专利名称：一种血吸虫病胶体金快速诊断试纸的制作方法
技术领域：
一种血吸虫病胶体金快速诊断试纸技术领域[0001]血吸虫病快速试纸条诊断试剂盒及其制备方法及相关应用，属于寄生虫病免疫诊 断技术领域，采用工业染料取代酶标记物的所谓染料标记法，用于血吸虫病快速试纸条诊 断。
背景技术：
[0002]曼氏血吸虫尾蝴引起的皮肤症状主要是由于代谢产物或死后的崩解产物引起炎 症反应以及尾蝴的移行造成机械性损害。大量虫卵在组织内成堆沉积，形成的肉芽肿，引起 周围有大量单核细胞(浆细胞)与中性粒细浸润。在曼氏血吸虫虫卵肉芽肿中可检测出高 浓度可溶性虫卵抗原。虫卵周围有嗜酸性辐射样棒状物，系抗原与抗体结合的免疫复合物， 称为Ho印Ili现象。曼氏血吸虫主要寄生在肠系膜下静脉与直肠痔上静脉内。虫卵沉积于 肠壁黏膜下层，经门静脉血到达肝脏引起肝脏病变，故病变以肝脏与结肠最显著。异位损害 则主要以肺部脑部为主。虫卵沉积在降结肠、乙状结肠与直肠形成虫卵结节，引起肠道膜水 肿、充血，结节溃破后形成浅表溃疡。晚期肠壁因纤维组织增生而增厚，导致肠息肉、肠狭窄 等。息肠肉有转变为癌肿可能，狭窄可致机械性梗阻。血吸虫卵也可沉着于阑尾引起阑尾 炎。肝脏的病变主要表现为肝内门静脉周围纤维化、门静脉阻塞、肝脏肿大。门静脉阻塞可 使腹壁静脉扩张、食道及胃底静脉曲张，门-腔静脉侧支循环开放破裂，后引起上腹水和消 化道大量出血等症状。异位损害中，肺部出现肉芽肿伴周围肺泡渗液，胸透可发现有粟粒样 改变等。脑部虫卵肉芽肿病变以位于顶叶与颞叶为多，脑CT可见多发性高密度结节阴影。[0003]试验材料及设备[0004]具体方案为该试纸以塑料薄片条I为固相支架，其特征在于在该塑料薄片条I的 一面设置有加样区2、色剂区3、检测区4、质控区5和吸水区6五个部分，加样区2和吸水 区6分别位于塑料薄片条I的两端，二者都由吸水纸构成，并以双面胶纸固定于塑料薄片条 I上；显色剂区3紧邻加样区，由吸附有以显色剂标记的能结合被测样品中曼氏血吸虫抗原 或抗体断抗原或抗体的包被物与构成质控区5的含有质拉物质的包被物之间的间距为3至 5毫米，优选间距为5毫米。[0005]检测区4和质控区5位于显色剂区3与吸水区6之间，显色剂区3紧邻加样区，其 位置可以互换，检测区4由包被有曼氏血吸虫特异诊断抗原或抗体的硝酸纤维薄膜构成， 质控区5由包被有能与显色剂区3中的桥联物质结合的质拉物质的硝酸纤维薄膜构成，由 构成检测区4和质控区5的硝酸纤维薄膜为同一张硝酸纤维薄膜。吸附有以显色剂标记的 能结合被测样品中曼氏血吸虫抗原或抗体并能与质控区的质控物质结合的桥联物质的玻 璃纤维纸构成。该玻璃纤维纸以双面胶纸固定于塑料薄片条I上。当作为桥联物质的多抗 为曼氏血吸虫多抗是曼氏血吸虫兔感染血清抗体或曼氏血吸虫兔免疚血清抗体,质拉物质 为抗兔免疫球蛋白或抗兔lgG。检测抗原的试纸中所使用的桥联物质曼氏血吸虫多抗是曼 氏血吸虫兔感染血清抗体或曼氏血吸虫兔免疚血清抗体。[0006]当使用的桥联物质为多抗时，质拉物质为该多抗的同种动物的抗体；在测抗体的试纸中质控物质为人或其它动物的免疫球蛋白，或者为人或其它动物的IgG.构成质拉区 5的能与显色剂区3中的桥联物质结合的质控物质是显色剂为胶体金、罗丹明、酶、或染料 等，显色剂的酶是辣根过氧化物酶，或碱性磷酸酶等，作为显色剂的染料是莲、或酸性黑RB， 能结合被测样品中的曼氏血吸虫抗原或抗体并能与质控区的质控物质结合的桥联物质是: 在检测抗体的试纸中，桥联物质是5PA，或羊抗人IgG检测抗原的试纸中，桥联物质是曼氏 血吸虫单抗一鼠lgG、或曼氏血吸虫多抗。在测抗原试纸中当使用的桥联物质为单抗时， 质控物质为该单抗的同种动物的抗体，即抗鼠免疫球蛋白或抗鼠IgG ;在测抗体的试纸中 质拉协质为人或其它动物的免疫球蛋白，或者为人或其它动物的lgG。发明内容[0007]本发明是设计一种操作简便、对人曼氏血吸虫进行快速检测的一种胶体金检测卡。[0008]本发明的目的是这样实现的利用一种较强特异性、高饮食性，能考核和诊断疗 效，微量准确、反应敏捷、经济实用和操作简便能在现场应用于血吸虫病快速诊断胶体金试 纸。[0009]本发明提供一种血吸虫病胶体金快速诊断试纸，该试纸以塑料薄片条为固相支 架，其在该塑料薄片条的一面设置有加样区、色剂区、检测区、质控区和吸水区五个部分，加 样区和吸水区分别位于塑料薄片条的两端，二者都由吸水纸构成，并以双面胶纸固定于塑 料薄片条上；显色剂区紧邻加样区，检测区和质控区位于显色剂区与吸水区之间。[0010]胶体金标记法对四氯金酸进行还原(主要有硼氢化钠还原、白磷还原)的方法 配制成直径约为5-10nm胶体金颗粒溶液，为一种红色溶液，由于胶体金表面带有负电荷而 蛋白质带有正电荷，异性相吸原理，导致两者相吸而牢固结合，因此可用胶体金来标记蛋白 质，但有一定缺点①标记过程较为麻烦，条件很难控制，必须在纯化后才可利用；②价位 较高，成品胶体金为进口产品，若自制胶体金，较为满意的胶体金颗粒不容易得到；③标记 物需保存于4摄氏度的低温条件下，不方便携带。[0011]检测试纸的原理为薄本血吸虫病快速诊断试纸的醋酸纤维薄膜(nit :1 c acid f I bre fi恤，Ne)的检测区有曼氏血吸虫特异诊断抗原或抗体必须预先包被.把检测样品 逐步加入到加样区，在毛细管作用下，被检测品在向上的方向上泳动.当被检测品游至标 记有胶体金(或酶等其它着色剂)的羊抗人I单抗或多抗、葡萄球菌蛋白A(SPA)显色区 时，作为标记物的显色分别与待检测样品中相应抗原或抗体结合。结合物继续沿此条向上 泳动至检侧区时，又与包被在此的相应抗体或抗原结合.检测体，即形成抗原一抗体一 S以 一胶体金(其它着色剂)复合物；检侧抗原(双抗体夹心法)时，即形成胶体金(或其它着 色剂)一抗体2—抗原一抗体I复合物，此时，检测区即显示出肉眼可见(粉红色或其它颜 色)。[0012]本发明具有的优点[0013]1.以往试纸条测试的是日本血吸虫，本发明的试纸条主要是针对曼式血吸虫的检 测，满足了那些曼式血吸虫流行地区的检测需求。[0014]2.本发明的试纸条在诊断人曼氏血吸虫病时，操作简便，快速。样品无需特殊处 理，无需另配其他试剂，按检测程序在10-15min，即可判诊断结果。[0015]3.本发明的试纸条可以批量生产，单人单份检测，成本低廉，投资少，见效快。[0016]4.本发明的试纸条以胶体金为标记物制备而成，没有联苯二胺等有害物质及放射 性元素的参与，其安全性好；用的抗原为可溶性抗原，具有良好的抗原性，以胶体标记抗原， 利用各种原理，能检测多种动物(包括人)抗血吸虫抗体，具有很高的特异性和灵敏性，而 且运用范围十分广泛。[0017]5.本发明的试纸条以显色有无为检测判断结果，即检测线是否出现颜色变化。结 果判定形象、准确、可靠。[0018]目前，与本发明相近的血吸虫病试纸条诊断方法有如下I种[0019]酶标记法辣根过氧化物酶通过戊二醛胶联或过碘酸钠氧化方法与抗体蛋白结八口 ο[0020]其缺点是酶的价格较高；检测时花费时间较久，一般在2小时左右，不适于现场 大规模普查使用。标记方法较为麻烦，需纯化后方可使用；酶容易失活，需保存于4摄氏度， 不便运输。[0021]本发明的有益技术效果[0022]本发明的检测方法，同时检测病人体内抗血吸虫和另一种抗体，在保证特异性的 同时,也提高了敏感性；同时也检测病人(病畜)体内寄生虫源性物质-循环抗原。[0023]抗原抗体同时检测，即提高了检出率，又具有现症感染检测、感染度估计、疗效考 核的价值。所用的抗原为重组抗原，即重组血吸虫信号蛋白和重组血吸虫谷胱苷肽-S-转 移酶；所用的抗体为重组血吸虫信号蛋白单克隆抗体，使间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 技术易标准化，克服了非特异性交叉反应，具有特异性高，敏感性强，方法简便、快速。易标 准化和工厂化生产，无需特殊设备，检测成本低廉(适宜血吸虫病流行的农村贫困地区)等 优点。[0024]注意事项[0025]1.取试纸条时，用手捏住吸水垫(较长的一端)，严禁触摸检测膜。[0026]2.试纸条一定要插入杯底。[0027]3.检测血清必须新鲜，否则会影响测试结果。[0028]4.该试纸条与肺吸虫病人和肝吸虫病人有部分交叉反应，检测时注意。
[0029]图1为本实用新型的血吸虫病胶体金快速诊断试纸的结构示意图。
具体实施方式
[0030]请参考图1，本发明实施例提供一种血吸虫病胶体金快速诊断试纸，该试纸以塑料 薄片条I为固相支架，在该塑料薄片条I的一面设置有加样区2、色剂区3、检测区4、质控区 5和吸水区6五个部分，加样区2和吸水区6分别位于塑料薄片条I的两端，二者都由吸水 纸构成，并以双面胶纸固定于塑料薄片条I上；显色剂区3紧邻加样区2，检测区4和质控 区5位于显色剂区3与吸水区6之间。[0031]下面通过两个现场应用的实例来介绍该血吸虫病胶体金快速诊断试纸的应用。[0032]实施例1 :现场应用2006年云南人群检查21533人，阳性1431人，阳性率为6. 65%其中重复感染1328人，占92. 80%,新感染103人，占7. 20%。粪检阳性率与2005年 的8. 02%相比显著下降(P <0.01)。上年遗留未治病人53人，2006年期内实有病人1484 人，比上年的1727人下降14. 07%。病人和病畜主要分布在未控制流行的巍山县、洱源县、 永胜县和曾达到传播控制标准，但近年疫情又回升的大理市、鹤庆县、南涧县。表明该法适 用于血吸虫病低度流行区筛选，较其他免疫诊断方法更为适用。[0033]实施例2 :现场应用2002年在江苏省南京市郊区用血吸虫快试纸条诊断试剂盒 对52例自然人群筛查中，15例粪检阳性的血吸虫病人，结果全为阳性阳性符合率为100%。 表明该法适合用于血吸虫病低度流行区筛查确定化疗对象。
权利要求1.一种血吸虫病胶体金快速诊断试纸，该试纸以塑料薄片条(I)为固相支架，其特征在于，在该塑料薄片条(I)的一面设置有加样区(2)、色剂区(3)、检测区(4)、质控区(5)和吸水区(6)五个部分，加样区(2)和吸水区(6)分别位于塑料薄片条(I)的两端，二者都由吸水纸构成，并以双面胶纸固定于塑料薄片条(I)上；显色剂区(3)紧邻加样区(2)，检测区⑷和质控区(5)位于显色剂区(3)与吸水区(6)之间。
专利摘要一种曼氏血吸虫病胶体金快速诊断试纸，其特征在于在塑料片条的一面设置有加样区、显色剂区、检测区、质控区、和吸水区，加样区和吸水区由吸水纸构成，显色剂区由吸附有以显色剂标记的桥联物质的玻璃纤维纸构成，检测区由包被有曼氏血吸虫特异诊断抗原或抗体的硝酸纤维薄膜构成，质控区由包被有能与显色剂区中的桥联物质结合的质控物质的硝酸纤维薄膜构成，具有敏感性高、特异性强、操作简便、反应快速、微量准确和经济适用、适合现场应用等优点。
文档编号G01N33/577GK202837306SQ201220145860
公开日2013年3月27日 申请日期2012年4月1日 优先权日2012年4月1日
发明者殷燕 申请人:杭州格朗瑞生物科技有限公司