专利名称：一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫检测领域，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置。
背景技术：
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associatedlipocalin，NGAL),又称人脂质运载蛋白2 (Iipocalin 2，LCN2)或噬铁蛋白(siderocalin),是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。NGAL是Kjeldsen等在1993年研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组份，与明胶酶B即基质金属蛋白酶9 (matrixmetalloproteinase-9,MMP_9)密切相关。NGAL是一种小分子蛋白，其可表达于中性粒细胞和某些上皮细胞，如肾小管上皮细胞中。在多种原因引起的肾损伤中，NGAL可显著升高，释放于尿液和血液中。NGAL在损伤2小时内即可迅速升高，因而，NGAL可作为一种高灵敏度的急性肾损伤早期诊断标志物。在正常生理情况下，NGAL含量较低，能刺激肾祖细胞向肾小管上皮细胞分化，以保障肾脏正常的生长发育。当肾缺血或毒素急性肾小管损伤时，在开始的两个小时内，受损的肾小管上皮细胞能高表达NGAL，从而诱导肾小管间质中浸润的中性粒细胞发生凋亡，以保护肾组织免受攻击；另一方面高水平的NGAL能促进肾小管上皮细胞再生修复，使肾脏功能得以恢复。据丹麦Bioporto公司研究，健康志愿者EDTA血浆中NGAL浓度分布在37 - 106ng/ml,平均值为63ng/ml,尿液中浓度分布在O. 7-9. 8ng/ml,平均值为5. 3ng/ml。而IQJ病房中急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)患者NGAL浓度在血清中为66_922ng/ml,尿液中为 110-40，000ng/ml。2005年，丹麦BioPorto公司首先推出ELISA商品检测试剂盒，可用于血清(浆)、尿液中NGAL检测。此外，美国R&D Systems公司也研发出ELSIA检测试剂盒，美国博适公司Triage分析仪也可对EDTA抗凝血浆或全血(双抗体夹心免疫荧光层析法)中的NGAL进行检测。目前已有适用于全自动免疫分析仪的分析系统面世，如美国雅培公司的Architecti2000SR/i 1000SR全自动免疫分析仪可测定尿液NGAL (化学发光免疫法)。但其中的ELISA存在着操作繁琐，检测耗时长等缺点；全自动分析仪价格昂贵，不适合检测少量标本使用。相比之下，床旁检测(point care of testing,P0CT)可方便快速地提供可靠检验结果，有助于临床医师更早制订治疗策略，并节省治疗费用。POCT中的胶体金免疫层析检测法具有检测迅速、操作简便、准确和成本低等特点，且不需要低温保存，适合于检测NGAL。在使用金标免疫层析法快速检测NGAL时，通常需要采用全血作为检测样本，血清或血浆样本因制备需要静置一段时间或者需离心而使获得检测结果的时间延长，故往往不适于作为快速检测的标本。然而，由于全血样本用于免疫层析检测时容易出现红细胞过滤不完全或者溶血现象，导致红细胞以及红细胞释放的血红蛋白与分析物一起层析至检测区，使检测窗口的背景颜色增加，故而会对检测线的定性、半定量及定量检测产生干扰。因此，提供一种可充分过滤红细胞并解决溶血干扰问题的NGAL全血免疫层析装置对NGAL临床快速检测有着重要意义。
发明内容针对现有胶体金全血检测技术的不足，本实用新型提供一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)全血胶体金免疫层析检测装置，其具有抗干扰能力强、简便快速、准确等特点。本实用新型可通过以下技术方案来实现一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，由上下扣合的壳体和置于其间的试纸条组成，其特征在于所述上壳体设有加样孔和观察窗；所述下壳体设有固定试纸条的卡槽；所述试纸条包括在底板上相互搭接的样品垫、包含血红蛋白抗体包被微球的血红蛋白吸附垫、金标垫、检测垫和吸水垫；所述血红蛋白吸附垫被样品垫完全覆盖；所述血红蛋白抗体包被微球填充于所述血红蛋白吸附垫内。所述样品垫右端与血红蛋白吸附垫右端上下对齐，保证样本沿垂直方向顺利快速通过血红蛋白吸附垫。所述样品垫主要由选自聚酯膜、玻璃纤维素膜、纤维素滤纸和无纺布中的一种或多种材料制成。在一些实施例中，所述样品塾还可吸附有血液抗凝剂。所述血红蛋白抗体包被的微球选自胶体金、胶体碳、胶体硒、磁微粒及聚苯乙烯微球中的一种或多种，优选聚苯乙烯微球。所述血红蛋白抗体与微球之间的连接可通过物理吸附或化学偶联方式进行，优选化学偶联方式。所述血红蛋白吸附垫还包括f 3层位于血红蛋白吸附垫底部的保护膜，所述保护膜的孔径小于所述微球的直径，保护膜的作用主要是固定微球，防止微球进入血红蛋白吸附垫以外的区域。所述保护膜主要由选自聚酯膜、玻璃纤维素膜、纤维素滤纸和无纺布中的一种或多种材料制成。所述金标垫可由玻璃纤维素膜或聚酯膜组成，其上涂覆有胶体金标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体。所述检测垫可由硝酸纤维素膜、聚偏氟乙烯膜或醋酸纤维素膜构成，所述检测垫的近金标垫一侧和近吸水垫一侧分别设置有检测线和质控线，所述检测线包被有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白捕获单克隆抗体或多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。所述吸水垫可用纤维素、玻璃纤维、多孔聚乙烯或多孔聚丙烯等材料制成。所述上壳体上还可包含一个信息槽，所述信息槽可用于存放信息卡，信息卡上可记载患者编号、检测结果和日期等信息，检测后可将其单独取出作为患者资料保存。所述上下壳体材料由不吸水的塑料制成，包括人工合成或自然界有机材料，如聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚酯或纤维素及其衍生物等，或使用一种塑料材料或使用几种塑料材料在物理上的叠加或相加后的复合。本实用新型的检测原理具体为将全血样本滴加于加样孔中，样品垫可起过滤血液中红细胞的作用，过滤后的血液流入血红蛋白吸附垫,血红蛋白吸附垫可进一步过滤血液并吸附血液中可能因红细胞破裂而产生的血红蛋白，血液继续层析至金标垫与胶体金标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体特异性结合，最后到达检测垫与相应的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白捕获单克隆抗体或多克隆抗体结合。通过检测垫处形成的胶体金-抗体-NGAL-抗体复合物与样本中NGAL浓度成正比实现对NGAL的定性、半定量或定量检测。本实用新型的有益效果主要体现在:1、可消除全血检测发生溶血现象时对NGAL检测结果造成的影响，血红蛋白吸附垫可吸附因红细胞破裂产生的血红蛋白，避免其展层至检测垫，增加背景颜色，影响检验人员对检测条带的颜色判断以及仪器对检测条带的信号扫描。2、具有分离效果稳定，操作简单，样本用量少和检测迅速等优点。
图1为本实用新型的上壳体结构示意图；图2为本实用新型的下壳体结构示意图；图3为本实用新型的试纸条结构示意图；图4为本实用新型的检测显色示意图。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步详细描述:实施例1中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)全血检测装置的结构参见图1、图2和图3所不，中性粒细胞明I父酶相关脂质运载蛋白(NGAL)全血检测装置由上壳体(I)、下壳体(2)和试纸条(3)组成，上壳体(I)和下壳体(2)可紧密扣合，其中上壳体(I)设置有加样孔(4)、观察窗(5)和信息槽(6)，加样孔(4)为椭圆形漏斗状，对应于试纸条(3)的样品垫(7)，有向下倾斜的斜面，可防止血液的溢出；观察窗(5)对应于试纸条(3)的检测垫(8);信息槽(6)镶嵌有患者信息卡，上面有患者编号、结果及日期等信息，患者信息卡可单独取出作为患者资料保存。下壳体(2)中设置有与试纸条(3)形状大小匹配的卡槽(9)，便于固定试纸条(3)。上述上壳体(I)和下壳体(2)由防水PVC材料制成。试纸条(3)包括自左向右依次搭接粘贴在底板(10)上的样品垫(7)、血红蛋白吸附垫(11)、金标垫(12)、检测垫(8)和吸水垫(13)。其中，底板(10)由PVC板构成；样品垫(7)由玻璃纤维素膜组成，样品垫上吸附有血液抗凝剂；血红蛋白吸附垫(11)位于样品垫
(7)下面，被样品垫(7)完全覆盖，且其右端与样品垫(7)右端对齐，所述血红蛋白吸附垫
(11)包含填充于吸附垫内的血红蛋白抗体包被的微球，在血红蛋白吸附垫(11)的最下面有一层孔径小于微球直径的保护膜；金标垫(12)由聚酯膜组成，上面涂覆有胶体金标记的NGAL单克隆抗体，所述金标垫(12)的左侧与血红蛋白吸附垫(11)的右侧搭接粘贴，两区域重叠长度为Imm ;检测垫(8)由硝酸纤维膜构成，检测垫近金标垫(12)—侧和近吸水垫(13)一侧分别设有一条检测线和一条质控线，所述检测线包被有NGAL多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体；吸水垫(13)由纤维素滤纸组成，其左侧与检测垫(8)的右侧相互搭接粘结。实施例2中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)全血检测装置的使用方法将待检全血样本120μ I直接加入加样孔处，血液经虹吸作用沿样品垫、血红蛋白吸附垫，金标垫、检测垫向吸水垫方向移动，15分钟内读取检测结果(见图4)。定性检测阳性T线和C线处各出现一条紫红色条带；阴性仅在C线处出现一条紫红色条带；无效无论样本中含或不含NGAL，金标垫处的胶体金标记的单克隆抗体都会上行至检测垫与C线处的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，在C线处出现一条紫红色条带，如不出现，则结果无效，需重新检测。定量检测将检测装置置于胶体金定量检测仪中，仪器通过对检测区进行扫描，收集T线、C线信号强度，最终转换、计算出样本中NGAL的浓度，实现定量检测。最后应说明的是以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
权利要求1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，由上下扣合的壳体和置于其间的试纸条组成，其特征在于:所述上壳体设有加样孔和观察窗；所述下壳体设有固定试纸条的卡槽；所述试纸条包括在底板上相互搭接的样品垫、包含血红蛋白抗体包被微球的血红蛋白吸附垫、金标垫、检测垫和吸水垫；所述血红蛋白吸附垫被样品垫完全覆盖；所述血红蛋白抗体包被微球填充于所述血红蛋白吸附垫内。
2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，其特征在于，所述样品垫右端与血红蛋白吸附垫右端上下对齐。
3.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，其特征在于，所述血红蛋白抗体包被的微球选自胶体金、胶体碳、胶体硒、磁微粒及聚苯乙烯微球中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，其特征在于，所述血红蛋白吸附垫还包括I 3层位于血红蛋白吸附垫底部的保护膜。
5.根据权利要求4所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，其特征在于，所述保护膜的孔径小于所述微球的直径。
6.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，其特征在于，所述金标垫涂覆有胶体金标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，所述检测垫的近金标垫一侧和近吸水垫一侧分别设置有检测线和质控线，所述检测线包被有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白捕获单克隆抗体或多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体 。
专利摘要本实用新型涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血检测装置，由上下扣合的壳体和置于其间的试纸条组成，所述上壳体设有加样孔和观察窗；所述下壳体设有固定试纸条的卡槽；所述试纸条包括在底板上相互搭接的样品垫、包含血红蛋白抗体包被微球的血红蛋白吸附垫、金标垫、检测垫和吸水垫；所述血红蛋白吸附垫被样品垫完全覆盖；所述血红蛋白抗体包被微球填充于所述血红蛋白吸附垫内。本实用新型可消除全血检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白发生溶血现象时对结果造成的干扰，有利于医生对患者病情的准确判断。
文档编号G01N33/68GK202916284SQ201220592290
公开日2013年5月1日 申请日期2012年11月12日 优先权日2012年11月12日
发明者何仕钊 申请人:南京诺尔曼生物技术有限公司