专利名称：用于诊断心肌细胞损害的测定的制作方法
技术领域：
本公开内容一般涉及用于诊断受试者中的心肌细胞损害的測定和试剂盒，并且特别涉及用于检测测试样品中多数心肌细胞抗原的存在的方法和试剂盒，其还避免来自测试样品中存在的其他物质的干扰的可能性。
背景技术：
免疫測定技术在过去数十年已经是已知的，且目前通常在医学中用于广泛多样的诊断 目的，以检测生物学样品中的靶分析物。免疫测定采用抗体与其相应抗原的高度特异性结合，其中抗原是靶分析物。一般地，抗体或抗原的定量通过某些形式的标记例如放射性或荧光标记来达到。夹心免疫测定涉及结合样品中靶分析物与抗体位点(其通常与固体载体结合)，结合标记的抗体与捕获的分析物，且随后测量结合的标记抗体的量，其中标记生成与靶分析物的浓度成比例的信号，因为除非分析物存在于样品中，否则标记抗体不结合。在用于诊断临床状况的目前可用的測定中，评估危险或预测起因于心肌细胞损害的后果是測定下述浓度的那些心肌肌钙蛋白-I、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(1-32))、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、胎盘生长因子(PLGF)和/或白细胞介素-6 (IL-6)。一般地，此类测定作为免疫測定组进行，所述免疫测定对来自患者的测试样品连续执行，并且关于每个分析物的测试因而需要另外增加时间、样品体积和关于每个測定结果的试剂。通常，关于分析物的完全组的测定在单一測定平台上、来自单ー厂商、或甚至通过单ー检测技术是不可获得的，这增加评估患者的临床状态的复杂性。进ー步地，当分开且系列进行时，关于组中的任何単一分析物的结果可能是不可靠的，即可以是或可以不是错误的。个别测定结果中的任何是否是错误的可能是难以測定的或实际上无法測定的，从而导致潜在冲突的结果和相应冲突的诊断、危险评估或结果预測。2种相关抗原心肌肌钙蛋白-T和心肌肌钙蛋白-I的例子是举例说明性的。心肌肌钙蛋白-I測定是从多个厂商容易地商购可得的，但心肌肌钙蛋白-T測定限于单ー厂商，Roche Diagnostics,这意味着无替代方案是可获得的。另外,根据假阳性和假阴性结果的多个报道，这2种测定就准确度而言是有限的。(參见例如，P. R. Kenny等人，J. 32Rheumatol,1258-61，(2005) ；R. I. Knoblock等人,Archives of pathology & laboratorymedicine 2002 ; 126:606-9 ;和A. N. Makaryus等人，Clin Cardiol 2007 ;30:92-4)。此外，虽然心肌肌钙蛋白-I和心肌肌钙蛋白-T在理论上都与心肌细胞损害相关，但用于测定患者样品中的心肌肌钙蛋白-I和心肌肌钙蛋白-T的免疫测定约10%时间未能关联。这个不一致可能是由于抗体构造中的差异，其他生物化学差异或在不同測定中的分析。进ー步地，用于循环抗原的此类免疫测定已知对来自其他物质的干扰是敏感的，所述其他物质可能存在于测试样品中，例如异嗜性内源抗体和自身抗体。此类干扰一般通过执行第二种测定得到解決，以鉴定有疑问的样品，这是费时且昂贵的。解决自身抗体问题的另ー种方法是选择分析物特异性抗体，其结合不同干与自身抗体反应的分析物表位的特异性表位。根据这种一般方法，已集中努力探索2、3和甚至4种分析物特异性抗体的数千种不同组合的使用，以避免来自自身抗体的干扰。然而，这种努力在很大程度上已经是不成功的。目前显而易见的是针对复杂蛋白质分析物的自身抗体很可能在特定样品内是多克隆的，并且在来自不同个体的样品中可能是甚至更不同的。来自不同多克隆自身抗体的干扰可以解释少至25%或甚至更少的分析物蛋白质序列结合分析物特异性抗体的观察，这又可以解释使用这种方法的不成功。因此，至少由于上述原因，尽管MI的出现，心肌肌钙蛋白-I或心肌肌钙蛋白-T单独和使用标准測定的起始测试也可能是阴性的，即可能提供假阴性結果。虽然关于心肌肌钙蛋白-I或心肌肌钙蛋白-T的可用测定已改善MI诊断的时间性，然而，具有MI症状的许多患者直到呈现后数小时才得到阳性诊断。这导致具有潜在严重结果的延迟或延期治疗。 本领域存在关于下述的需要改善心肌细胞损害的检测包括此类检测的时间性的新免疫測定方法，以及补偿通过可能存在于测试样品中的异嗜性内源抗体和自身抗体的干扰的方法，和特别地，达到这些结果而无需重新设计分析物检测或捕获抗体的此类方法。发明概沭
在ー个方面，本公开内容提供了用于检测来自测试样品在受试者中的心肌细胞损害的免疫測定，所述免疫測定包括步骤
a)使来自怀疑具有心肌细胞损害的受试者的测试样品接触η个抗体(Α
It'')，其结合在ビ个心肌细胞抗原(a11')上的至少η个表位，以形成ビ(η-抗体抗原)个
免疫复合物(.0,)( ,,)- ( . ^)( 1), (A| )(A;)... (Ai1M (a2),…(AaW)(AF)...
Aa Aj1 Aa
(A$)(an')，其中η是I - 10的整数；并且ビ是2 - 10的整数。b)使包含ビ(η-抗体抗原)个免疫复合物的所述混合物接触ビr个抗体(')，其结合在ビ个心肌细胞抗原(a11')上的η"个表位，以形成ビ((η + η")抗体抗原)个可测量组件(assemblies) (( ) ( )…(Αψ ))((β|0( Br ) - ( Bg 丨))(a1),
((At ) (Aj )... (Αψ )) ((Bi ) (Br )... (B^ )) (a2)，…((Aa^ ) (A^ )··· (A^ )) ((Baレ
)(Bど)…(B$'))(an')，其中n和独立地是I - 10的整数，并且ビ是2 - 10的整
数，并且抗体A和B结合心肌细胞抗原的(η + η")个不同表位。c)測量可测量组件的光学、电或状态变化信号；和
d)通过测定步骤(C)中的测量是否超过预定水平来检测心肌细胞损害。心肌细胞抗原(a11')可以选自心肌肌钙蛋白-1、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB (CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(1-32))、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、胎盘生长因子(PLGF)和白细胞介素-6(IL-6)。在免疫測定的一个示例性实施方案中，ビ=2并且心肌细胞抗原(a11')是例如心肌肌钙蛋白-I (cTnl)和心肌肌钙蛋白-T (cTnT))。抗体A ψ、抗体βぎ·、或抗体A ^
和Bぎ'可以包含人源化抗体。在上文免疫测定中，抗体.可以通过共价或非共价键结合可检测标记，例如酶、
寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。光学信号可以作为化学发光、荧光、磷光、电化学发光、紫外吸收、可见吸收、红外吸收、折射、表面等离振子共振中的抗原(a11')浓度依赖性 变化进行测量。电信号可以作为电流、电阻、电势、质荷比或离子计数中的抗原(a11')浓度依赖性变化进行测量。状态变化信号可以作为大小、可溶性、质量或共振中的抗原(a11')浓度依赖性变化进行测量。在上文免疫测定中，抗体Bf卩可以包含与抗人IgG抗体复合的人源化抗体，所述
抗人IgG抗体缀合至可检测标记，其中可检测标记是酶、寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。在上文免疫測定中，抗体可以固定在固相上。固相可以选自磁性颗粒、珠、试
管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶体、薄膜、滤纸、盘和芯片。在另ー个方面，本公开内容提供了用于检测来自测试样品在受试者中的心肌细胞损害的免疫測定，所述免疫測定包括步骤
a)使来自怀疑具有心肌细胞损害的受试者的测试样品接触η个抗体(Αψ )，其结合
在ビ个心肌细胞抗原(a11')上的至少η个表位，以形成ビ(η-抗体抗原)个免疫复合物
(.I, ) ( -I.)…(4 111 ) (a1)，(A I2 ) (A I2 )... (A I2 ) (a2),... (A ) (Α|θ ... (A ^ ) (an ),
Aa ■ Ag1 Aa
其中n是I - 10的整数；并且ビ是2 - 10的整数。b)使包含ビ(η-抗体抗原)个免疫复合物的所述混合物接触ビ'个抗体(')，其结合在ビ个心肌细胞抗原(a11')上的η"个表位，以形成ビ((η + η")抗体抗原)个可测量组件(assemblies) (( A| 丨)(A!丨)…(Ag1 )) (( β! ) ( B J )…(Bg1 )) (a1),
((A!2 ) (Α|2 )... (Α 皆))((Β|2 ) (B J )... (B )) (a2)，…((Aa^ ) (A^ )- (A ぎ))((Baレ)(B^ )…(B$"))(an')，其中η和独立地是I - 10的整数，并且ビ是2 - 10的整
数，并且抗体Aぎ和_丨.·结合心肌细胞抗原的(η + O个不同表位，其中抗体由包含
至少ー种吖啶鐵化合物的可检测标记进行标记。c)对步骤(b)的混合物生成或提供过氧化氢来源；
d)将碱性溶液加入步骤(C)的混合物中，以生成光信号；e)測量步骤(d)中生成或发出的光信号；和
f)通过测定步骤(e)中的测量是否超过预定水平来检测心肌细胞损害。在上文免疫測定中，心肌细胞抗原(a11')可以选自心肌肌钙蛋白-I、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP (1-32))、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、胎盘生长因子(PLGF)和白细胞介素-6(IL-6)。在免疫測定的一个示例性实施方案中，ビ=2并且心肌细胞抗原
(an')是心肌肌钙蛋白-I (cTnl)和心肌肌钙蛋白-T(cTnT)。抗体抗体,.#,. 、或抗体A 和可以包含人源化抗体。在上文免疫测定中，抗体可以通过共价或非共价键结合可检测标记，例如酶、
寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。光学信号可以作为化学发光、荧光、磷光、电化学发光、紫外吸收、可见吸收、红外吸收、折射、表面等离振子共振中的抗原(a11')浓度依赖性变化进行测量。电信号可以作为电流、电阻、电势、质荷比或离子计数中的抗原(a11')浓度依赖性变化进行测量。状态变化信号可以作为大小、可溶性、质量或共振中的抗原(a11')浓度依赖性变化进行测量。在上文免疫测定中，抗体Bfン可以包含与抗人IgG抗体复合的人源化抗体，所述
抗人IgG抗体缀合至可检测标记，其中可检测标记是酶、寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。在上文免疫测定中，抗体Aぎ可以固定在固相上。固相可以选自磁性颗粒、珠、试
管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶体、薄膜、滤纸、盘和芯片。在上文免疫測定中，吖啶鐵化合物可以是具有根据式I的结构的吖啶鐵-9-甲酰胺
权利要求
1.一种用于检测来自测试样品的在受试者中的心肌细胞损害的免疫測定法，所述免疫測定法包括步骤 a)使来自怀疑具有心肌细胞损害的受试者的测试样品接触η个抗体(ΑIhr )，所述抗体结合在ビ个心肌细胞抗原(a11)上的至少η个表位，以形成ηΛ (η-抗体抗原)个免疫复合物(a |l )(,ぐ:)...(Atll ) (a1)，(A I2 ) (A I2 )... (A I2 ) (a2)，... (A ^ )(八,)...(4|0^)，其中11是1 - 10的整数；并且ビ是2 - 10的整数， b)使包含ビ(η-抗体抗原)个免疫复合物的所述混合物接触ビ'个抗体(Bi",)，所述抗体结合在ビ个心肌细胞抗原(a11)上的η"个表位，以形成ビ((n + n r)抗体抗原)个可测量组件((A|,)(分)…(Α|ι))((β|,)( Ji2l )... ( Bgl )) (a1), ((A)(A J )…(Αψ )) ((Bi ) (B^ )... (B|a )) (a2), ... ((Ajf ) (A^ )... (Αψ )) ((Ba^ ) (B ゼ)…(Bf ))(an')，其中η和η"独立地是I - 10的整数，并且ビ是2 - 10的整数，并且抗体A和B结合心肌细胞抗原的(η + η")个不同表位， c)測量所述可测量组件的光学、电或状态变化信号；和 d)通过测定步骤(C)中的所述测量是否超过预定水平来检测心肌细胞损害。
2.权利要求I的免疫測定法，其中所述心肌细胞抗原a11'选自心肌肌钙蛋白-I、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(l-32))、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、胎盘生长因子(PLGF)和白细胞介素-6(IL-6)。
3.权利要求I的免疫測定法，其中ビ=2并且所述心肌细胞抗原a11'是心肌肌钙蛋白-I (cTnl)和心肌肌钙蛋白-T(cTnT)。
4.权利要求I或2的免疫测定法,其中所述抗体Aψ、抗体畴;'、或抗体A1J和睹;'包含人源化抗体。
5.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗体包含抗人IgG抗体。
6.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗体结合可检测标记，其中所述可检测标记是酶、寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。
7.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述光学信号作为化学发光、荧光、磷光、电化学发光、紫外吸收、可见吸收、红外吸收、折射、表面等离振子共振中的心肌细胞抗原a11'浓度依赖性变化进行测量。
8.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述电信号作为电流、电阻、电势、质荷比或离子计数中的心肌细胞抗原a11'浓度依赖性变化进行测量。
9.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述状态变化信号作为大小、可溶性、质量或共振中的心肌细胞抗原a11'浓度依赖性变化进行测量。
10.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述抗体A￥固定在固相上。
11.权利要求10的免疫測定法，其中所述固相选自磁性颗粒、珠、试管、微量滴定板、t匕色杯、膜、支架分子、石英晶体、薄膜、滤纸、盘和芯片。
12.权利要求I或2的免疫測定法，其中所述测试样品是全血、血清或血浆。
13.一种用于检测来自测试样品的在受试者中的心肌细胞损害的免疫測定法，所述免疫测定法包括步骤 a)使来自怀疑具有心肌细胞损害的受试者的测试样品接触η个抗体(Α￥)，所述抗体结合在ビ个心肌细胞抗原(a11')上的至少η个表位，以形成ビ(η-抗体抗原)个免疫复合物(Λ 11 ) ( 4，丨)…(4 in ) (al)，(A|2 ) (A J )... (Α ψ ) (a2)， ... (A J*1' ) (A^ )... (A 14 Aa aS AS)^)，其中11是1 - 10的整数；并且ビ是2 - 10的整数， b)使包含ηΛ(η-抗体抗原)个免疫复合物的所述混合物接触ηΛ'个抗体(Bfjh )，所述抗体结合在ビ个心肌细胞抗原(a11)上的η"个表位，以形成ビ((n + n r)抗体抗原)个可测量组件((Ap ) ( A|,)…(A§l ))(( β|! )(B|,)…(Bgl )) (a1)，((A を)(Al)... (Aga )) ((B 12 ) (B J )…(ゆ))(a2), ... ((AaW ) (A^ )... (A^ )) ((B ト")(B^ )...(Bf ))(an')，其中n和η"独立地是I - 10的整数，并且ビ是2 - 10的整数，并且抗体A和B结合心肌细胞抗原的(η + η^)个不同表位，其中抗体B由包含至少ー种吖啶鐵化合物的可检测标记进行标记， c)对步骤(b)的所述混合物生成或提供过氧化氢来源； d)将碱性溶液加入步骤(c)的所述混合物中，以生成光信号； e)測量步骤(d)中生成或发出的所述光信号；和 f)通过测定步骤(e)中的所述测量是否超过预定水平来检测心肌细胞损害。
14.权利要求13的免疫測定法，其中所述心肌细胞抗原a11'选自心肌肌钙蛋白-I、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽(包括前BNP、N端前BNP和hBNP(l-32))、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、胎盘生长因子(PLGF)和白细胞介素-6(IL-6)。
15.权利要求13的免疫測定法，其中ビ=2并且所述心肌细胞抗原a11'是心肌肌钙蛋白-I (cTnl)和心肌肌钙蛋白-T(cTnT)。
16.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗体Ag、抗体βηι·'、或抗体和βΛ;包含人源化抗体。
17.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗体包含抗人IgG抗体。
18.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗体A固定在固相上。
19.权利要求18的免疫測定法，其中所述固相选自磁性颗粒、珠、试管、微量滴定板、t匕色杯、膜、支架分子、石英晶体、薄膜、滤纸、盘和芯片。
20.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述测试样品是全血、血清或血浆。
21.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述吖啶摇化合物是具有根据式I的结构的吖啶f翁-9-甲酰胺
22.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述吖啶f翁化合物是具有根据式II的结构的吖啶鐵-9-羧酸根芳基酷
23.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗体A1i*选自多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体和亲和カ成熟的抗体。
24.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述抗体B|1;/选自多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体和亲和カ成熟的抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体和亲和カ成熟的抗体。
25.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述过氧化氢通过加入缓冲液或含有过氧化氢的溶液来提供。
26.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述过氧化氢通过将过氧化氢生成酶加入所述测试样品而生成。
27.权利要求26的免疫測定法，其中所述过氧化氢生成酶选自(R)-6-羟基烟碱氧化酶、(S)-2-羟酸氧化酶、(S)-6-羟基烟碱氧化酶、3-酸式-硝基丙酸氧化酶、3-羟基邻氨基苯甲酸氧化酶、4-羟基扁桃酸氧化酶、6-羟基烟酸脱氢酶、脱落醛氧化酶、酰基-CoA氧化酶、醇氧化酶、醛氧化酶、胺氧化酶、胺氧化酶(含铜的)、胺氧化酶(含黄素的)、芳基-醇氧化酶、芳基-醛氧化酶、儿茶酚氧化酶、胆固醇氧化酶、胆碱氧化酶、非洲防己碱氧化酶、环己胺氧化酶、细胞色素c氧化酶、D-氨基酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-内酯氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-内酯氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、D-谷氨酸氧化酶、D-谷氨酸(D-天冬氨酸)氧化酶、ニ氢苯并菲啶氧化酶、ニ氢乳清酸氧化酶、ニ氢尿嘧啶氧化酶、ニ甲基甘氨酸氧化酶、D-甘露醇氧化酶、蜕皮素氧化酶、こ醇胺氧化酶、半乳糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、甘油-3_磷酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、こ醛酸氧化酶、己糖氧化酶、羟基植烷酸氧化酶、吲哚-3-こ醛氧化酶、乳酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶、L-天冬氨酸氧化酶、L-半乳糖酸内酯氧化酶、し-谷氨酸氧化酶、し-古洛糖酸内酯氧化酶、L-赖氨酸6-氧化酶、L-赖氨酸氧化酶、长链醇氧化酶、L-甲基哌啶氧化酶、L-山梨糖氧化酶、苹果酸氧化酶、甲硫醇氧化酶、单氨基酸氧化酶、N6-甲基-赖氨酸氧化酶、N-酰基己糖胺氧化酶、NAD (P) H氧化酶、硝基烷氧化酶、N-甲基-L-氨基酸氧化酶、核苷氧化酶、草酸氧化酶、多胺氧化酶、多酚氧化酶、聚こ烯醇氧化酶、异戊烯半胱氨酸氧化酶、蛋白质-赖氨酸6-氧化酶、丁ニ胺氧化酶、批喃糖氧化酶、5’ -磷酸吡哆醛合酶、吡哆醇4-氧化酶、吡咯喹啉-醌合酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸氧化酶(CoA-こ酰化)、网脉番荔枝碱氧化酶、视黄醛氧化酶、利福霉素-B氧化酶、肌氨酸氧化酶、仲醇氧化酶、亚硫酸氧化酶、超氧化物歧化酶、超氧化物还原酶、四氢小檗碱氧化酶、硫胺素氧化酶、色氨酸α, β-氧化酶、尿酸氧化酶(尿酸酶、尿酸氧化酶)、香草醇氧化酶、黄嘌呤氧化酶、木糖醇氧化酶及其组合。
28.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述碱性溶液是具有至少约10的pH的溶液。
29.权利要求13或14的免疫測定法，其中通过测定步骤(e)中的所述测量是否超过预定水平来检测心肌细胞损害的步骤f)包括关联步骤(e)中光信号的量与所述测试样品中心抗原a和b的量，其通过使用关于每个心抗原a的标准曲线或通过与关于每个心抗原a的參考标准的比较实施。
30.权利要求29的免疫測定法，其包括与关于每个心抗原a11'的參考标准的比较，每个參考标准包含抗独特型抗体。
31.权利要求29的免疫測定法，其包括与关于每个心抗原an'的參考标准的比较，每个參考标准包含衍生的心肌细胞抗原。
32.权利要求31的免疫測定法，其中所述衍生的心肌细胞抗原包含由聚こニ醇衍生的所述心肌细胞抗原。
33.权利要求13或14的免疫測定法，其中所述免疫測定法适合于在自动化系统或半自动化系统中使用。
34.一种用于检测来自测试样品的心肌细胞损害的试剂盒，所述试剂盒包含 a)结合在ビ个心肌细胞抗原(a11)上的至少η个表位的η个抗体(λψ),以形成η, (η-抗体:抗原)个免疫复合物()... ( A|3 ) (a1)，(A 妒)(A 爰)…(Α ψ )(a2),…(A如')(Al)…(ΑΛ )(an')，其中η是I - 10的整数；并且ビ是2 - 10的整数； b)结合在η个心肌细胞抗原(a11)上的η,'个表位的η'个抗体(B^' )，以形成ビ((η + η”)抗体:抗原)个可测量组件((A· ) Uを)…(Ag1 ))((B|')( Bl1 )...(ggi )) (a1)，( (A 玉)(A a )... (A f1 )) ((B 玉)(B I2 )... (B チ))(a2)，... ((A Jp- ) (A ぎ)...(A^))((Bl )(B|0"*(BF))(an')，其中n和独立地是I - 10的整数，并且ビ是2 - 10的整数，并且抗体A和B结合心肌细胞抗原的(η + η")个不同表位；和 c)用于测定所述测试样品中心肌细胞抗原(a11')的总量是否超过预定水平的说明书。
35.权利要求34的试剂盒，其中所述心肌细胞抗原a11'选自心肌肌钙蛋白-I、心肌肌钙蛋白-T、肌酸磷酸激酶MB(CKMB)、肌红蛋白、肌球蛋白重链、肌球蛋白轻链、B型利尿钠肽，其中所述第一个心特异性抗原和所述第二个心特异性抗原是不同抗原。
36.权利要求34的试剂盒，其中ビ=2并且所述心肌细胞抗原a11'是心肌肌钙蛋白-I(cTnl)和心肌肌钙蛋白-T CTnT0
37.权利要求34或35的试剂盒，其进ー步包含固相，其中所述抗体Aぎ结合所述固相。
38.权利要求37的试剂盒，其中所述固相选自磁性颗粒、珠、试管、微量滴定板、比色杯、膜、支架分子、石英晶体、薄膜、滤纸、盘和芯片。
39.权利要求34或35的试剂盒，其进ー步包含结合所述抗体Bf「的可检测标记。
40.权利要求39的试剂盒，其中所述可检测标记是酶、寡核苷酸、纳米颗粒化学发光体、荧光团、荧光猝灭剂、化学发光猝灭剂或生物素。
41.权利要求40的试剂盒，其中所述可检测标记是吖啶鐵化合物。
42.权利要求41的试剂盒，其中所述吖啶f翁化合物是具有根据式I的结构的吖啶销I-9-甲酰胺
43.权利要求41的试剂盒，其中所述吖啶f翁化合物是具有根据式II的结构的吖啶參翁-9-羧酸根芳基酯
44.权利要求42或43的试剂盒，其进ー步包含碱性溶液。
45.权利要求44的试剂盒，其中所述碱性溶液是具有至少约10的pH的溶液。
46.权利要求45的试剂盒，其进ー步包含过氧化氢来源。
47.权利要求46的试剂盒，其中所述过氧化氢来源包含缓冲液或含有过氧化氢的溶液。
48.权利要求47的试剂盒，其中所述过氧化氢来源包含过氧化氢生成酶。
49.权利要求48的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶选自(R)-6-羟基烟碱氧化酶、(S)-2-羟酸氧化酶、(S)-6-羟基烟碱氧化酶、3-酸式-硝基丙酸氧化酶、3-羟基邻氨基苯甲酸氧化酶、4-羟基扁桃酸氧化酶、6-羟基烟酸脱氢酶、脱落醛氧化酶、酰基-CoA氧化酶、醇氧化酶、醛氧化酶、胺氧化酶、胺氧化酶(含铜的)、胺氧化酶(含黄素的)、芳基-醇氧化酶、芳基-醛氧化酶、儿茶酚氧化酶、胆固醇氧化酶、胆碱氧化酶、非洲防己碱氧化酶、环己胺氧化酶、细胞色素c氧化酶、D-氨基酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-内酯氧化酶、D-阿拉伯糖-1，4-内酯氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、D-谷氨酸氧化酶、D-谷氨酸(D-天冬氨酸)氧化酶、ニ氢苯并菲啶氧化酶、ニ氢乳清酸氧化酶、ニ氢尿嘧啶氧化酶、ニ甲基甘氨酸氧化酶、D-甘露醇氧化酶、蜕皮素氧化酶、こ醇胺氧化酶、半乳糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、甘油-3_磷酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、こ醛酸氧化酶、己糖氧化酶、羟基植烷酸氧化酶、吲哚-3-こ醛氧化酶、乳酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶、L-天冬氨酸氧化酶、L-半乳糖酸内酯氧化酶、L-谷氨酸氧化酶、L-古洛糖酸内酯氧化酶、L-赖氨酸6-氧化酶、L-赖氨酸氧化酶、长链醇氧化酶、L-甲基哌啶氧化酶、L-山梨糖氧化酶、苹果酸氧化酶、甲硫醇氧化酶、单氨基酸氧化酶、N6-甲基-赖氨酸氧化酶、N-酰基己糖胺氧化酶、NAD(P)H氧化酶、硝基烷氧化酶、N-甲基-L-氨基酸氧化酶、核苷氧化酶、草酸氧化酶、多胺氧化酶、多酚氧化酶、聚こ烯醇氧化酶、异戊烯半胱氨酸氧化酶、蛋白质-赖氨酸6-氧化酶、丁ニ胺氧化酶、吡喃糖氧化酶、5’ -磷酸吡哆醛合酶、吡哆醇4-氧化酶、吡咯喹啉-醌合酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸氧化酶(CoA-こ酰化)、网脉番荔枝碱氧化酶、视黄醛氧化酶、利福霉素-B氧化酶、肌氨酸氧化酶、仲醇氧化酶、亚硫酸氧化酶、超氧化物歧化酶、超氧化物还原酶、四氢小檗碱氧化酶、硫胺素氧化酶、色氨酸α，β -氧化酶、尿酸氧化酶(尿酸酶、尿酸氧化酶)、香草醇氧化酶、黄嘌呤氧化酶、木糖醇氧化酶及其组合。
50.权利要求34或35的试剂盒，其中所述检测抗体包含抗人IgG抗体。
51.权利要求34或35的试剂盒，其进ー步包含至少ー个心肌细胞抗原參考标准。
52.权利要求51的试剂盒，其中所述至少ー个心肌细胞抗原參考标准包含抗独特型抗体。
53.权利要求51的试剂盒，其中所述至少ー个心肌细胞抗原參考标准包含衍生的心肌细胞抗原。
54.权利要求53的试剂盒，其中所述衍生的心肌细胞抗原包含由聚こニ醇衍生的所述心肌细胞抗原。
全文摘要
公开了用于诊断临床状况、评估危险或预测由于心肌细胞损害的后果的测定。通过测定测试样品中多数心肌细胞抗原的存在、且在单一测定结果中组合多重测定，免疫测定方法和试剂盒提供了心肌细胞损害的评估。
文档编号G01N33/53GK102725633SQ201080063154
公开日2012年10月10日 申请日期2010年11月17日 优先权日2009年12月3日
发明者J.R.布拉希尔, M.亚当茨克, P.G.马廷利 申请人:雅培制药有限公司