专利名称：一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法， 属于生物学免疫方法的检测技术领域。
背景技术：
西布曲明是一种中枢神经作用减肥药，具有兴奋、抑食等作用，它有可能引起血压 升高、心率加快、厌食、失眠、肝功能异常等危害严重的副作用。因为其价格低廉，且确有一 定的抑食减肥功效，屡被一些不法生产企业非法添加入减肥保健品中，牟取暴利。据调查， 市面上销售的98%的减肥产品中均添入了这种成分。西布曲明会增加服用者患心脏病及中 风的风险，其说明书中也明确列出了高血压控制不理想患者，以及有冠心病、心衰、心律失 常和中风的患者属于禁忌服药范畴，如消费者在不知情的情况下服用了含有该成分的减肥 保健食品，有可能产生严重的后果，所以，为了保证人民群众的饮食用药安全，我们必须加 大力度打击非法添加现象。然而近年来，不法分子非法产生的手段日趋隐蔽，且西布曲明检 测方法较复杂，需要精密的分析仪器和专业技术人员，因而造成监管部门监督抽验成本很 大，收效却不甚理想。如申请号为200910030401. 1的一篇专利一种快速检测西布曲明的 胶体金层析试纸条及制备方法，制备方法采用浸泡工艺，时间长，需要2-3小时，干燥慢，该 胶体金层析检测试纸条以胶体金标记的多克隆抗体为基础制备而成，亲和力低，特异性弱， 易引起交叉。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上的不足，提供一种能快速、灵敏、简便地检测西布曲 明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法。本发明是通过以下技术方案来实现一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金 层析试纸条，用于检测西布曲明及其衍生物，包括衬板，衬板的一端设有样品垫，衬板的另 一端设有吸水垫，衬板的中间设有包被膜，样品垫与包被膜之间设有金标结合垫，金标结合 垫为吸附西布曲明及其衍生物的金标抗体的聚酯纤维毡，在包被膜上有用西布曲明及其衍 生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式检测线τ线，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线 C线，两条线竖向平行排列。衬板为不吸水的PCV韧性材料。包被膜为硝酸纤维素膜，或混 合纤维素膜。吸水垫为植物纤维棉纸。西布曲明及其衍生物的金标抗体为胶体金标记的抗 西布曲明及其衍生物单克隆抗体复合物，偶联西布曲明及其衍生物的载体蛋白为牛血清白 蛋白BSA。一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条的制备方法，制备偶联西 布曲明及其衍生物的载体蛋白，用于制备相应的检测线T线；制备偶联西布曲明及其衍生 物的载体鸡卵清白蛋白，用于制备单克隆抗体，制备西布曲明及其衍生物金标抗体，用于制 备吸附西布曲明及其衍生物金标抗体的聚酯纤维毡；制备羊抗鼠IgG抗体，用于制备对照线C线，包括如下步骤
(A)将西布曲明及其衍生物与载体牛血清白蛋白BSA/鸡卵清白蛋白OVA进行偶联制备 人工合成抗原；
a、生成水溶性碳化二亚胺(EDC):往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺(DMF)及那非类 原料或拉非类原料，并通N2保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺(DMF)完全溶解后，快 速称取浓度为60%的氢化钠(NaH)，并将其加入所述反应瓶中，搅拌50-70分钟，直至溶液 无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下 搅拌11-13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na2SO4 进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后 进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；将无水乙醇和上述步骤所得的 烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止 加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至PH值 为7-9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na2SO4干燥， 过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺 (EDC)；
b、生成人工合成抗原将上述步骤中所得的水溶性碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰 亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、半抗原化合物平衡至室温；取上述步骤中所得的水溶性 碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物，三者的摩尔比为半抗原化合物水溶性 碳化二亚胺N-羟基琥珀酰亚胺=1 8-12 :13-16，将其置入圆底烧瓶，然后加入上述步骤 中所得的二甲基甲酰胺溶解，为保证反应完全，在室温避光的条件下进行搅拌，最后生成的 溶液记为二号反应液；当所述水溶性碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物在二 甲基甲酰胺中反应完全后，现配载体蛋白溶液(BSA / 0VA)，将载体蛋白与硼酸缓冲液按 1:0. 15-0. 2的量溶解于另一容器中的硼酸缓冲液，然后转入另一圆底烧瓶中，此溶液记为 三号反应液；将二号反应液按每10秒1滴的速度滴入三号反应液中，直至将二号的反应液 加完后，先在室温避光的条件下进行搅拌，之后在3-5°C条件下避光搅拌，待反应完全后，生 成溶液，并将生成的溶液记为四号反应液，四号反应液中载体蛋白与半抗原化合物比例为 1:15-25;等所有反应结束后，将四号反应液置于20000-30000分子截留透析袋中，透析袋 中还装有0. 01-0. 02M磷酸盐缓冲液，pH值为7. 0-7. 5，将透析袋在3_5°C的条件下进行透 析，每隔3-5小时换一次磷酸盐缓冲液；经上述透析步骤最终所得的产品，经冷冻干燥为白 色絮状产品，即为人工合成抗原。 (B)将人工合成抗原OVA按常规方法免疫制备西布曲明及其衍生物的单克隆抗体 细胞株，用Babc小鼠免疫制备抗体腹水，将腹水纯化得到高纯度的单克隆抗体蛋白，测定 蛋白浓度，备胶体金标记用；
(C)用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm的胶体金溶液；
(D)用0.lmol/LK2C03调节胶体金溶液至最适PH值(8. 5-9. 0)，将适量纯化的单克隆 抗体纯水透析(4hr)后，加入胶体盆中，室温电磁搅拌(15-30min),逐滴加入1%络蛋白溶 液，使络浓度为0. 1%，持续搅拌5min，4°C下15000rpm离心lOmin，弃去上清去沉淀物，将沉 淀物用重悬液重新恢复至原体积混勻，再次离心一次，用重悬溶液将沉淀物混悬至原体积 1/20，4°C保存备用，即获得抗西布曲明及其衍生物单克隆抗体的胶体金标记物，重悬液为
5含5%海藻的0. 02Tris-HCL缓冲液；
(E)将1 :20-1:10稀释的西布曲明及其衍生物胶体金标记抗体喷涂吸附于聚酯纤维 毡中，27°C保温干燥，制备西布曲明及其衍生物金标结合垫；
(F)在包被膜上用西布曲明及其衍生物偶联的载体牛血清白蛋白BSA溶液包被直线式 检测线T线，用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线，两条线竖向平行排列；
(G)试纸条的组装将样品垫、金标组合垫、包被膜和吸水垫依次粘附在衬板上，样品 垫置于衬板的一端，吸水垫置于衬板的另一端，包被膜置于衬板的中间，金标结合垫置于样 品垫和包被膜之间，即得到用于免疫检测的西布曲明及其衍生物胶体金层析检测试验纸大 板，将大板按顾客要求分切成2. 5mm-7. Omm宽度规格的试纸条，密封干燥保存。本发明与现有技术相比具有以下优点
1、特异性强，敏感性高。该胶体金层析检测试纸条以胶体金标记高特异性高亲和力静 电吸附的单克隆抗体为基础制备而成；
2、简便、快速、时效性强，使用胶体金层析检测试纸条和试纸卡，无需任何其它试剂和 仪器，可现场操作，将样品用提取液混合后，取上清液进行检测，在5min即可判定检测结 果；
3、结果显示形象、直观、准确。检测试纸条均以显示红色线T线和C线作为检测结果阳 性和阴性标记，即在包被膜上显示一条红色线C线时，表示在被检样品中含有被检物，显 示两条红色线T线和C线时，表示在被减样品中不含被检物。结果判定形象、直观、准确、简 单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判；
4、制备方法采用喷涂工艺，简单快速，喷涂均勻，干燥快。
图1为本发明胶体金层析试纸条的剖面结构示意图； 图2为本发明胶体金层析试纸条的俯视结构示意图中标号1-衬板、2-样品垫、3-金标结合垫、4-包被膜、5-吸水垫、6-T线、7-C线。
具体实施例方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例和附图对本发明作进一步详述，该实施 例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。如图1、图2所示一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，胶体金 层析试纸条用于检测西布曲明及其衍生物，由衬板1和在衬板1上依次衔接的样品垫2、金 标结合垫3、包被膜4和吸水垫5组成，金标结合垫3为吸附西布曲明及其衍生物的金标抗 体的聚酯纤维毡，在包被膜4上有用西布曲明及其衍生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式 检测线T线6，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线7，两条线竖向平行排列。衬板1 为不吸水的PCV韧性材料。包被膜4为硝酸纤维素膜，或混合纤维素膜。吸水垫5为植物 纤维棉纸。西布曲明及其衍生物的金标抗体为胶体金标记的抗西布曲明及其衍生物的单克 隆抗体复合物，偶联西布曲明及其衍生物的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA。一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条的制备方法，制备偶联西 布曲明及其衍生物的载体牛血清白蛋白BSA，用于制备相应的检测线T线6 ；制备偶联西布 曲明及其衍生物的载体鸡卵清白蛋白，用于制备单克隆抗体，制备西布曲明及其衍生物金
6标抗体，用于制备吸附西布曲明及其衍生物金标抗体的聚酯纤维毡；制备羊抗鼠IgG抗体， 用于制备对照线C线7，包括如下步骤
(A)将西布曲明及其衍生物与载体牛血清白蛋白BSA/鸡卵清白蛋白OVA进行偶联制备 人工合成抗原；
a、生成水溶性碳化二亚胺(EDC):往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺(DMF)及那非类 原料或拉非类原料，并通N2保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺(DMF)完全溶解后，快 速称取浓度为60%的氢化钠(NaH)，并将其加入所述反应瓶中，搅拌50-70分钟，直至溶液 无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下 搅拌11-13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na2SO4 进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后 进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；将无水乙醇和上述步骤所得的 烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止 加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至PH值 为7-9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na2SO4干燥， 过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺 (EDC)；
b、生成人工合成抗原将上述步骤中所得的水溶性碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰 亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、半抗原化合物平衡至室温；取上述步骤中所得的水溶性 碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物，三者的摩尔比为半抗原化合物水溶性 碳化二亚胺N-羟基琥珀酰亚胺=1 8-12 :13-16，将其置入圆底烧瓶，然后加入上述步骤 中所得的二甲基甲酰胺溶解，为保证反应完全，在室温避光的条件下进行搅拌，最后生成的 溶液记为二号反应液；当所述水溶性碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物在二 甲基甲酰胺中反应完全后，现配载体蛋白溶液(BSA / 0VA)，将载体蛋白与硼酸缓冲液按 1:0. 15-0.2的量溶解于另一容器中的硼酸缓冲液，然后转入另一圆底烧瓶中，此溶液记为 三号反应液；将二号反应液按每10秒1滴的速度滴入三号反应液中，直至将二号的反应液 加完后，先在室温避光的条件下进行搅拌，之后在3-5 °C条件下避光搅拌，待反应完全后，生 成溶液，并将生成的溶液记为四号反应液，四号反应液中载体蛋白与半抗原化合物比例为 1:15-25 ；等所有反应结束后，将四号反应液置于20000-30000分子截留透析袋中，透析袋 中还装有0. 01-0. 02M磷酸盐缓冲液，pH值为7. 0-7. 5，将透析袋在3_5°C的条件下进行透 析，每隔3-5小时换一次磷酸盐缓冲液；经上述透析步骤最终所得的产品，经冷冻干燥为白 色絮状产品，即为人工合成抗原；
(B)将人工合成抗原OVA按常规方法免疫制备西布曲明及其衍生物的单克隆抗体细胞 株，用Babc小鼠免疫制备抗体腹水，将腹水纯化得到高纯度的单克隆抗体蛋白，测定蛋白 浓度，备胶体金标记用；
(C)用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm的胶体金溶液；
(D)用0.lmol/LK2C03调节胶体金溶液至最适PH值(8. 5-9. 0)，将适量纯化的单克隆 抗体纯水透析(4hr)后，加入胶体盆中，室温电磁搅拌(15-30min),逐滴加入1%络蛋白溶 液，使络浓度为0. 1%，持续搅拌5min，4°C下15000rpm离心lOmin，弃去上清去沉淀物，将沉 淀物用重悬液重新恢复至原体积混勻，再次离心一次，用重悬溶液将沉淀物混悬至原体积1/20，4°C保存备用，即获得抗西布曲明及其衍生物单克隆抗体的胶体金标记物，所述重悬 液为含5%海藻的0. 02Tris-HCL缓冲液；
(E)将1:20-1:10稀释的西布曲明及其衍生物胶体进标记抗体喷涂吸附于聚酯纤维毡 中，27°C保温干燥，制备西布曲明及其衍生物金标结合垫3，喷涂工艺简单快速，喷涂均勻， 过程只需20分钟，干燥快；
(F)在包被膜4上用西布曲明及其衍生物偶联的载体牛血清白蛋白BSA溶液包被直线 式检测线T线6，用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线7，两条线竖向平行排列；
(G)试纸条的组装将样品垫2、金标组合垫3、包被膜4和吸水垫5依次粘附在衬板1 上，样品垫2置于衬板1的一端，吸水垫5置于衬板1的另一端，包被膜4置于衬板1的中 间，金标结合垫3置于样品垫2和包被膜4之间，即得到用于免疫检测的西布曲明及其衍 生物胶体金层析检测试验纸大板，将大板按顾客要求分切成2. 5mm-7. Omm宽度规格的试纸 条，密封干燥保存。西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条的检测反应原理西布曲明及其衍 生物属于小分子物质。本发明采用竞争法，即样品中的西布曲明及其衍生物和固定在包被 膜4上的包被抗原M2-BSA竞争胶体进标记的抗西布曲明及其衍生物单克隆抗体。当试纸 条以样品垫2末端浸入样本后，样品溶液沿着试纸条通过毛细作用从下往上泳动，溶解金 标垫上干燥的金标抗体，若待测样品中不存在待测药物，则金标抗体会直接泳动到检测线 和硝酸纤维膜上的M2-BSA发生免疫反应，从而胶体金颗粒发生聚集，形成红色线条，然后 其他未结合的金标抗体继续通过毛细管作用向前泳动，与对照线上的羊抗鼠二抗发生第二 次免疫反应，同样形成红色线条，这样包被膜4上就会有两条红色线条，表示样品为阴性。 若待测样品中存在待测药品，则金标抗体首先会和样品中的检测物发生免疫反应，当未发 生反应的金标抗体有剩余时，才会在检测线上与M2-BSA发生免疫反应，形成红色线条，其 颜色强度弱于阴性时的线条强度；而当金标抗体全部和样品中的西布曲明及其衍生物发生 免疫结合时，就不会再有抗体与对照线包被原结合，从而检测线就不会有红色线条出现。对 照线是为检验金标免疫层析方法本身是否有效而设定的，所以无论样品中是否存在待测药 物，对照线都应该显现。如果对照线不显色，则说明试纸条失效。本发明特异性强，敏感度高，检出最低限量可达到5ppb ；简便、快速、时效性强， 无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸条加入被检样品液后，在15分钟内即可判定 检测结果；结果显示形象、直观、准确；节省费用，适用范围广，便于推广。
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权利要求
一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，其特征在于由衬板(1)和在衬板(1)上依次衔接的样品垫(2)、金标结合垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)组成，金标结合垫(3)为吸附西布曲明及其衍生物的金标抗体的聚酯纤维毡，在包被膜(4)上有用西布曲明及其衍生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式检测线T线(6)，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线(7)，两条线竖向平行排列。
2.根据权利要求1所述一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，其特 征在于所述衬板(1)为不吸水的PCV韧性材料。
3.根据权利要求1或2所述一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条， 其特征在于所述包被膜(4)为硝酸纤维素膜，或混合纤维素膜。
4.根据权利要求1所述一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，其特 征在于所述吸水垫(5)为植物纤维棉纸。
5.根据权利要求1所述一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条，特征 在于所述西布曲明及其衍生物的金标抗体为胶体金标记的抗西布曲明及其衍生物的单克 隆抗体复合物，所述偶联西布曲明及其衍生物的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA。
6.一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条的制备方法，其特征在于 制备偶联西布曲明及其衍生物的载体牛血清白蛋白BSA，用于制备相应的检测线T线(6)； 制备偶联西布曲明及其衍生物的载体鸡卵清白蛋白，用于制备单克隆抗体，制备西布曲明 及其衍生物金标抗体，用于制备吸附西布曲明及其衍生物金标抗体的聚酯纤维毡；制备羊 抗鼠IgG抗体，用于制备对照线C线(7)，包括如下步骤(A)将西布曲明及其衍生物与载体牛血清白蛋白BSA/鸡卵清白蛋白OVA进行偶联制备 人工合成抗原；a、生成水溶性碳化二亚胺(EDC):往反应瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺(DMF)及那非类 原料或拉非类原料，并通N2保护，在室温下进行搅拌，待二甲基甲酰胺(DMF)完全溶解后，快 速称取浓度为60%的氢化钠(NaH)，并将其加入所述反应瓶中，搅拌50-70分钟，直至溶液 无气泡产生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反应瓶中，注入完毕后，在室温下 搅拌11-13小时，之后将反应液倾入水中分散，以氯仿进行提取，合并提取液，以无水Na2SO4 进行干燥，之后过滤，再经过减压浓缩后得到固体，加入无水乙醚打浆洗涤所述固体，之后 进行过滤，最后真空干燥得到新的固体，此固体为烷基化物；将无水乙醇和上述步骤所得的 烷基化物加入新的反应瓶中，进行搅拌分散，再加入NaOH溶液，加热回流反应2小时，停止 加热稍冷却后，将反应液转入单口瓶中，减压浓缩得糊状物，再加入水，以盐酸调节至PH值 为7-9的液体，以氯仿进行提取，合并提取液，再用饱和食盐水洗一次，以无水Na2SO4干燥， 过滤，减压浓缩得白色固体，用甲醇重结晶，得白色粉状固体，此固体为水溶性碳化二亚胺 (EDC)；b、生成人工合成抗原将上述步骤中所得的水溶性碳化二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰 亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、半抗原化合物平衡至室温；取上述步骤中所得的水溶性 碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物，三者的摩尔比为半抗原化合物水溶性 碳化二亚胺N-羟基琥珀酰亚胺=1 8-12 :13-16，将其置入圆底烧瓶，然后加入上述步骤 中所得的二甲基甲酰胺溶解，为保证反应完全，在室温避光的条件下进行搅拌，最后生成的 溶液记为二号反应液；当所述水溶性碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺和半抗原化合物在二甲基甲酰胺中反应完全后，现配载体蛋白溶液(BSA / 0VA)，将载体蛋白与硼酸缓冲液按 1:0. 15-0. 2的量溶解于另一容器中的硼酸缓冲液，然后转入另一圆底烧瓶中，此溶液记为 三号反应液；将二号反应液按每10秒1滴的速度滴入三号反应液中，直至将二号的反应液 加完后，先在室温避光的条件下进行搅拌，之后在3-5°C条件下避光搅拌，待反应完全后，生 成溶液，并将生成的溶液记为四号反应液，四号反应液中载体蛋白与半抗原化合物比例为 1:15-25;等所有反应结束后，将四号反应液置于20000-30000分子截留透析袋中，透析袋 中还装有0. 01-0. 02M磷酸盐缓冲液，pH值为7. 0-7. 5，将透析袋在3_5°C的条件下进行透 析，每隔3-5小时换一次磷酸盐缓冲液；经上述透析步骤最终所得的产品，经冷冻干燥为白 色絮状产品，即为人工合成抗原；(B)将人工合成抗原OVA按常规方法免疫制备西布曲明及其衍生物的单克隆抗体细胞 株，用Babc小鼠免疫制备抗体腹水，将腹水纯化得到高纯度的单克隆抗体蛋白，测定蛋白 浓度，备胶体金标记用；(C)用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm的胶体金溶液；(D)用0.lmol/LK2C03调节胶体金溶液至最适PH值(8. 5-9. 0)，将适量纯化的单克隆 抗体纯水透析(4hr)后，加入胶体盆中，室温电磁搅拌(15-30min),逐滴加入1%络蛋白溶 液，使络浓度为0. 1%，持续搅拌5min，4°C下15000rpm离心lOmin，弃去上清去沉淀物，将沉 淀物用重悬液重新恢复至原体积混勻，再次离心一次，用重悬溶液将沉淀物混悬至原体积 1/20，4°C保存备用，即获得抗西布曲明及其衍生物单克隆抗体的胶体金标记物，所述重悬 液为含5%海藻的0. 02Tris-HCL缓冲液；(E)将1 :20-1:10稀释的西布曲明及其衍生物胶体进标记抗体喷涂吸附于聚酯纤维 毡中，27°C保温干燥，制备西布曲明及其衍生物金标结合垫(3)；(F)在包被膜(4)上用西布曲明及其衍生物偶联的载体牛血清白蛋白BSA溶液包被直 线式检测线T线(6)，用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线(7)，两条线竖向平行排列；(G)试纸条的组装将样品垫(2)、金标组合垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)依次粘附 在衬板(1)上，样品垫(2)置于衬板(1)的一端，吸水垫(5)置于衬板(1)的另一端，包被 膜(4)置于衬板(1)的中间，金标结合垫(3)置于样品垫(2)和包被膜(4)之间，即得到用 于免疫检测的西布曲明及其衍生物胶体金层析检测试验纸大板，将大板按顾客要求分切成 2. 5mm-7. Omm宽度规格的试纸条，密封干燥保存。
全文摘要
本发明公开一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析检测试纸条及其制备方法，由衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫组成，在包被膜上有用西布曲明及其衍生物偶联的载体蛋白溶液包被直线式检测线T线，和用羊抗鼠IgG溶液包被直线式对照线C线。其具体步骤制备人工结合抗原；制备西布曲明及其衍生物的单克隆抗体；制成胶体金溶液；获得抗西布曲明及其衍生物的单克隆抗体的胶体金标记物和金标结合垫。本发明具有特异性强，敏感度高，简便、快速、时效性强，结果显示形象、准确的优点。
文档编号G01N33/558GK101980021SQ20101051636
公开日2011年2月23日 申请日期2010年10月22日 优先权日2010年10月22日
发明者吴迪宏, 欧卫军 申请人:南通市伊士生物技术有限责任公司