专利名称：烟用添加剂中二氢香豆素和6－甲基香豆素含量的测定方法
技术领域：
本发明属于烟用添加剂的理化检验技术领域，主要涉及烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的测定方法，具体说是采用气相色谱一质谱联用仪(GC/MS)直接测定烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的方法。
背景技术：
在卷烟产品设计和生产加工过程中，为提高产品品质和满足加工需求，企业往往需要选加诸如甜味剂、防腐剂、保润剂、助燃剂、增塑剂等添加剂。这些添加剂的使用是卷烟产品质量和安全性的重要影响因素之一。二氢香豆素，无色或浅黄色粘稠液体，或片状结晶，室温下有香豆素香气，高温时有硝基苯气味，有辣味；用于食品，也用作香豆素的代用品，用作化妆品用香精；调制奶油、 椰子、肉桂香型香精；也用作烟用香精。6 —甲基香豆素，白色片状晶体，具有强烈的椰子香气，熔点73-76°C，主要用于配制椰子、香草和焦糖等型香精，用于有机合成、香料和化妆品的配制。目前未见烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素的检测方法文献报道，而且常规的痕量分析方法结果准确性较低，不适合烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素的含量测定。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术缺陷，提供一种采用气相色谱一质谱联用仪(GC/ MS)同时直接测定烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的方法，提高测定的速度、准确性。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是一种烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的测定方法，包括以下步骤
A、样品
称取烟用添加剂样品，放入容器中加入含有萘的二氯甲烷溶液和无水硫酸钠，振荡提取，取上清液即为样品提取液；
B、标准工作溶液
称取二氢香豆素和6 —甲基香豆素标准品，用含萘的二氯甲烷溶解并定容，然后进一步用含萘的二氯甲烷在0. 001-1.0 μ g/ml范围内稀释为具有浓度梯度的标准工作溶液；
C、气相色谱一质谱测定
将不同浓度梯度的标准工作溶液分别注入GC/MS，以内标法进行二氢香豆素和6 -甲基香豆素含量的定量分析，即以二氢香豆素和6 —甲基香豆素与内标萘的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；在相同条件下将样品提取液注入GC/MS进行测定，测得二氢香豆素和6 —甲基香豆素与内标萘的色谱峰面积比，代入标准曲线，求得样品中的二氢香豆素和6 -甲基香豆素含量；
其中GC/MS分析条件为色谱柱HP-V0C熔融石英毛细管柱(60 m X 0. 32 mm i. d. X 1.8 μπι d. f.)；进样口温度240 °C，进样量1 PL;载气He，分流比10:1，流速 1. 5mL/min ；程序升温初始温度80°C，以15°C /min的速度升至245°C，保持7min，以245°C 柱后运行Ilmin ；传输线温度280 °C ；电离(El)能量70 eV ；离子源温度230 °C ；溶剂延迟11 min,选择离子模式(SIM)扫描，二氢香豆素的选择离子为148，120，6 —甲基香豆素的选择离子为160，131，萘的选择离子为128，102。具有浓度梯度标准工作溶液的具体配制方法为分别称取0. 0500g 二氢香豆素和 6 —甲基香豆素，以萘的二氯甲烷溶液溶解并定容至IOOmL,配制成500μ g/mL的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液，准确移取不同体积的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液至IOmL 容量瓶中，以萘的二氯甲烷溶液定容，配制成不同浓度的二氢香豆素和6 —甲基香豆素标准工作溶液，标准序列0. 001 μ g/mL, 0. 005 μ g/mL, 0. 010 μ g/mL, 0. 050 μ g/mL, 0. 10 μ g/ mL，0. 50 μ g/mL, 1. 00 μ g/mL ；按称取l.Og添加剂样品算，即得到标准序列0. OlPg/g， 0. 05μg/g,0. 10μg/g,0. 50μg/g, 1. 00μg/g,5. 00μg/g, 10. OOPg/g。萘的二氯甲烷溶液中萘的浓度为0.77 μ g/mL。无水硫酸钠用前在马弗炉中550°C下烘4h。本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟用添加剂样品优化了样品前处理方法和仪器检测条件。与现有技术相比本发明方法具有如下优良效果
(1)烟用添加剂样品尤其是烟用香精香料大多是水溶性香精，常用的溶剂有水、乙醇、丙二醇和丙三醇，样品中的水分对毛细管色谱柱和GC/MS检测系统损坏较大，故实验选择以无水硫酸钠作为干燥剂，除去样品中的水分。⑵对于二氢香豆素和6 —甲基香豆素的测定，现有技术多以外标法定量，但对于粘度较大的烟用添加剂样品，以外标法定量，定容起来比较麻烦。而利用内标法定量，通过内标物的加入，利用组分的相对峰面积值进行一些量化数据的计算，可以不用定容，且可以减少由前处理方法重现性和仪器精密度问题带来的误差，故本法采用内标法定量。烟用添加剂中可容许添加的香味成分较多，故其成分复杂，难以选择一个合适的内标物作为参照物，萘具有煤焦油臭味，不可能被加入到添加剂中，故本发明选萘作为内标。⑶本发明方法选择了峰形和分离效果最好的HP-VOC柱作为分离柱，并采用能同时给出定性和定量信息的GC/MS作为检测方式，保证了检测结果的准确性。⑷本方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点，二氢香豆素的检出限为0. 01 μ g/g，6 -甲基香豆素的检出限为0. 01 μ g/g。二氢香豆素和6 -甲基香豆素的平均回收率分别为98. 35%和97. 97%，平均相对标准偏差(RSD)分别为1. 94%和2. 08%。
图1为本发明烟用添加剂中二氢香豆素和6 -甲基香豆素测定方法的流程图2为标准溶液的色谱图，图中X为萘峰，A为二氢香豆素峰，B为6 —甲基香豆素峰； 图3为样品溶液的色谱图，图中X为萘峰，A为二氢香豆素峰，B为6 —甲基香豆素峰； 图4为本发明具体实施方式
中二氢香豆素的标准曲线图； 图5为本发明具体实施方式
中6 —甲基香豆素的标准曲线图。
具体实施例方式本发明以下结合实例做进一步描述，但并不是限制本发明。1.仪器与试剂
二氢香豆素和6 —甲基香豆素，分析纯；萘，分析纯；无水Na2SO4,分析纯；二氯甲烷，色谱级；分析天平，感量0. 0001 g ；水平回旋振荡器；气相色谱一质谱联用仪(GC/MS)。2.样品处理
无水硫酸钠用前在马弗炉中550°C烘4h。取香精样品(烟用添加剂)1. 00 g，准确加入10 mL萘的二氯甲烷溶液(萘的浓度为 0. 77 μ g/mL)，然后加入5 g无水硫酸钠，振荡30 min,静置10 min,取上清液进行GC/MS分析。3.标准溶液配置
分别称取0. 0500g 二氢香豆素和6 -甲基香豆素，以萘的二氯甲烷溶液溶解并定容至 IOOmL,配制成500 μ g/mL的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液，准确移取不同体积的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液至IOmL容量瓶中，以萘的二氯甲烷溶液定容，配制成不同浓度的二氢香豆素和6 —甲基香豆素标准工作溶液，标准序列0. 001 μ g/mL, 0. 005 μ g/mL, 0. 010 μ g/mL, 0. 050 μ g/mL, 0. 10 μ g/mL, 0. 50 μ g/mL, 1. 00 μ g/mL ；按称取 l.Og 香精样品计算，相应的得到标准序列:0. 01“g/g，0. 05“g/g，0. _g/g，0· 5(^g/g，1. 0(^g/g，5. 00μδ/ g，10. OOPg/g。4.气相色谱一质谱测定
将配制好的不同浓度的二氢香豆素和6 -甲基香豆素标准工作溶液注入GC/MS，以二氢香豆素和6 —甲基香豆素与内标萘的色谱峰面积比对其相应浓度比进行回归分析，得到标准曲线，如表1所示，二氢香豆素的标准曲线图如图4所示，6—甲基香豆素的标准曲线图如图5所示。在相同条件下对提取后的样品进行测定，测得二氢香豆素和6 -甲基香豆素和内标萘的色谱峰面积比，代入标准曲线，求得样品中的二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量分别为 1. 32Pg/g 和 2. 5lPg/g。GC/MS分析条件为色谱柱HP-V0C熔融石英毛细管柱(60 m X 0. 32 mm i. d. X 1.8 μπι d. f.)；进样口温度240 °C，进样量1 μ L ；载气He，分流比10:1，流速1. 5mL/ min ；程序升温初始温度80°C，以15°C /min的速度升至245°C，保持7min，以245°C柱后运行Ilmin ；传输线温度280 V ；电离(El)能量70 eV ；离子源温度230 V ；溶剂延迟11 min，选择离子模式(SIM)扫描，二氢香豆素的选择离子为148，120，6 —甲基香豆素的选择离子为160，131，萘的选择离子为128，102。表1烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素的标准曲线
权利要求
1.一种烟用添加剂中二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤A、样品称取烟用添加剂样品，放入容器中加入含有萘的二氯甲烷溶液和无水硫酸钠，振荡提取，取上清液即为样品提取液；B、标准工作溶液称取二氢香豆素和6 —甲基香豆素标准品，用含萘的二氯甲烷溶解并定容，然后进一步用含萘的二氯甲烷在0. 001-1. 0 μ g/ml范围内稀释为具有浓度梯度的标准工作溶液；C、气相色谱一质谱测定将不同浓度梯度的标准工作溶液分别注入GC/MS，以内标法进行二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量的定量分析，即以二氢香豆素和6—甲基香豆素与内标萘的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；在相同条件下将样品提取液注入GC/MS进行测定，测得二氢香豆素和6 —甲基香豆素与内标萘的色谱峰面积比，代入标准曲线，求得样品中的二氢香豆素和6 —甲基香豆素含量；其中GC/MS分析条件为色谱柱=HP-VOC熔融石英毛细管柱；进样口温度240 °C，进样量1 μ L ；载气He，分流比10:1，流速1. 5mL/min ；程序升温初始温度80°C，以15°C / min的速度升至245°C，保持7min，以245°C柱后运行Ilmin ；传输线温度280 V ；电离能量70 eV ；离子源温度230 °C;溶剂延迟11 min，选择离子模式扫描，二氢香豆素的选择离子为148，120，6 —甲基香豆素的选择离子为160，131，萘的选择离子为128，102。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于具有浓度梯度标准工作溶液的具体配制方法为分别称取0. 0500g 二氢香豆素和6 -甲基香豆素，以萘的二氯甲烷溶液溶解并定容至IOOmL,配制成500 μ g/mL的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液，准确移取不同体积的二氢香豆素和6 —甲基香豆素母液至IOmL容量瓶中，以萘的二氯甲烷溶液定容， 配制成不同浓度的二氢香豆素和6 —甲基香豆素标准工作溶液，标准序列0. 001 μ g/mL,0.005 μ g/mL, 0. 010 μ g/mL, 0. 050 μ g/mL, 0. 10 μ g/mL, 0. 50 μ g/mL, 1. 00 μ g/mL ；按称取1.0 g 添加剂样品算，即得到标准序列:0. 01“g/g，0. 05“g/g，0. _g/g，0· 5(^g/g，1. 00μδ/ g，5. 00μδ/δ, 10. 0(^g/g。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于萘的二氯甲烷溶液中萘的浓度为 0.77 μ g/mL。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于无水硫酸钠用前在马弗炉中550°C下烘4h。
全文摘要
本发明公开了一种烟用添加剂中二氢香豆素和6－甲基香豆素含量的测定方法，以萘为内标物采用气相色谱－质谱联用仪(GC/MS)直接测定烟用添加剂中二氢香豆素和6－甲基香豆素含量，并针对二氢香豆素和6－甲基香豆素对测定过程中的GC/MS分析条件和标准溶液配制的浓度范围进行优化选择，本方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点，二氢香豆素的检出限为0.01μg/g，6－甲基香豆素的检出限为0.01μg/g；二氢香豆素和6－甲基香豆素的平均回收率分别为98.35％和97.97%，平均相对标准偏差(RSD)分别为1.94％和2.08%。
文档编号G01N30/02GK102253147SQ201110202329
公开日2011年11月23日 申请日期2011年7月19日 优先权日2011年7月19日
发明者何景福, 刘楠, 唐纲岭, 姜兴益, 张洪非, 张艳革, 李中皓, 李雪, 杨志忠, 胡清源, 赵冰, 边照阳, 陈再根, 陈欢 申请人:中国烟草总公司郑州烟草研究院, 河南中烟工业有限责任公司