专利名称：石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法。
背景技术：
石刁柏，风味独特、营养丰富，更有防癌、抗癌的神奇功效，素有“蔬菜王”之美称。这主要是因为其含有多种调节人体生理功能、预防慢性病发生等保健作用的生物活性物质。石刁柏中所含的天冬酰胺酶，对乳腺癌、肺癌、食管癌、膀胱癌、皮肤癌、胃癌、直肠癌等均有一定的疗效。但目前市场上的天冬酰胺酶均为由大肠杆菌(E. coli)和欧文菌(Erwinia)等制备的L-天冬酰胺酶，但对如何确定植物中天冬酰胺酶含量的差异，目前未见有相关检测方法的报道
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法，可以检测出石刁柏植株不同部位的天冬酰胺酶含量的差异，从而解决目前没有方法可以检测出石刁柏的天冬酰氨酶含量差异的问题。通过以下技术方案解决上述技术问题本发明实施例提供一种石刁柏中天冬酰氨酶含量差异的检测方法，包括抽取石刁柏植株，取所述植株的根、茎和叶片作为样品，分别制成样品溶液，将所述样品溶液分别与对照品溶液通过比色法进行比色分析，通过计算光吸收值比较得到石刁柏各部位的天冬酰氨酶含量的差异。本发明实施例提供的方法，通过将石刁柏植株的根、茎和叶片制成样品溶液，利用比色法进行比色分析，可以准确比较出石刁柏植株各部位的天冬酰氨酶含量的差异，从而为利用石刁柏植株提取天冬酰氨酶提供了准确的依据，可以大大提高从石刁柏中提取天冬酰氨酶的效率，缓解天冬酰氨酶市场供不应求的问题。
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。图I为本发明实施例提供的方法检测石刁柏根中天冬酰氨酶活性(U/ml)示意图；图2为本发明实施例提供的方法检测石刁柏茎中天冬酰氨酶活性(U/ml)示意图；图3为本发明实施例提供的方法检测石刁柏叶中天冬酰氨酶活性(U/ml)示意图。
具体实施例方式下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。本发明实施例提供一种石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法，包括以下步骤抽取石刁柏植株，取所述植株的根、茎(茎可以是取从茎顶端至底端长20cm，基部平均直径O. 5 I. 2cm的材料，可以是业内常指的嫩茎)和叶片作为样品，分别制成样品溶液，将所述样品溶液分别与对照品溶液通过比色法进行比色分析，通过计算光吸收值比较得到石刁柏各部位的天冬酰氨酶含量的差异。进一步的，上述方法中，抽取石刁柏植株之前，还包括对石刁柏植株进行雌雄鉴定的步骤，这样可以检测出雌雄株的石刁柏植株的各部位的天冬酰氨酶含量的差异。进一步的，上述方法中，抽取石刁柏植株之前，还包括对石刁柏植株品种进行鉴定的步骤，这样可以检测出不同品种的石刁柏植株的各部位的天冬酰氨酶含量的差异。也可 以对石刁柏植株同时进行品种以及雌雄株的鉴定。上述方法中，通过以下方式制成样品溶液将样品(从石刁柏植株取得的根、茎及叶片)用水洗净，在105°C的温度下烘烤15分钟杀酶，在70°C的温度下烘干、粉碎、以20目筛过筛得到样品干粉；称取I. 5g所述样品干粉，滤纸包裹后放置于索氏提取器中，用无水乙醚加热回流提取I小时，倾去乙醚溶液；待滤纸包挥干乙醚后，置于索氏提取器中，加甲醇加热回流提取6小时，回收甲醇后，转移至IOOml量瓶，并用甲醇定容到刻度，摇匀；吸取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加质量浓度5%的AlCl3甲醇溶液1ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得到样品溶液。上述方法中的对照品溶液通过以下方式制得，包括将所述样品用水洗净，在105°C的温度下烘烤15分钟杀酶，在70°C的温度下烘干、粉碎、以20目筛过筛得到样品干粉；称取I. 5g所述样品干粉，滤纸包裹后放置于索氏提取器中，用无水乙醚加热回流提取I小时，倾去乙醚溶液；待滤纸包挥干乙醚后，置于索氏提取器中，加甲醇加热回流提取6小时，回收甲醇后，转移至IOOml量瓶，并用甲醇定容到刻度，摇匀；吸取样品溶液Iml，置于IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得到对照品溶液。上述方法中，抽取的石刁柏植株采用新鲜的石刁柏植株，如采用采摘时间不超过I小时的石刁柏植株。这样可以保证作为样品的石刁柏植株的根、茎、叶片均为新鲜的。利用本发明实施例的方法，可以比较不同品种石刁柏雌雄植株的根、茎、叶中天冬酰胺酶的活性，从而找到不同品种的石刁柏雌雄植株在生物活性物质方面的显著差异，为从石习柏植株中提取植物源天冬酰胺酶提供依据。下面结合具体实施例对上述方法作进一步说明。具体步骤为供试品种育种栽培一雌雄株的鉴定一抽取供试样品一数据分析，其中，(I)供试品种的育种栽培:选用十种常见优质的石刁柏品种，于2000年在北京市昌平区金六环农业园的蔬菜基地石刁柏园栽种；
(2)雌雄株的鉴定于2005年的4月，逐株鉴定试验田中石刁柏植株雌雄性别，并做出标记，分别用Al AlO表示；( 3 )抽取供试样品在鉴定出石刁柏植株的雌雄后，进行随机抽取植株作为供试材料，之后分别采集它们的莖、叶片、根作为供试样品；如采集石刁柏5年实生苗茎(茎长为20cm，基部平均直径
O.5 I. 2cm),新鲜成熟叶片和2mm粗以下的根系作为样品；(3. I)制备样品溶液用自来水冲洗净，在105°C的条件下烘15min杀酶，70°C的条件下烘干、粉碎、过筛(20目)得到干粉备用；精密称取石刁柏植株的叶、茎和根的干粉I. 5g，滤纸包裹，放置索氏提取器中，用无水乙醚加热回流提取lh，倾去乙醚溶液；滤纸包挥干乙醚后，置于索氏提取器中，加甲醇加热回流提取6h，回收甲醇后，转移至IOOml量瓶，并用甲醇定容到刻度，摇匀；精密吸取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加浓度5%A1C13甲醇溶液1ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置lOmin，即得到样品溶液；(3. 2)对照品溶液制备，以不加AlCl3的样品溶液作为对照品溶液；(4)测定法采用比色法，依据天门冬酰胺酶催化天门冬酰胺水解生成天门冬氨酸和氨的原理。天门冬酰胺+H20—天门冬氨酸+NH3生成的氨气与奈氏试剂反应产生红色络合物，用比色法测定氨的生成量以表示酶的活性，具体于433nm处测定吸收度，计算光吸收值，结果参见图I的石刁柏的根中天冬酰氨酶活性(U/ml)，图2的石刁柏的茎中天冬酰氨酶活性(U/ml),图3的石刁柏的叶中天冬酰氨酶活性(U/ml)。由图I 图3的对比可以看出，天冬酰氨酶在石刁柏的根中富集，在雌雄株间的差异由各品种的不同而异。石刁柏的茎和叶中天冬酰氨酶含量次之，在供试的品种中，天冬酰氨酶在雌雄株间的差异未见规律。根据这些结论，可以大大提高从石刁柏中提取天冬酰氨酶的效率，从而缓解天冬酰氨酶市场供不应求的问题。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式
，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。
权利要求
1.一种石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法，其特征在于，包括 抽取石刁柏植株，取所述植株的根、茎和叶片作为样品，分别制成样品溶液，将所述样品溶液分别与对照品溶液通过比色法进行比色分析，通过计算光吸收值比较得到石刁柏各部位的天冬酰氨酶含量的差异。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述抽取石刁柏植株之前，还包括对石刁柏植株进行雌雄鉴定的步骤。
3.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于，通过以下方式制成样品溶液 将所述样品用水洗净，在105°C的温度下烘烤15分钟杀酶，在70°C的温度下烘干、粉碎、以20目筛过筛得到样品干粉； 称取I. 5g所述样品干粉，滤纸包裹后放置于索氏提取器中，用无水乙醚加热回流提取I小时，倾去乙醚溶液；待滤纸包挥干乙醚后，置于索氏提取器中，加甲醇加热回流提取6小时，回收甲醇后，转移至IOOml量瓶，并用甲醇定容到刻度，摇匀； 吸取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加质量浓度5%的A1C13甲醇溶液1ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得到样品溶液。
4.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液通过以下方式制得，包括 将所述样品用水洗净，在105°C的温度下烘烤15分钟杀酶，在70°C的温度下烘干、粉碎、以20目筛过筛得到样品干粉； 称取I. 5g所述样品干粉，滤纸包裹后放置于索氏提取器中，用无水乙醚加热回流提取I小时，倾去乙醚溶液；待滤纸包挥干乙醚后，置于索氏提取器中，加甲醇加热回流提取6小时，回收甲醇后，转移至IOOml量瓶，并用甲醇定容到刻度，摇匀； 吸取样品溶液Iml，置于IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，即得到对照品溶液。
5.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于，所述抽取的石刁柏植株为采摘时间不超过I小时的石刁柏植株。
6.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于，所述植株的茎为从茎顶端至底端长20cm,基部平均直径O. 5 I. 2cm的材料。
全文摘要
本发明公开了一种石刁柏植株的天冬酰氨酶含量差异的检测方法，该方法包括抽取石刁柏植株，取所述植株的根、茎和叶片作为样品，分别制成样品溶液，将所述样品溶液分别与对照品溶液通过比色法进行比色分析，通过计算光吸收值比较得到石刁柏各部位的天冬酰氨酶含量的差异。该方法通过将石刁柏植株的根、茎和叶片制成样品溶液，利用比色法进行比色分析，可以准确比较出石刁柏植株各部位的天冬酰氨酶含量的差异，从而为利用石刁柏植株提取天冬酰氨酶提供了准确的依据，可以大大提高从石刁柏中提取天冬酰氨酶的效率，缓解天冬酰氨酶市场供不应求的问题。
文档编号G01N21/31GK102944526SQ20121050090
公开日2013年2月27日 申请日期2012年11月29日 优先权日2012年11月29日
发明者韩莹琰, 范双喜, 程继鸿, 任月 申请人:北京农学院