷酸盐的检测供试品溶液取甘油磷酸钠1.00g，精密称定，置IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液(取钼酸铵2.5g，加水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释放冷，混合两液，并用水稀释成100ml)4ml摇勻，加氯化亚锡溶液(取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得；本液应临用新配)0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液(精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得)20ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟；测定法照紫外_可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。实施例8甘油磷酸钠的制备方法(1)成盐、酯化将定量的磷酸、甘油投入到酯化反应缸内，再加入碳酸钠，三者按重量计为碳酸钠53g、磷酸98g、甘油184g；通入蒸气；在反应缸内磷酸与碳酸钠发生盐反应生成磷酸二氢钠，然后磷酸二氢钠与甘油发生酯化反应生成双酯甘油磷酸钠；反应过程控制PH值为3.5、保持蒸气压力0.45MPa、反应温度135°C；反应完后加适量的纯化水使之稀释；(2)水解待酯化后，加入50ml30%氢氧化钠溶液；双酯甘油磷酸钠与氢氧化钠发生水解反应生成甘油磷酸钠和甘油；此反应过程需煮沸后回流10个小时，PH值控制在9.0，应加2mlNaOH；水解完后根据中检游离磷酸盐的含量，加入l_2g的MgO，以除去反应后的游离磷酸盐；(3)浓缩、分离游离甘油将粗品甘油磷酸钠浓缩，并将游离甘油分离；(4)成品脱色将分离合格后的粗品甘油磷酸钠脱色，取样中检合格后可作液状成品包装，或者通过结晶做固体包装；(5)结晶，甩干，烘干结晶，甩干，烘干，取样全检，合格后包装入库；其中，步骤(2)水解反应中游离磷酸盐的含量用如下方法定量检测供试品溶液取甘油磷酸钠1.20g，精密称定，置IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液(取钼酸铵2.5g，加水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释放冷，混合两液，并用水稀释成100ml)3ml摇勻，加氯化亚锡溶液(取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得；本液应临用新配)0.12ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液(精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得)15ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液6ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.06ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液6ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.06ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟；测定法照紫外_可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。实施例9方案筛选总结一、方法1.方法1(滴定法)取本品2.5g，精密称定，加水25ml，摇勻，加麝香草酚蓝指示液2滴，用盐酸滴定液(0.lmol/L)滴定至黄色，再加氯化钙溶液(3—10)(对麝香草酚蓝指示液显中性)40ml，煮沸5分钟，放冷，用氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)滴定至蓝色，每Iml的氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)相当于9.5mg的游离磷酸盐(以P043_计)。重复性试验(甘油磷酸钠中游离磷酸盐含量彡0.1时)样品1_1_2_3_4_5_RSD%_P0,%_032_035_031_030_033_6.0%重复性试验(甘油磷酸钠中游离磷酸盐含量<0.时)样品2_1_2_3_4_5_RSD%P0,%_008_012_012_014_013_19.3%从以上实验数据可以证明本法重复性差，精密度低，误差大，特别是当甘油磷酸钠中的游离磷酸盐含量低于0.时，误差很大，弃用。2.方法2供试品溶液精密称取甘油磷酸钠1.OOg至IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密吸取IOml至IOOml量瓶中，精密加入显色试液〔3mol/L硫酸-水-2.5%钼酸铵溶液-10%抗坏血酸溶液(1511)〕10ml，加水稀释定容，置45°C水浴中加热10分钟，放冷至室温。对照品溶液精密称取磷酸二氢钾(105°C干燥至恒重)0.716g，置IOOOml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml量瓶中，精密加入显色试液〔3mol/L硫酸-水-2.5%钼酸铵溶液-10%抗坏血酸溶液(1511)〕10ml，加水稀释定容，置45°C水浴中加热10分钟，放冷至室温。空白溶液取IOOml容量瓶，精密加入显色试液〔3mol/L硫酸-水-2.5%钼酸铵溶液-10%抗坏血酸溶液(1511)〕10ml，加水稀释定容，置45°C水浴中加热10分钟，放冷至室温。测定法照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版附录IVA)，在650nm的波长处测定吸光度，计算，即得。3.方法3供试品溶液精密称取甘油磷酸钠1.OOg至IOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取IOml至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液(取钼酸铵2.5g，力口水20ml，加热溶解，取硫酸28ml用50ml水稀释，放冷，混合两液，并用水稀释成100ml)4ml,摇勻，加氯化亚锡溶液(取氯化亚锡3.3g，加盐酸Iml溶解，加水至10ml，量取Iml加2mol/L盐酸溶液9ml，混合，即得。本液应临用新配。)0.lml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液(精密称取磷酸二氢钾0.716g至IOOOml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取1.Oml至IOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得)20ml或适量至IOOml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟。空白溶液取IOOml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟。测定法照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版附录IVA)，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。二、方法2与方法3的比较1.条件比较方法2常温下显色慢，需水浴45'C加热10分钟-方法3_常温放置10分种即显色完全_2.稳定性比较供试品溶液放置时间与吸收值的关系放置时间(inin)_1_2030_40_50_60_90方法2_0.3520.3600.3630.3700.3750.3820.388方法3_0.2780.2760.2770.2770.2780.2780.2763.回收率试验比较在线性浓度范围内配制了7个不同浓度的磷酸二氢钠标准溶液，分别按1比1加入甘油及甘油磷酸钠对照品进行回收率试验。浓度(WgAnl)_0.050_0.1000.2500.500_1.001.251.50方法2:回收率_99.4%_104.8%97.4%106.1%105.7%98.4%107.2%方法3:回收率_99.4%_98.6%98.8%99.0%99.6%99.1%99.8%4.重复性试验配制三个不同浓度的标准溶液，测定同一批甘油磷酸钠制成的三个供试液中的游<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上实验数据表明，方法2显色条件应加热，不稳定，重复性差，回收率偏差大，甘油及甘油磷酸钠对游离磷酸盐测定有干扰，方法3常温下10分钟显色完全且稳定，重复性好，回收率好，甘油及甘油磷酸钠对游离磷酸盐测定无干扰，测定结果准确、可靠、简便、快速。权利要求一种甘油磷酸钠中游离磷酸盐的定量检测方法，其特征在于该方法为供试品溶液取甘油磷酸钠0.5-1.5g，精密称定，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取5-15ml至100ml容量瓶中，加水40-60ml，摇匀，加钼酸铵溶液2-6ml摇匀，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇匀，加水稀释至刻度，摇匀，放置5-20分钟；对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液10-30ml至100ml容量瓶中，加水40-60ml，摇匀，加钼酸铵溶液2-6ml，摇匀，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇匀，加水稀释至刻度，摇匀，放置5-20分钟；空白溶液取100ml容量瓶，加水40-60ml，加钼酸铵溶液2-6ml，摇匀，加氯化亚锡溶液0.05-0.15ml，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置5-20分钟；测定法照紫外-可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述供试品溶液中钼酸铵溶液的制备方法为取钼酸铵l_4g，加水10-30ml，加热溶解，取硫酸20-40ml用40-60ml水稀释放冷，混合两液，并用水稀释成100ml；所述供试品溶液中氯化亚锡溶液的制备方法为取氯化亚锡2-4g，加盐酸0.5-1.5ml溶解，加水至5-15ml，量取0.5-1.5ml加l_3mol/L盐酸溶液5_15ml，混合，即得；所述对照品溶液中磷酸盐标准溶液的制备方法为精密称取磷酸二氢钾0.4-1.0g至1000ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇勻；精密量取0.5-1.5ml至100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，即得。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于该方法为供试品溶液取甘油磷酸钠1.00g，精密称定，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密吸取10ml至100ml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；对照品溶液精密量取磷酸盐标准溶液20ml或适量至100ml容量瓶中，加水50ml，摇勻，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水稀释至刻度，摇勻，放置10分钟；空白溶液取100ml容量瓶，加水50ml，加钼酸铵溶液4ml，摇勻，加氯化亚锡溶液0.1ml，摇勻，加水至刻度，摇勻，放置10分钟；测定法照紫外_可见分光光度法，在707nm的波长处测定吸光度，计算，即得。4.甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，其特征在于该方法为采用紫外-可见分光光度法测定，波长范围为700-715nm；供试品溶液制备方法为甘油磷酸钠水溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇勻，放置5分钟以上；对照品溶液制备方法为磷酸盐标准溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇勻，放置5分钟以上；其中钼酸铵溶液为钼酸铵水溶液与硫酸水溶液的混合液，钼酸铵与硫酸摩尔比为1140-160;氯化亚锡溶液为氯化亚锡的盐酸水溶液，氯化亚锡与盐酸的摩尔比为17-12；所述磷酸盐标准溶液中磷酸盐为4X10_5-6X10_5摩尔/升。5.如权利要求4所述的甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，其特征在于钼酸铵溶液钼酸铵与硫酸摩尔比为1150。6.如权利要求4所述的甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，其特征在于氯化亚锡溶液中氯化亚锡与盐酸的摩尔比为110。7.如权利要求4所述的甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，其特征在于磷酸盐标准溶液中磷酸盐为5.26X10_5摩尔/升。8.如权利要求4所述的甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法,其特征在于紫外_可见分光光度法测定时波长为707nm。全文摘要本发明公开了甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法，采用紫外-可见分光光度法测定，波长范围为700-715nm；供试品溶液制备方法为甘油磷酸钠水溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇匀，放置5分钟以上；对照品溶液制备方法为磷酸盐标准溶液先后加入钼酸铵溶液与氯化亚锡溶液，摇匀，放置5分钟以上；本发明提供的检测方法，具有精度高、重复性好、易操作、抗干扰的特点。文档编号G01N21/33GK101832920SQ20101019455公开日2010年9月15日申请日期2010年6月8日优先权日2009年9月1日发明者申辛申请人:紫光古汉集团衡阳制药有限公司