专利名称：预测癌症发生的生物标志物的制作方法
预测癌症发生的生物标志物本发明的目标是评价对象得癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的方法，所述对象还没有临床表现的癌症和/或在应用这种方法时没有临床表现的癌症，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度 将pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平与该人得癌风险和/或与所述对象的癌症死亡风险分别关联。本发明的目标是为对象预防癌症的方法和/或监测预防(意味着监测预防措施的奏效)的方法，所述对象还没有临床表现的癌症和/或在应用这种方法时没有临床表现的癌症，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 利用pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平，根据所述对象是否有或有多少得癌易感性和/或癌症死亡风险的评价，将该对象分层，和/或在所述对象中通过反复测定pro-ANP或其片段、血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的水平，来监测所述对象的得癌易感性和/或所述对象的癌症死亡风险，其中任何所述片段具有12个氨基酸的长度。本发明的方法在评价对象得癌易感性方面特别有价值，因此是特别优选的。癌症被定义为遗传疾病，通过致癌基因的激活和/或抑癌基因的失活引发，产生典型的癌细胞表型。然而，在最近数十年期间，已经了解从恶性转化进展到明显的肿瘤疾病高度依赖于宿主的非恶性细胞，也许最重要的是通过血管的募集，即“血管生成开关(angiogenicswitch)，，。已经提出，血管生成的失衡通过减少小动脉和毛细血管的形成从而增加总外周性血管阻力，对动脉性高血压的发展具有重要性。作为这种假说的支持，高血压是癌症患者抗血管生成治疗中众所周知的副作用。可是，在流行病学水平上，高血压伴随有癌症风险的轻度提高，但这种相关性的原因未知。有意思的是，血压敏感和血管活性的激素肾上腺髓质素、心房利钠肽和血管加压素已经在实验模型中显示出对血管生成和癌细胞有调控作用。在此，我们假设肾上腺髓质素、心房利钠肽和/或血管加压素的宿主水平可能有癌症预测作用。为了应对这个问题，我们在一项大型的瑞典前瞻性群组研究中测量了空腹血浆中这些激素的前体的稳定片段[肾上腺髓质素原中间区(MR-pro-ADM)、心房利钠肽原中间区(MR-pro-ANP)和前血管加压素原C末端(和肽素)]，以及这三种生物标志物的基线水平与15年随访期间癌症发生的相关性。因此，本发明的目标是评价对象患癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的方法，所述对象还没有临床表现的癌症和/或在应用这种方法时没有临床表现的癌症，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 将pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平与该人得癌风险和/或与所述对象的癌症死亡风险分别关联。在评价了易感性和/或癌症死亡风险之后，可以根据所需要的预防措施对所述对象进行分层。本发明的目标是为对象预防癌症和/或监测预防的方法，所述对象还没有临床表现的癌症和/或在应用这种方法时没有临床表现的癌症，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 利用pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平，将该对象根据所述对象是否有得癌易感性和/或癌症死亡风险的评价，对该对象是否需要预防癌症的方法进行分层， 或在所述对象中通过反复测定pro-ANP或其片段、血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的水平，监测所述对象得癌易感性和/或癌症死亡的风险，其中任何所述片段具有至少12个氨基酸的长度。本发明的目标是评价对象得癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的方法，所述方法包括以下步骤:
在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 将pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平与该人得癌风险和/或与所述对象的癌症死亡风险分别关联。在评价对象得癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的上述方法的具体实施方式
中，所述对象还没有被诊断为患癌和/或没有患癌。尚末诊断为患癌的对象是没有先患癌症的对象。先患的或现今的癌症可以通过组织病理学(活检或手术后组织检查)证实。这意味着尚未患癌或没有患癌的人是未被优选通过组织病理学(活检或手术后组织检查)诊断出和/或证实癌症的人。本发明的方法在在对象是男性对象的情况下尤其优选。根据收集的数据，本发明的方法特别适合于高加索裔对象，更优选高加索裔欧洲对象，最优选高加索裔北欧对象。如上所述，本发明的方法在评价对象得癌易感性方面特别有价值，因此是特别优选的。在本发明的上述方法中，对象可以分层为有(提高的)得癌易感性或没有(提高的)得癌易感性，有(提高的)癌症死亡风险或没有。除了这样的根据风险和/或易感性对对象进行的有/无的分层，根据本发明方法的分层，可以按风险和/或易感性的升高产生两个以上风险/易感性组、优选三个以上风险/组。可以规定与特定的风险/易感性相关联的所述生物标志物的特定阈值和/或生物标志物、其他实验室和临床参数的数学组合。代替分层为特定风险组，可以通过连续的标度来完成风险分层。在将对象分层为有(提闻的)得癌易感性或有(提闻的)癌症死亡风险之后，可以采取几种措施以便预防和/或延迟癌症的临床表现。这些措施可以包括但不限于下列措施:加强和/或提高诊断性措施的频率、预防性药物、改变锻炼活动、改变生活方式、改变饮食。一旦一个人被分层为是有(提高的)得癌易感性或有(提高的)癌症死亡风险的对象，可以再次和/或若干次实施评价所述对象的得癌易感性和/或评价所述对象的癌症死亡风险的方法，以便监测预防进展。尚没有临床表现癌症和/或没有临床表现癌症的对象组可以包括有癌前形式(pre-form of cancer)然而没有临床表现癌症的对象。根据实施例，尚没有临床表现癌症的对象是没有临床和组织学诊断确定的先患癌症的对象；没有临床表现癌症的对象是根据体检和问卷的基线检查排除癌症的对象。在任何情况下，所述对象都还没有被诊断为患癌和/或没有患癌。本发明的目标还在于将没有临床表现癌症的对象治疗分层和/或监测预防措施奏效的方法，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和肽素或其片段、和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 利用pro-ANP或其片段、和/或和肽素或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平进行治疗分层和/或监测预防措施的奏效。在本发明上述方法的具体实施方式
中，所述对象还没有被诊断为患癌和没有患癌。在实施例显示的分析中，本发明方法所使用的标志物，即pix)-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段，任何所述片段具有至少12个氨基酸的长度，在所有癌症发生被认为发生在生物标志物检查之后接下来15年内、并且重要的是还在从分析中省略15年随访期的前四年这两种情况下，所述标志物都预测了癌症发生。如果本发明的方法只可用于具有癌前形式的对象，那么可以预期，对癌症发生的预测对于预测5-15年随访期的癌症将不会奏效。因此，清楚证明了本发明的方法能够同等地预测可能有某种癌前形式的对象，而且也能预测没有癌前形式的对象。在优选实施方式中，所述对象是男性。在本发明方法的另一种优选实施方式中，所述方法用于对象、优选男性群体对象的筛查法。所述片段是来源于肾上腺髓质素、血管加压素和ANP的激素原(肾上腺髓质素原，血管加压素原，pro-ANP)的任何片段。Pro-ADM的已知片段包括PAMP、MR-pro-ADM、ADM、CT-pix)-ADM(肾上腺紧张素)。血管加压素原的已知片段包括血管加压素(AVP，抗利尿激素，ADH)、神经垂体素运载蛋白I1、 和肽素。pro-ANP的已知片段包括ANP、NT-pro_ANP、MR-pro-ANPo所述前激素原的序列如下:SEQ ID NO: I (pre-pro-ADM)102030405060MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEF RKKffNKffALS RGKRELRMSS SYPTGLADVK708090100110120AGPAQTLIRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RVKRYRQSMN NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL130140150160170180
AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYGRRR RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGSAPHFLSEQ ID NO:2 (前血管加压素原)1020 30 405060MPDTMLPACF LGLLAFSSAC YFQNCPRGGK RAMSDLELRQ CLPCGPGGKG RCFGPSICCA7080 90 100110120DELGCFVGTA EALRCQEENY LPSPCQSGQK ACGSGGRCAA FGVCCNDESC VTEPECREGF130140 150 160HRRARASDRS NATQLDGPAG ALLLRLVQLA GAPEPFEPAQ PDAYSEQ ID NO:3 (pre-pro-ANP)
1020 30405060MSSFSTTTVS FLLLLAFQLL GQTRANPMYN AVSNADLMDF KNLLDHLEEK MPLEDEVVPP7080 90 100110120QVLSEPNEEA GAALSPLPEV PPffTGEVSPA QRDGGALGRG PffDSSDRSAL LKSKLRALLT130140 150APRSLRRSSC FGGRMDRIGA QSGLGCNSFR YRR关于所述序列的更多的信息参见:pre-pro-ADM:http://www.uniprot.0rg/uniprot/P35318前血管加压素原:http://www.uniprot.0rg/uniprot/P01185pre-pro-ANP:http://www.uniprot.0rg/uniprot P01160在特别优选的实施方式中，测定SEQ ID NO:4的MR-pro-ADM的水平。在另一种特别优选的实施方式中，测定SEQ ID NO:5的和肽素的水平。在另一种特别优选的实施方式中，测定SEQ ID NO:6的MR-pro-ANP的水平。SEQ ID NO:4 (MR-pro-ADM)1020 30 40ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMK GASRSPEDSS PDAARIRVSEQ ID NO:5 (CV-proAVP-和肽素)1020 30ASDRSNATQL DGPAGALLLR LVQLAGAPEP FEPAQPDAYSEQ ID NO:6 (MR-pro-ANP)1020 30PEVPPffTGEV SPAQRDGGAL GRGPffDSSDR SALLKSKL标志物的组合可以产生附加的信息。因此，利用pro-ANP或其片段和血管加压素原或其片段的水平，也是本发明方法的优选实施方式，利用MR-pro-ANP以及和肽素是本发明的方法特别优选的。因此，利用pro-ADM及其片段和pro-ANP或其片段的水平，也是本发明方法的优选实施方式，利用MR-pro-ANP和MR-pro-ADM作为标志物组合是特别优选的。在Cox比例风险模型中，分析了两种标志物是否将对癌症发生的发展产生独立的和明显的预测信息，因此两种标志物的组合是否比单独任一种产生更多的信息。该分析示范性地全在男性中进行。MR-pro-ANP+和肽素:
权利要求
1.评价对象得癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的方法，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 将pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平与所述对象得癌风险和/或与所述对象的癌症死亡风险相关联，以及其中所述对象尚未被诊断为患癌和/或没有患癌。
2.权利要求1的方法，其用于对象的治疗分层和/或监测预防措施的奏效，所述对象在应用这种方法的时候没有临床表现的癌症，所述方法包括以下步骤: 在从所述对象获得的样品中测定pro-ANP或其片段、和/或血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的水平，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度， 利用pro-ANP或其片段、血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的所述水平，根据所述对象是否具有得癌易感性和/或癌症死亡风险的评价，对该对象进行分层， 或在所述对象中通过反复测定pro-ANP或其片段、血管加压素原或其片段和/或pro-ADM或其片段的水平，监测所述对象得癌易感性和/或癌症死亡的风险，任何所述片段都具有至少12个氨基酸的长度。
3.权利要求2的方法，其中一旦一个人被分层为是有(提高的)得癌易感性或有(提高的)癌症死亡风险的对象，可以再次和/或若干次实施根据权利要求1或2的评价所述对象的得癌易感性和/或评价所述对象的癌症死亡风险的方法，以便监测预防的进展。
4.权利要求1至3任一项的方法，其中所述对象是男性。
5.权利要求1至4任一项的方法，其中将这种方法用在对象、优选男性群体对象的筛查方法中。
6.权利要求1至5任一项的方法，其中测定序列为SEQID NO:4的MR-pro_ADM的水平。
7.权利要求1至6任一项的方法，其中测定序列为SEQID NO:5的和肽素的水平。
8.权利要求1至7任一项的方法，其中测定序列为SEQID NO:6的MR-pro_ANP的水平。
9.权利要求1至8任一项的方法，其中测定并使用血管加压素原或其片段以及pro-ANP或其片段的水平。
10.权利要求1至8任一项的方法，其中测定并使用MR-ANP以及和肽素的水平。
11.权利要求1至8任一项的方法，其中测定并使用pro-ADM及其片段以及pro-ANP及其片段的水平。
12.权利要求1至8任一项的方法，其中测定并使用MR-pro-ANP以及MR-pro_ADM的水平。
13.权利要求1至8任一项的方法，其中测定pro-ANP或其片段、和肽素或其片段，以及pro-ADM或其片段的水平。
14.权利要求13的方法，其中测定序列为SEQID NO:4的MR-pro-ADM、序列为SEQ IDNO: 5的和肽素，以及序列为SEQ IDNO: 6的MR-pro-ANP的水平，并将所述水平与所述男性的得癌风险相关联。
15.权利要求1至14任一项的方法，其中将对象年龄包括在所述对象的得癌风险和/或癌症死亡风险的测定中。
16.权利要求1至15任一项的方法，其中将下列参数中的至少一个包括在所述对象的得癌风险和/或癌症死亡风险的测定中:抽烟习惯(1/0)，癌症遗传性，一例或多例一级亲属癌症的癌症。`
全文摘要
本发明的目标是评价对象得癌易感性和/或评价对象癌症死亡风险的方法，在应用这种方法时所述对象尚没有临床表现的癌症和/或没有临床表现的癌症。
文档编号G01N33/574GK103119446SQ201180030166
公开日2013年5月22日 申请日期2011年6月17日 优先权日2010年6月18日
发明者安德里斯·贝格曼, 约阿希姆·斯特鲁克, 奥勒·米兰德 申请人:B.R.A.H.M.S 有限公司