用于癌症诊断和/或预后的新型抗体的制作方法

专利名称：用于癌症诊断和/或预后的新型抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及患者中增殖性疾病的预后和/或诊断的领域。更特别地，本发明涉及能够特异地结合人CMet受体的新型抗体，以及编码这些抗体的氨基酸和核酸序列。同样地，本发明包括所述抗体的用途，以及用于检测和诊断与cMet表达相关的病理性过度增殖的致癌疾患的方法。在特定实施方式中，疾患是与相对于正常而言增加的cMet多肽表达相关的致癌疾患，或任何其它与cMet过表达相关的病理。最后，本发明包括包含至少用于特定癌症预后或诊断的此种抗体的产品和/或组合物或试剂盒。
背景技术：
祀向酪氨酸激酶受体(RTK)的药剂如曲妥珠单抗(trastuzumab)、西妥昔单抗`(cetuximab)、贝伐单抗(bevacizumab)、伊马替尼(imatinib)和吉非替尼(gef itinib)抑制剂已经表明了靶向这类蛋白用于选定癌症的治疗的兴趣。cMet是也包括RON和SEA的RTK亚家族的原型成员。cMet RTK家族结构上不同于其它RTK家族，且其为唯一已知的肝细胞生长因子(HGF)(也称为scater因子(SF))的高亲和性受体(D. P. Bottaro 等人，Science 1991，251:802-804; L. Naldini 等人，Eur. Mol. Biol. Org. J. 1991，10:2867-2878)。cMet 和 HGF 广泛表达于多种组织，且它们的表达通常分别局限于上皮和间质来源的细胞(M. F. Di Renzo等人，Oncogene1991，6:1997-2003;E. Sonnenberg 等人，J. Cell. Biol. 1993，123:223-235)。不仅正常的哺乳动物发育需要它们，且已经表明其在细胞迁移、形态分化和三维管结构的组织以及生长和血管生成中特别重要(F. Baldt等人，Nature 1995，376:768-771; C.Schmidt 等人，Nature. 1995:373:699-702;Tsarfaty 等人，Sciencel994, 263:98-101)。已经表明cMet和HGF的受控调节在哺乳动物的发育、组织维持和修复中是重要的(Nagayama T 等人，Brain Res. 2004, 5; 999 (2) : 155-66; Tahara Y 等人，J Pharmacol ExpTher. 2003, 307 (I) : 146-51 )，其调节异常参与癌症的进展。由cMet不恰当激活所引发的异常信号传导是在人癌症中观察到的最常见的改变之一，其在肿瘤生成和转移中起重要作用(Birchmeier等人，Nat.Rev. Mol. CellBiol. 2003,4:915-925;L.Trusolino 和 Comoglio P. M. , Nat Rev.Cancer. 2002, 2(4):289-300)。通过配体依赖和非依赖的机制(其包括cMet的过度表达、和/或旁分泌或自分泌的激活)或者通过获得功能的突变能够引起不恰当的cMet的激活(J. G. Christensen, Burrows J.和 SalgiaR.，Cancer Latters. 2005，226:1-26)。但是，存在或不存在配体时，为调节激酶对ATP和含有酪氨酸的多肽底物的结合亲和力和结合动力学，需要 cMet 受体的寡聚化(Hays JL 等人，Biochemistry, 2004Aug 17,43:10570—8)。激活的cMet将信号传导效应子募集到位于细胞质结构域的多停靠(multidocking)位点，导致一些重要信号传导通路的激活，包括Ras-MAPK、PI3K、Scr和Stat3 (Gao CF等人，Oncogene. 2000，19(49) :5582-9)。这些通路对于肿瘤细胞增殖、侵入和血管生成以及对于避免凋亡是必要的(Furge KA 等人，Trends CellBiol. 2003Mar, 13(3) :122-30; Fan S 等人，Oncogene. 2000Apr 27，19 (18) : 2212-23)。另外，相对于其它 RTK，cMet 信号传导的独特方面是已报道的其与黏着斑复合物和非激酶结合配偶体(partner)如α 6β 4整联蛋白(integrin) (Trusolino L 等人，J BiolChem. 1999, 274(10) :6499-506)、丛蛋白BI (PlexinBl)或semaphorin (无对应译文)的相互作用(Giordano S等人，NatCell Biol. 2002，4(9) :720-4;Conrotto P 等人，Blood. 2005，105(11) :4321-9;ConrottoP, Corso S, Gamberini S，Comoglio PM, Giordano S，Oncogene. 2004，23:5131-7),其可以通过该受体进一步添加至细胞功能调节的复杂性。最后，最近的数据证实了 cMet可参与对吉非替尼或厄洛替尼(erlotinib)的肿瘤抗性，表明靶向EGFR和cMet两者的化合物的组合可能是显著的感兴趣的(Engelman JA 等人，Science, 2007, 316:1039-43)。在过去的一些年中，已经开发了许多不同的策略减弱癌症细胞系中cMet的信号传导。这些策略包括i)中和抗cMet或HGF/SF的抗体(Cao B等人,Proc Natl AcadSci U S A. 2001, 98(13) : 7443-8;Martens T 等人，Clin Cancer Res. 2006，12 (20) : 6144-52)或使用HGF/SF 拮抗剂 NK4，防止配体与 cMet 结合(Kuba K 等人，CancerRes.，2000, 60:6737-43)，
ii)对cMet的小ATP结合位点抑制剂，封闭激酶活性(Christensen JG等人，CancerRes. 2003, 63:7345-55)，iii)工程化的SH2结构域多肽，其干扰进入多停靠位点，以及减少受体或配体表达的RNAi或核酶。这些方法中的大多数表现出导致肿瘤抑制的cMet的选择性抑制，并表明cMet可能是癌症治疗性干预所感兴趣的。

发明内容
本发明的目的在于提供至少一种试剂，其能够用作检测和/或检测致癌疾患、特别是其特征为cMet表达或那些异常cMet表达介导的疾患的诊断或预后的生物标志物。文中描述的是符合此准则的新型抗体。本发明的其它特征和优点将在随后的详细说明和实施例中变得明显。在第一方面，本发明的主题是一种结合蛋白，或其功能片段或衍生物，其以高亲和性特异地结合配体非依赖激活形式的cMet蛋白(cMet),优选人cMet,并因而能够用于诊断由配体非依赖激活形式的cMet表达介导的病理性过度增殖致癌疾患的方法中。配体非依赖的激活涉及cMet的组成性磷酸化,其随后是(consecutive to) i)在cMet过度表达(通常与cMet基因的扩增相关)的情况下，在不存在HGF时发生的受体二聚化，或ii)在cMet细胞内结构域内激活突变，或iii)两者皆有。在第一方面，本发明涉及结合蛋白，或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii )不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet。通过“结合蛋白”的表述，应当理解为与其它蛋白或分子具有特异的或广泛的亲和性的任何肽链。当结合可能时，使蛋白接触并形成复合体。本发明的结合蛋白优选，单不局限为抗体、抗体的片段或衍生物、蛋白或肽。表述“功能片段和/或衍生物”将在本发明的说明书的后面详细定义。通过表述“在肿瘤上”，应当理解根据本发明的结合蛋白报道的性质存在于体内的肿瘤环境中，并不仅仅在体外的实例中。更特别地，其已被证实，如从以下实施例中明确的，用代表尽可能最接近天然的环境的离体实验或在人肿瘤组织的商业微阵列(TMA)上的分析。应当理解此处本发明不涉及天然形式的蛋白，S卩，这些蛋白不是存在于其天然环境中的，而是其能够被从天然来源分离或获得，或通过遗传重组、或通过化学合成获得的，然后如下面描述的，其能够含有非天然的氨基酸。根据本发明的实施方式，公开了一种结合蛋白，或其功能片段或衍生物，如上面所述，其不阻断配体肝细胞生长因子(HGF)结合至cMet。更特别地，本发明的结合蛋白或其功能片段或衍生物在氨基酸残基I和950之间与cMet的细胞外区域相互作用。根据第一个实施方式，本发明涉及一种结合蛋白，其功能片段或衍生物，其包含选自包含至少SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、17、18、19、20或21的序列的CDR中的至少一个CDR或最佳比对后其序列与序列SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、17、18、19、20或21具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的至少一个CDR。`根据第二个实施方式，本发明涉及一种结合蛋白，或其功能片段或衍生物，其包含选自包含至少SEQ ID No. 9、10、11、12、13、14、22、23、24、25或26的序列的CDR中的至少一个CDR或最佳比对后其序列与序列SEQ ID No. 9、10、11、12、13、14、22、23、24、25或26具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的至少一个CDR。抗体的“功能片段”表示，尤其是，抗体片段，比如片段Fv、SCFv(SC=简单链)、Fab、F (ab’)2、Fab’、scFv-Fc或双特异抗体、或任何半衰期延长的片段。本说明书中将随后详细描述这种功能片段。抗体的“衍生化合物”或“衍生物”表示，尤其是，由肽支架和为了保留其被识别的能力的至少一个原始抗体CDR组成的结合蛋白。这种本领域技术人员公知的衍生化合物，将随后在本说明书中详细描述。在第一个实施方式中，本发明的结合蛋白或其功能片段或衍生物包括抗原结合结构域，该抗原结合结构域包括至少一个选自序列SEQ ID No. 1-6的⑶R。在另一个实施方式中，本发明的结合蛋白或其功能片段或衍生物包括抗原结合结构域，该抗原结合结构域包括至少一个选自序列SEQ ID No. 9-14的⑶R。在本发明的又一个优选实施方式中，所述结合蛋白或其功能片段或衍生物由分离的抗体组成。更优选地，本发明包括通过遗传重组或化学合成获得根据本发明的抗体、其衍生的化合物或其功能片段。根据一个优选的实施方式，根据本发明的抗体或其衍生的化合物或功能片段的特征在于其由单克隆抗体组成。“单克隆抗体”理解为表示来自早期均质抗体群的抗体。更具体地，除了以极小比例可以发现的少数可能天然发生的突变外，群的个体抗体是一致的。换言之，单克隆抗体由来自单个细胞克隆(例如杂交瘤、转染有编码均质抗体的DNA分子的真核宿主细胞、转染有编码均质抗体的DNA分子的原核宿主细胞等)生长的均质抗体组成，通常其特征在于一类且仅一类及亚类的重链和仅一种类型的轻链。单克隆抗体是高度特异性的，并针对单一抗原。此外，和制备多克隆抗体(其通常包括针对多种决定簇、或表位的多种抗体)对比，各单克隆抗体针对单个抗原表位。
此处必须了解，本发明不涉及天然形式的抗体，S卩，它们不取自其天然环境，但它们通过纯化分离自或获得自天然来源、或者通过遗传重组或者通过化学合成获得，因此它们可以带有非天然氨基酸，正如将在此后描述的。更特别地，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含至少一个序列SEQ ID No. 1、2、3、17、18的⑶R，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ IDNo. 1、2、3、17、18具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。甚至更优选地，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含以下3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其中一 CDR-Ll包括序列SEQ ID No. I或17，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. I或17具有至少80%同一性的序列；-CDR-L2包括序列SEQ ID No. 2或18，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 2或18具有至少80%同一性的序列；和 - CDR-L3包括序列SEQ ID No. 3，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 3具有至少80%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii )并不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，所述抗体的特征在于其包含根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其中CDR-Ll包括序列SEQ ID No. 1，CDR-L2包括序列SEQ ID No. 2和CDR-L3包括序列SEQID No. 3。根据另一个具体实施方式
，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含如根据Kabat定义的以下3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和 CDR-L3，其中 CDR-Ll 包括序列 SEQ ID No. 17，CDR_L2 包括序列 SEQ ID No. 18 和 CDR-L3包括序列SEQ ID No. 3。根据另一个实施方式，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含至少一个序列SEQ ID No. 4、5、6、19、20或21的⑶R，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 4、5、6、19、20或21具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。在一个优选的方式中，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含以下3种⑶R，分别为⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中- CDR-Hl包括序列SEQ ID No. 4或19，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 4或19具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；一 CDR-H2包括序列SEQ ID No. 5或20，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 5或20具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；和- CDR-H3包括序列SEQ ID No. 6或21，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 6或21具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)并不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，所述抗体的特征在于，其包含一个重链，该重链包含根据頂GT定义的下面3种CDR，分别为CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQ ID No. 4，CDR-H2 包括序列 SEQ IDNo. 5 和 CDR-H3 包括序列 SEQ IDNo. 6。根据另一个具体实施方式
，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含如根据Kabat定义的以下3种⑶R，分别为⑶R-H1、⑶R-H2和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQ ID No. 19，CDR_H2 包括序列 SEQ ID No. 20 和 CDR-H3包括序列SEQ ID No. 21。更特别地，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含至少一个序列SEQ ID No :9、10、11、22、23的⑶R，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ IDNo :9、10、11、22、23具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。甚至更优选地，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含以下3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其中- CDR-Ll包括序列SEQ ID No. 9或22，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 9或22具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；`— CDR-L2包括序列SEQ ID No. 10或23，或在最佳比对后与序列SEQ IDNo. 10或23具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；和—⑶R-L3包括序列SEQID No. 11，或在最佳比对后与序列SEQ ID No. 11具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)并不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，所述抗体的特征在于，其包含一个轻链，该轻链包含根据頂GT定义的下面3种CDR，分别为CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3，其中 CDR-Ll 包括序列 SEQ ID No. 9，CDR-L2 包括序列 SEQ IDNo. 10 和 CDR-L3 包括序列 SEQ IDNo. 11。根据另一个具体实施方式
，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个轻链，该轻链包含如根据Kabat定义的以下3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和 CDR-L3，其中 CDR-Ll 包括序列 SEQ ID No. 22，CDR-L2 包括序列 SEQ ID No. 23 和 CDR-L3包括序列SEQ ID No. 11。根据另一个实施方式，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含至少一个序列SEQ ID No. 12、13、14、24、25、26的CDR，或至少一个在最佳比对后与序列SEQ ID No. 12、13、14、24、25、26具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。在一个优选的方式中，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含以下3种⑶R，分别为⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中— CDR-Hl包括序列SEQ ID No. 12或24，或在最佳比对后与序列SEQ IDNo. 12或24具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；— CDR-H2包括序列SEQ ID No. 13或25，或在最佳比对后与序列SEQ IDNo. 13或25具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；以及— CDR-H3包括序列SEQ ID No. 14或26，或在最佳比对后与序列SEQ IDNo. 14或26具有至少80%、优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet,但ii )不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet,所述抗体的特征在于其包含一个重链，该重链包含根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-H1、CDR-H2 和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQID No. 12，CDR-H2 包括序列 SEQ ID No. 13 和CDR-H3 包括序列 SEQ ID No. 14。根据另一个具体实施方式
，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物之一，其特征在于其包含一个重链，该重链包含如根据Kabat定义的以下3种⑶R，分别为⑶R-H1、⑶R-H2和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQ ID No. 24，CDR-H2 包括序列 SEQ ID No. 25 和 CDR-H3包括序列SEQ ID No. 26。在本说明书中，术语“多肽”、“多肽序列”、“肽”和“附着至抗体化合物或其序列的
蛋白质”是可互换的。此处必须了解，本发明不涉及天然形式的抗体，S卩，它们不取自其天然环境，但它们通过纯化分离自或获得自天然来源、或者通过遗传重组或者通过化学合成获得，因此它 们可以带有非天然氨基酸，正如将在此后描述的。在第一个实施方式中，互补决定区、或CDR表示如Kabat等人定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区(Kabat等人，Sequences of proteins of immunologicalinterest, 5thEd. , U. S. Department of Health and Human Services, NIH, 1991,及其随后的版本)。有三个重链⑶R和三个轻链⑶R。此处，术语“⑶R”用于表示，取决于具体情况，一种或更多种、或甚至所有区，所述区含有负责对其识别的抗原或表位的抗体结合亲和性的大部分氨基酸残基。 在第二个实施方式中，通过⑶R区或⑶R，意图表示如IMGT定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区。无论抗原受体、链的类型、或物种如何，定义了 MGT独特编号来比较可变结构域(Lefranc M. -P. , Immunology Today 18, 509(1997)/Lefranc Μ. -P. , Thelmmunologist,7,132-136 (1999) /Lefranc, Μ. -P. , Pommie, C. , Ruiz, Μ. , Giudicelli, V. , Foulquier, Ε. , Truong, L. , Thouvenin-Contet, V.和 Lefranc, Dev. Comp. Tmmunol · , 27, 55-77(2003))。 在IMGT独特编号中，保守的氨基酸总是具有相同的位点，例如半胱氨酸23 (第一-CYS)、色氨酸41 (保守的-TRP)、疏水氨基酸89、半胱氨酸104 (第二-CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118 (J-PHE或J-TRP)。IMGT独特编号提供框架区的标准界限(FR1-MGT :位点I至26、FR2-IMGT 39 至 55、FR3-IMGT 66 至 104 以及 FR4-MGT :118 至 128)以及互补决定区的标准界限CDR1-IMGT :27 至 38、CDR2-IMGT 56 至 65 以及 CDR3-MGT :105 至 117。正如间隔代表未占据的位点，⑶R-IMGT长度(显示于括号之间，并由点隔开，如(8. 8. 13 ))成为重要的信息。在二维图示中使用頂GT独特编号，如頂GT Colliers de Perles所指定的(Ruiz, Μ.和 Lefranc, Μ. -P. , Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) /Kaas, Q.和Lefranc, Μ. -P.，Current Bioinformatics, 2，21-30(2007))，以及在 MGT/3D 结构-DB 中的三维结构中(Kaas, Q.，Ruiz, M.和 Lefranc, Μ·-P.，T cell receptor and MHCstructuraldata. NucI. Acids. Res. , 32, D208-D210 (2004))。存在三个重链⑶R和三个轻链⑶R。术语⑶R此处根据情况用于表示，这些区的一个或几个、或甚至这些区的全部，所述区含有负责对其识别的抗原或表位的抗体结合亲和性的大部分氨基酸残基。为了更加明确，应当理解在下面的描述中，更特别地在表2a、2b和3中，将通过IMGT编号和Kabat编号定义CDR。在本发明的意思中，两条核酸或氨基酸序列之间的“同一性百分比”表示最佳比对后获得的待比较的两条序列之间一致的核苷酸或氨基酸残基的百分比，此百分比是纯统计学的，并且两条序列之间的差异沿着其长度随机分布。两条核酸或氨基酸序列的比较传统上在它们最佳比对之后通过比较序列来进行，所述比较能够通过节段或通过使用“比对窗”进行。可以进行用于比较的序列的最佳比对，除了手工比较，通过Smith和Waterman 的局部同源算法(1981 )(Ad. App. Math. 2:482)、通过 Neddleman 和 Wunsch( 1970)(J. Mol. Biol. 48:443)的局部同源算法、通过Pearson和Lipman的相似性搜索方法(1988)(Proc. Natl. Acad. Sci. USA85:2444)、或通过使用这些算法的计算机软件(Wisconsin遗传软件包中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，Genetics Computer Group, 575ScienceDr. Madison, WI，或者通过比较软件 BLASTNR 或 BLAST P)。两条核酸或氨基酸序列之间的同一性百分比可以通过比较两条最佳-比对的序列来确定，其中待比较的核酸或氨基酸序列，同两序列间用于最佳比对的参考序列相比，有增加或删除。通过确定两条序列间一致的氨基酸核苷酸或残基的位点数，将一致位点的数除以比对窗中整个位点数，结果乘以100获得两条序列间的同一性百分比，来计算同一性`百分比。例如，BLAST程序，网站 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 上可获得的 “BLAST 2 序列”(Tatusova 等人，“Blast 2sequences_a new tool forcomparingprotein and nucleotide sequences，，, FEMS Microbiol. , 1999, Lett. 174:247 -250)，可配合使用缺省参数(尤其地，参数“空位开放罚分”:5，以及“空位扩展罚分”:2 ;选择矩阵例如程序推荐的“BL0SUM 62”矩阵);直接通过程序计算待比较的两条序列间的同一性百分比。对于和参考氨基酸序列表现出至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列，优选的实例包括那些含有参考序列、某些修饰、尤其是至少一个氨基酸的删除、增加或取代、截短或延长的序列。在取代一个或更多个连续或非连续氨基酸的情况下，取代优选其中取代的氨基酸被“等价”氨基酸代替。此处，表述“等价氨基酸”意图表示任何可能被结构氨基酸中的一个所取代的氨基酸，而不改变相应抗体的生物活性，那些具体实例如下描述。可以通过其和被取代的氨基酸的结构同源性，或通过可能产生的各种抗体间的生物活性的比较测试结果，来确定等价氨基酸。作为非限定性实例，如下表I总结了可能实施的不导致相应的修饰抗体显著的生物活性改变的可能取代；在相同条件下，相反的取代在天然中是可能的。表I
原始残基[M
Ala(A)Val, Gly, Pro
Arg(R)Lys, HisAsn(N)Gln
Asp (D)Glu
Cys(C)Ser
Gln(Q)Asn
Glu(G)Asp
Gly(G)Al^
His (H)Arg
He (I)Leu
Leu (L)He, Val, Met
Lys(K)Arg
Met (M)Leu
Phe(F)Tyr
Pro (P)Ala
Ser(S)Thr, Cys
Thr(T)Ser
Trp(W)Tyr
Tyr(Y)Phe，Trp
Val (V)Leu, Ala本领域技术人员公知在本领域的目前状况下，在3个重链⑶R上，更特别地，在该
重链的⑶R-H3上发现6个⑶R间的最大可变性(长度和组成)。在一个具体实施方式
中，本发明涉及小鼠抗体、或其衍生的化合物或功能片段。本发明的另一个实施方式公开了一种抗体、或其功能片段或衍生物之一，其包括
轻链，该轻链包括根据頂GT的下述3种⑶R 一序列SEQ ID No. I或最佳比对后与序列SEQ ID No. I具有至少80%，优选85%、
90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Ll ；一序列SEQ ID No. 2或最佳比对后与序列SEQ ID No. 2具有至少80%，优选85%、
90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L2 ;和一序列SEQ ID No. 3或最佳比对后与序列SEQ ID No. 3具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L3 ;和重链，该重链含 有根据MGT的下述3种⑶R ；一序列SEQ ID No. 4或最佳比对后与序列SEQ ID No. 4具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Hl ；一序列SEQ ID No. 5或最佳比对后与序列SEQ ID No. 5具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的⑶R-H2 ;和-序列SEQID No. 6或最佳比对后与序列SEQ ID No. 6具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-H3。在一个优选的实施方式中，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，其包含a)轻链，该轻链包含根据MGT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和CDR-L3，其中 CDR-Ll 包括序列 SEQ ID No. 1，CDR_L2 包括序列 SEQ ID No. 2 和 CDR-L3 包括序列SEQ ID No. 3，和b)重链，该重链包含根据MGT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-H1、CDR-H2 和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQ ID No. 4，CDR-H2 包括序列 SEQ ID No. 5 和CDR-H3 包括序列 SEQ ID No. 6。另外，本发明的另一个实施方式公开了一种抗体、或其功能片段或衍生物之一，其包括轻链，该轻链包括根据頂GT的下述3种⑶R 一序列SEQ ID No. 9或最佳比对后与序列SEQ ID No. 9具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Ll ；一序列SEQ ID No. 10或最佳比对后与序列SEQ ID No. 10具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L2 ;和一序列SEQ ID No. 11或最佳比对后与序列SEQ ID No. 11具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L3 ;和重链，该重链含有根据MGT的下述3种⑶R ；一序列SEQ ID No. 12或最佳比对后与序列SEQ ID No. 12具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Hl ；一序列SEQ ID No. 13或最佳比对后与序列SEQ ID No. 13具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的⑶R-H2 ;和一序列SEQ ID No. 14或最佳比对后与序列SEQ ID No. 14具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-H3。在一个优选的实施方式中，本发明的抗体、或其功能片段或衍生物在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，其包含a)轻链，该轻链包含根据MGT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-L1、⑶R-L2和CDR-L3，其中 CDR-Ll 包括序列 SEQ ID No. 9，CDR-L2 包括序列 SEQ ID No. 10 和 CDR-L3 包括序列SEQ ID No. 11，和b)重链，该重链包含根据MGT定义的下面3种⑶R，分别为⑶R-H1、CDR-H2 和 CDR-H3，其中 CDR-Hl 包括序列 SEQ ID No. 12，CDR_H2 包括序列 SEQ ID No. 13 和CDR-H3 包括序列 SEQ ID No. 14。本发明的另一个实施方式公开了一种抗体、或其功能片段或衍生物之一，其包括轻链，该轻链包括根据Kabat的下述3种⑶R
一序列SEQ ID No. 17或最佳比对后与序列SEQ ID No. 17具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Ll ；一序列SEQ ID No. 18或最佳比对后与序列SEQ ID No. 18具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L2 ;和一序列SEQ ID No. 3或最佳比对后与序列SEQ ID No. 3具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L3 ;和重链，该重链包括根据Kabat的下述3种⑶R ；一序列SEQ ID No. 19或最佳比对后与序列SEQ ID No. 19具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Hl ；一序列SEQ ID No. 20或最佳比对后与序列SEQ ID No. 20具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的⑶R-H2 ;和
·
—序列SEQID No. 21或最佳比对后与序列SEQ ID No. 21具有至少80%同一性的序列的CDR-H3。本发明的另一个实施方式公开了一种抗体、或其功能片段或衍生物之一，其包括轻链，该轻链包括根据Kabat的下述3种⑶R 一序列SEQ ID No. 22或最佳比对后与序列SEQ ID No. 22具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Ll ；—序列SEQID No. 23或最佳比对后与序列SEQ ID No. 23具有至少80%同一性的序列的Q)R_L2 ;和一序列SEQ ID No. 11或最佳比对后与序列SEQ ID No. 11具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-L3 ;和重链，该重链含有根据Kabat的下述3种⑶R ；一序列SEQ ID No. 24或最佳比对后与序列SEQ ID No. 24具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-Hl ；一序列SEQ ID No. 25或最佳比对后与序列SEQ ID No. 25具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的⑶R-H2 ;和一序列SEQ ID No. 26或最佳比对后与序列SEQ ID No. 26具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR-H3。根据另一个实施方式，本发明的抗体或其功能片段或衍生物，其特征在于，其含有序列的轻链可变结构域，该序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 7或最佳比对后与序列SEQ IDNo. 7具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；和/或序列的重链可变结构域，该序列包含氣基酸序列SEQ ID No. 8或最佳比对后与序列SEQ ID No. 8具有至少80%,优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 7的序列的轻链可变结构域和包含氨基酸序列SEQID No. 8的序列的重链可变结构域。根据另一个实施方式，本发明的抗体或其功能片段或衍生物，其特征在于，其含有序列的轻链可变结构域，该序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 15或最佳比对后与序列SEQ IDNo. 15具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列；和/或序列的重链可变结构域，该序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 16或最佳比对后与序列SEQ ID No. 16具有至少80%，优选85%、90%、95%和98%同一性的序列。因而，本发明描述一种抗体、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上，i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 15的序列的轻链可变结构域和包含氨基酸序列SEQID No. 16的序列的重链可变结构域。如上所示，本发明还涉及任何衍生自本发明所述抗体的化合物。更具体地，本发明的抗体、或其衍生化合物或功能片段，特征在于所述衍生化合物 由包含肽支架的结合蛋白组成，所述肽支架上嫁接有至少一个⑶R，以这种方式来保留所有或部分原始抗体的抗体决定簇识别特性。本发明所述的CDR序列之中的一个或更多个序列还可以出现在各种免疫球蛋白支架上。在这种情况下，蛋白质序列使得能够重新建造适合所嫁接的⑶R进行折叠的肽骨架，使其保留其抗体决定簇抗原-识别特性。通常，本领域技术人员知道如何确定在其上嫁接至少一个来自原始抗体的CDR的蛋白质支架类型。更具体地，已知，要选择这样的支架必须满足如下尽可能多的原则(Skerra A. , J. Mol. Recogn. , 2000, 13:167-187)-良好的系统发育保守性；-已知的三维结构(如，例如，通过晶体学、NMR光谱或本领域技术人员公知的任何其它技术);-尺寸小；-很少或没有转录后修饰；和/或-易于生产、表达和纯化。这种蛋白质支架的来源可以是，但不限于，选自如下的结构纤维连接蛋白和优选III型纤维连接蛋白结构域10、脂质运载蛋白、抗运载蛋白(anticalin) (SkerraA.，J.Biotechnol. , 2001, 74 (4) : 257-75)、来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)蛋白 A的结构域B的蛋白Z、硫氧还蛋白A或带有重复基序比如“锚蛋白重复”(Kohl等人，PNAS,2003，vol. 100, No. 4，1700-1705)、“犰狳蛋白重复”、“富有亮氨酸重复”和“三角形四肽重复(tetratricopeptide repeat)，，的蛋白质。来自毒素的支架，比如，例如来自蝎子、昆虫、植物、软体动物等的毒素，以及神经NO合成酶(PIN)的蛋白抑制剂也应当提及。这种杂交构建的一个实例，绝非限制，是将抗-⑶4抗体的⑶R-Hl (重链)，即13B8. 2，插入到PIN的一个环中，如此获得的新结合蛋白保留了和原始抗体相同的结合特性(Bes 等人,Biochem. Biophys. Res. Commun. , 2006, 343 (I), 334-344)。基于纯粹说明性的基础，也可以提及将抗溶菌酶VHH抗体的CDR-H3 (重链)嫁接至新致癌菌素的一个环上(Nicaise 等人，Protein Science, 2004，13(7) : 1882-1891)。最后，如上所述，这种肽支架可包括I至6个来自原始抗体的⑶R。优选，但不是必须的，本领域技术人员将选择至少一个来自重链的CDR，后者被认为主要和抗体的特异性有关。一个或更多个相关的CDR的选择对于本领域技术人员而言是显而易见的，本领域技术人员将随后选择合适的公知技术(Bes等人，FEBSletters 508, 2001, 67-74)。本发明从而涉及抗体、或其衍生化合物或功能片段，特征在于肽支架选自这样的蛋白质a)系统发育上保守性良好，b)坚固的结构，c)具有公知的三维分子组织，d)尺寸小和/或e)包括可以通过不改变稳定特性的删除和/或插入进行修饰的区。根据优选实施方式，本发明的抗体、或其衍生化合物或功能片段，特征在于所述肽支架选自如下i)来自纤维连接蛋白，优选III型纤维连接蛋白结构域10、脂质运载蛋白、抗运载蛋白、来自金黄色葡萄球菌蛋白A的结构域B的蛋白Z、硫氧还蛋白A或带有重复基序比如“锚蛋白重复” (Kohl等人，PNAS, 2003，vol. 100，No. 4，1700 - 1705)、“犰狳蛋白重复”、“富有-亮氨酸重复”和“三角形四肽重复”的蛋白的支架，或iii)神经NO合成酶(PIN)的蛋白抑制剂。本发明的另一方面涉及上述抗体的功能片段。更具体地，本发明针对抗体、或其衍生化合物或功能片段，特征在于所述功能片段选自片段Fv、Fab、F (ab ’)2、Fab ’、scFv、scFv-Fc或双特异抗体、或任何半衰期延长的片段比如聚乙二醇化的片段。根据本发明的这种抗体功能片段由，例如，片段Fv、scFv (sc=简单链)、Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv-Fc或双特异抗体、或任何通过化学修饰，比如增加聚亚烷基二醇，如聚乙二醇(聚乙二醇化)(聚乙二醇化的片段涉及Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、F (ab’)2_PEG和Fab’ -PEG)或通过并入脂质体、微球体或PLGA延长半衰期的片段组成，所述片段具有至少一个本发明特有的CDR，其尤其能够，以常规或甚至部分的方式，展现其所来自的抗体的活性。优选，所述功能片段将包括或包含其所来自的抗体的可变重链或轻链的部分序列，所述部分序列足以保留和其所来自的所述抗体相同的结合特异性和足够的亲和性，亲和性优选至少等于其所来自的抗体的1/100，更优选至少1/10。这种功能片段将含有其所来自抗体的序列的至少5个氨基酸，优选6、7、8、10、15、25、50或100个连续氨基酸。优选这些功能片段将属于Fv、scFv、Fab、F (ab’)2、F (ab，)、scFv_Fc或双特异抗 体类型，其通常具有和其所产生的抗体相同的结合特异性。根据本发明，本发明抗体的片段可以通过如方法比如酶消化，包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶、和/或通过化学还原切割二硫桥从上述抗体获得。所述抗体片段还可以通过本领域技术人员公知的重组遗传技术或通过例如自动肽合成仪(比如Applied BioSystems等销售的那些)的方式进行的肽合成来获得。为了更加清楚，下表2a总结了根据IMGT的对应本发明抗体的各种氨基酸序列，而表2b总结了根据Kabat的对应本发明抗体的各种氨基酸序列。表2a (其中Mu. =鼠科)
权利要求
1.一种结合蛋白、或其功能片段或衍生物，其在肿瘤上i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，其特征在于 i)其不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet;和，任选， ii)其不阻断配体HGF结合至cMet;和,任选， iii)其在氨基酸残基I和950之间与cMet的细胞外区域相互作用。
2.根据权利要求I的结合蛋白、或其功能片段或衍生物，其特征在于，其由选自如下的分离的抗体或其功能片段或衍生物组成 a)一种抗体、或其功能片段或衍生物，包括 -轻链，所述轻链包括根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为具有序列SEQ IDNo. I的CDR-Ll、具有序列 SEQ ID No. 2 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3 ;和 -重链，所述重链包括根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为具有序列SEQ IDNo. 4的CDR-H1、具有序列 SEQ ID No. 5 的 CDR-H2 和具有序列 SEQ ID No. 6 的 CDR-H3，和 b)一种抗体、或其功能片段或衍生物，包括 -轻链，所述轻链包括根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为具有序列SEQ IDNo. 9的CDR-Ll、具有序列 SEQ ID No. 10 的 CDR-L2 和具有序列 SEQ ID No. 11 的 CDR-L3 ;和 -重链，所述重链包括根据頂GT定义的下面3种⑶R，分别为具有序列SEQ IDNo. 12的CDR-Hl、具有序列 SEQ ID No. 13 的 CDR-H2 和具有序列 SEQ ID No. 14 的 CDR-H3。
3.根据权利要求2的抗体、或其功能片段或衍生物，其特征在于，其选自如下 a)—种抗体、或其功能片段或衍生物，其包括具有氨基酸序列SEQID No. 7的序列的轻链可变结构域和具有氨基酸序列SEQ ID No. 8的序列的重链可变结构域；和 b)一种抗体、或其功能片段或衍生物，其包括具有氨基酸序列SEQ ID No. 15的序列的轻链可变结构域和具有氨基酸序列SEQ ID No. 16的序列的重链可变结构域。
4.一种能够分泌根据权利要求2或3的抗体的鼠杂交瘤，所述鼠杂交瘤选自保藏于2009年11月18日，CNCM，巴黎巴斯德研究所，保藏号1-4247的杂交瘤和保藏于2009年11月18日，CNCM，巴黎巴斯德研究所，保藏号1-4246的杂交瘤。
5.源自杂交瘤1-4247或1-4246或其亚克隆的单克隆抗体，其肿瘤上i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet。
6.一种分离的核酸，其特征在于其选自以下的核酸 a)编码如权利要求I要求的结合蛋白的核酸、DNA或RNA； b)编码如权利要求2、3和5中的一项要求的抗体的核酸、DNA或RNA； c)包含DNA序列的核酸,该DNA序列包含序列SEQID No. 27至32或35至40 ; d)包含DNA序列的核酸，该DNA序列包含序列SEQID No. 33、34、41或42 ； e)如c)或d)中定义的核酸的相应的RNA核酸；和 f)如a)、b)、c)和d)中定义的核酸的互补核酸。
7.根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的单克隆抗体，或其功能片段或衍生物，用于鉴定配体非依赖激活形式的cMet的用途。
8.一种用于区分样本中配体非依赖激活形式的cMet和其它形式的cMet，包括非激活的或配体依赖激活形式的cMet的方法,所述方法包括步骤 a)使所述样本与根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5的中的一项的抗体，或其功能片段或衍生物接触，和 b)检测所述结合蛋白或抗体与样本的结合。
9.根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体，或其功能片段或衍生物，用于体外诊断与配体非依赖激活形式的cMet相关的致癌疾患或通过免疫标记确定发展成与配体非依赖激活形式的cMet相关的致癌疾患的预后的用途。
10.一种通过免疫标记检测受试者中配体非依赖激活形式的cMet表达肿瘤的存在和/或位点的方法，其中所述方法包括步骤 a)使来自受试者的样本与根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体，或其功能片段或衍生物接触，和 b)检测所述结合蛋白或抗体与样本的结合。
11.一种通过免疫标记确定来自受试者的cMet表达肿瘤中配体非依赖激活形式的cMet表达水平的方法，其中所述方法包括步骤 a)使来自受试者的样本与根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体，或其功能片段或衍生物接触，和 b)在所述样本中定量所述结合蛋白或抗体与配体非依赖激活形式的cMet结合的水平。
12.根据权利要求11的方法，其中通过免疫组织化学(IHC)测量配体非依赖激活形式的cMet的表达水平。
13.—种通过免疫标记诊断受试者中配体非依赖激活形式的cMet表达肿瘤或通过免疫标记确定受试者中发展成配体非依赖激活形式的cMet表达肿瘤的预后的方法，其中所述方法包括步骤 a)确定根据权利要求11的配体非依赖激活形式的cMet的表达水平，和 b)比较步骤a)的表达水平与来自正常组织的配体非依赖激活形式的cMet的参考表达水平。
14.一种通过免疫标记确定受试者肿瘤的配体非依赖激活形式的cMet状态的方法，其 中所述方法包括步骤 a)确定根据权利要求11的配体非依赖激活形式的cMet的表达水平， b)针对所述肿瘤的配体非依赖激活形式的cMet表达水平评分，和 c)比较所述评分与获对照样本的评分。
15.一种确定致癌疾患是否对用抗配体非依赖激活形式的cMet结合蛋白或抗体、或其片段或衍生物的治疗敏感的方法，其中所述方法包括步骤 a)通过免疫标记确定根据权利要求11的受试者肿瘤的配体非依赖激活形式的cMet状态,和 b)如果状态是配体非依赖激活形式的cMet( + )，确定致癌疾患对用抗配体非依赖激活形式的cMet结合蛋白或抗体、或其片段或衍生物的治疗敏感。
16.一种试剂盒，其包括至少根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体、或其功能片段或衍生物，所述结合蛋白或抗体是被标记的。
17.根据权利要求16的试剂盒用于通过免疫标记检测受试者中配体非依赖激活形式的cMet表达肿瘤的存在和/或位点，所述试剂盒进一步包括对检测所述标记的结合蛋白或抗体与配体非依赖激活形式的cMet间结合程度有用的试剂。
18.—种包括抗体的结合蛋白、或其功能片段或衍生物，其特征在于其与根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体交叉竞争结合配体非依赖激活形式的 cMet。
19.根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体、或其功能片段或衍生物，用于鉴定能够特异地结合配体非依赖激活形式的cMet的包括抗体的结合蛋白中的用途。
20.一种鉴定配体非依赖激活形式的cMet的结合配偶体的方法，其特征在于，其包括步骤 a)使配体非依赖激活形式的cMet与根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体、或其功能片段或衍生物接触； b)使a)的复合物与化合物库接触， c)鉴定破坏a)的复合物的化合物。
21.—种纯化配体非依赖激活形式的cMet的方法，其特征在于其包括以下步骤 a)在允许所述结合蛋白或抗体与配体非依赖激活形式的cMet特异地结合的条件下，根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体或其功能片段或衍生物与样本进行孵育；和 b)从样本中分离结合蛋白或抗体，并获得纯化的配体非依赖激活形式的cMet。
22.由根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体、或其功能片段或衍生物与配体非依赖激活形式的cMet结合形成的复合物。
23.根据权利要求I的结合蛋白或根据权利要求2、3和5中的一项的抗体、或其功能片段或衍生物作为意图使生物活性化合物特异地靶向表达配体非依赖激活形式的cMet的细胞的媒介的用途。
24.一种生产抗体、或其功能片段或衍生物的方法，其i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet,但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet,所述方法的特征在于其包括步骤 a)用转染的或表达cMet蛋白或其片段的肿瘤细胞系免疫动物； b)从动物中取出抗体产生细胞； c)将所述抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，从而获得杂交瘤细胞； d)进行筛选分析，从而选择产生抗体的杂交瘤细胞，其中抗体i)特异地结合配体非依赖激活形式的cMet，但ii)不结合非激活的和/或配体依赖激活形式的cMet ； e)在细胞培养基中培养产生抗体的选择的杂交瘤；以及 f )从细胞培养物取出抗体。
25.根据权利要求24的方法，其特征在于所述步骤d)的筛选分析由IHC筛选分析组成，所述IHC筛选分析优选包括步骤 a)从表达不同形式cMet的肿瘤中收集组织切片， b)使用权利要求24的杂交瘤细胞，同时在步骤a)的不同的组织切片上进行IHC染色，步骤c),c)选择在 表达配体非依赖激活形式的CMet的组织切片上具有特异反应，而在其它组织切片上没有反应的杂交瘤细胞。
全文摘要
本发明涉及患者中增殖性疾病的预后和/或诊断领域。更特别地，本发明涉及能够特异性结合人cMet受体的新型抗体，以及编码这些抗体的氨基酸和核酸序列。同样地，本发明包括所述抗体的用途、和相应的用于检测和诊断与cMet表达相关的病理性过度增殖的致癌疾患的方法。在特定实施方式中，所述疾患是相对于正常而言与增加的cMet多肽表达有关的致癌疾患，或与cMet过度表达关联的任何其它病理。最后，本发明包括包含至少用于特定癌症预后或诊断的此种抗体的产品和/或组合物或试剂盒。
文档编号G01N33/574GK102971343SQ201180032337
公开日2013年3月13日 申请日期2011年6月29日 优先权日2010年6月29日
发明者A·茹阿诺 申请人:皮埃尔法布雷医药公司