专利名称：一种检测呼吸道合胞病毒抗体胶体金的试纸条及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，更具体地说，本发明涉及一种呼吸道合胞病毒抗体胶体金的检测试纸条及其制备方法。
背景技术：
人类呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是全世界范围内婴幼儿下呼吸道感染最主要的病原，免疫缺陷病人及老年人也是RSV的易感人群。美国每年约有90000个婴幼儿因RSV感染住院，其中死亡率为IiI 5%。我国每年约1500万婴儿出生，90%以上小于2岁的儿童都感染过呼吸道合胞病毒。呼吸道合胞病毒在任何国家的儿童中都有很高的感染率和发病率。RSV感染人体经过潜伏期后7天左右血清中出现IgA抗体，10 20天达到高峰， 之后逐渐下降；同时在患者的鼻咽分泌物中也存在大量的分泌型IgA抗体(slgA)，感染后第7天产生，28 42天达到高峰。因此，可以通过试纸条法快速检测血液、痰液和咽拭子中呼吸道合胞病毒IgA抗体作为RSV感染早期临床诊断和RSV感染预后的初步依据。然而，目前RSV临床诊断方法主要是通过病毒分离培养、间接免疫荧光法、RT-PCR 和ELISA法检测抗原，或者利用ELISA法检测RSV特异性抗体。但是上述检测方法均需要特殊的仪器设备和专业培训人员，并且在实验室才能进行检测，费用高昂、操作复杂，耗时长， 不适于临床筛查，更不适宜于现场即时检测。因此，急需建立一种快速、简便、高效，并能广泛推广的呼吸道合胞病毒检测方法。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种简便、快捷的检测呼吸道合胞病毒抗体胶体金的试纸条。本发明的另一目的是提供一种所述试纸条的制备方法。本发明的目的通过下述技术方案予以实现。☆除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。A.本发明提供了一种检测呼吸道合胞病毒抗体胶体金的试纸条，该试纸条由同时包被抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重组抗原多克隆抗体两个条带的硝酸纤维素膜和含有胶体金标记的呼吸道合胞病毒特异性重组抗原的玻璃纤维构成。其中，所述硝酸纤维素膜上包被抗人IgA为多克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被的抗呼吸道合胞病毒重组蛋白抗体是能与呼吸道合胞病毒的两个亚型反应的共同抗体。本发明所述的试纸条还含有反应支持物、吸水纸垫和金标抗原保护膜；其中，所述的反应支持物采用PVC胶板；所述吸水纸垫采用滤纸；所述金标抗原保护膜采用玻璃纤维或滤纸纤维。
B.本发明提供了所述的检测试纸条的制备方法，该方法包括下述步骤
(1)采用抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重组抗原多克隆抗体分别固相于硝酸纤维素膜 (NC膜)上；
(2)在PVC胶板上，依次粘贴上硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸垫、金标抗原保护膜，相互间留有约0. 2mm的重叠，并且用力压紧，避免留有气泡影响实验结果。用切条机将硝酸纤维素膜切成每条宽约0. 4 0. 6cm的条带，置于相对湿度为40、0%，温度18 25°C的含有干燥剂的铝箔袋中短期(1周)保存备用。大批量制备应该置于4 °C长期(1年)保存。(3)从冰箱取出的试纸条应恢复至室温后，再开启密封袋使用。本发明的检测样本为患者的血液/血清、痰液或咽拭子。本发明的工作原理及有益效果
1.发明人通过在硝酸纤维素膜(NC膜)上包被抗人IgA (多克隆抗体)、抗呼吸道合胞病毒重组抗原多克隆抗体两个条带，并结合胶体金标记的呼吸道合胞病毒重组抗原，实现了用试纸条检测呼吸道合胞病毒(IgA)的目的。克服了现有技术检测成本高、操作复杂、繁琐、耗时长、需要特殊仪器、且必需专业人员才能操作的不足。2.所述的试纸条能检测呼吸道合胞病毒IgA抗体，该方法简便、快捷、准确，不需要特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合大批量检测，适用于基层筛选和流行病学调查，对呼吸道合胞病毒感染的早期及中期都能起到辅助诊断的作用，对检测儿童是否具备抗RSV的抵抗力具有参考价值。
图IA为本发明试纸条的正面图； 图IB为本发明试纸条的侧面吸水纸垫1，硝酸纤维素膜2 ( T一IgA条带，包被抗人IgA ； C一质控条带，包被抗呼吸道合胞病毒重组抗原的多抗)，玻璃纤维胶体金标记的呼吸道合胞病毒特异性重组抗原3，金标抗原保护膜4，反应支持物PVC胶板5。图2.检测结果图。从左到右依次为IgA阳性——T和C线显色；阴性——C 一条线显色；无效—— 两条线均不显色。
具体实施例方式实施例1
——呼吸道合胞病毒抗体胶体金检测试纸条的构成
反应支持物为6cmX0. 4cm PVC胶板(购自上海金标生物技术有限公司，SM31-40);吸水纸垫为2. 5X0. 4cm的滤纸(购自上海金标生物技术有限公司，CH37K) ；2cmX0. 4cm的硝酸纤维素膜(购自whatman公司)依次包被抗人IgA (购自KPL公司)、抗呼吸道合胞病毒重组蛋白特异性多克隆抗体(购自ABCAM公司)；含有0. 8cmX 0. 4cm胶体金标记的呼吸道合胞病毒特异性重组抗原的玻璃纤维(购自上海金标生物技术有限公司，SB03)；金标抗原保护膜 lcmXO. 4cm的聚酯膜(购自上海金标生物技术有限公司)，即形成了呼吸道合胞病毒抗体胶体金检测试纸条，具体如附图1所示。
实施例2
——试纸条的制备方法
将预先包被有抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重组多克隆抗体两个条带的硝酸纤维素膜、 胶体金标记的呼吸道合胞病毒重组蛋白抗原的玻璃纤维、吸水纸垫、金标抗原保护膜依次粘贴于PVC胶板上，相互间留有约0. 2mm的重叠，用力压紧，避免留有气泡。用切条机将组装好的硝酸纤维素膜切成每条宽约0. 4^0. 6cm的条带，置于相对湿度为40、0%，含有干燥剂的铝箔袋中4 °C保存备用。实施例3 ——检测方法
按临床常规取血并分离血清，或留取痰液、咽拭子，如样品不能于三日内检测，用存放于_20°C。取150-200ul血清或痰液、咽拭子于小瓶中，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内， 样品中的液体上行，如30秒内于“2”处未见液体爬行，则应于“4”处再加1-2滴生理盐水或PBS缓冲液。10-15分钟判读结果如样品中含有呼吸道合胞病毒IgA抗体，则其经过胶体金垫时，会与金标重组呼吸道合胞病毒抗原结合，进而被T处的抗人IgA捕获，聚集而形成红色的检测线，是为阳性，反之则为阴性，具体参见附图2。无论样本中是否含有待检测的抗体，金标重组抗原都会与C线处包被的抗重组抗原多抗形成红色沉淀线，即质控线。如此线不出现，说明试纸条失效。实施例4
——临床患者IgA抗体检测
在流行季节，检测疑似病人血清样本37例、确诊病例10份，与传统常用的IgA抗体检测ELISA法(Tl)比较，试纸条法(T2)有2例疑似病例IgA抗体未能检出。其灵敏度为 94. 6%，特异性为100%。表明试纸条与ELISA检测IgA抗体相似的灵敏度和特异性。检测结果如表1所示。表1.
权利要求
1.一种检测呼吸道合胞病毒抗体胶体金的试纸条，其特征在于，该试纸条由同时包被抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重组抗原多克隆抗体两个条带的硝酸纤维素膜和含有胶体金标记的呼吸道合胞病毒特异性重组抗原的玻璃纤维构成；其中，所述硝酸纤维素膜上包被抗人IgA为多克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被的抗呼吸道合胞病毒重组蛋白抗体是能与呼吸道合胞病毒的两个亚型反应的共同抗体。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的试纸条还含有反应支持物、吸水纸垫和金标抗原保护膜；其中，所述的反应支持物采用PVC胶板；所述吸水纸垫采用滤纸； 所述金标抗原保护膜采用玻璃纤维或滤纸纤维。
3.—种权利要求1所述的试纸条的制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤(1)采用抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重组抗原多克隆抗体分别固相于硝酸纤维素膜上；(2)在PVC胶板上，依次粘贴上硝酸纤维素膜、吸水纸垫、金标抗原保护膜，相互间留有约0. 2mm的重叠，并用力压紧；(3)用切条机将硝酸纤维素膜切成每条宽约0.4^0. 6cm的条带，置于相对湿度为 409Γ80%，温度18°C 25°C的含有干燥剂的铝箔袋中保存1周，备用；大批量制备时置于温度为4 °C冰箱内，保存期为1年。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，从冰箱取出的试纸条应恢复至室温后，再开启密封袋使用。
全文摘要
本发明提供了一种能检测呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytialVirus,RSV)IgA抗体的胶体金试纸条。它是在硝酸纤维素膜(NC膜)上，包被抗人IgA多克隆抗体，结合胶体金标记的呼吸道合胞病毒特异性重组抗原，应用免疫层析技术，检测呼吸道合胞病毒的IgA抗体。用本发明所述的试纸条检测，简便、快速、准确,结果清晰易辨，适合大批量检测，适用于基层筛查和流行病学调查。其对呼吸道合胞病毒感染的早期和中期起到辅助诊断作用，对判断儿童是否已含有对抗RSV的免疫力具有参考意义。
文档编号G01N33/569GK102253205SQ20111016247
公开日2011年11月23日 申请日期2011年6月16日 优先权日2011年6月16日
发明者赵军, 魏海涛 申请人:昆明倍尔遵生科技有限公司