专利名称：跌打片中成药多组分含量的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及中药质量检测领域，具体涉及一种跌打片中成药多组分含量的快速检测方法。
背景技术：
跌打片是由三七、当归、白芍、赤芍、桃仁、红花、血竭、北刘寄奴、骨碎补、续断、苏木、牡丹皮、乳香、没药、姜黄、三棱、防风、甜瓜子、枳实、桔梗、甘草膏、关木通、自然铜、土鳖虫共24味中药饮片组成的大处方中药制剂。主要功效是活血化瘀，消肿止痛。用于跌打损伤，筋断骨折，瘀血肿痛，闪腰岔气。其制备方法是将三七、当归、血竭、红花、赤芍、白芍、乳香、没药、牡丹皮、续断、自然铜、姜黄、桔梗、防风、枳实粉碎成细粉；三棱、苏木、甜瓜子、桃仁、骨碎补、土鳖虫、关木通、北刘寄奴用水提取，水提液与化开的甘草膏浓缩成膏，浓缩膏加入三七等药物细粉及药用辅料制成包糖衣片剂。其中续断是组方中的君药，具有补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏的功能。川续断皂苷VI是续断药材含量测定的指标性成分。文献如谭洪根等(中国中药杂志.31(9):726-727,739) “高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷VI的含量”和彭键(中南药学.10 (I):25-28) “高效液相色谱法测定跌打丸中川续断皂苷VI的含量”都采用了高效液相色谱-紫外检测器法测定川续断皂苷VI的含量，均以川续断皂苷VI的含量作为续断药材质量优劣的一个指标。三七为组方中的臣药，亦为贵细药，具有散瘀止血，消肿定痛的功能。而衡量三七药材质量优劣的指标性成分为三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1,如《中国药典》2010年版一部三七项下采用了高效液相色谱-紫外检测器法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量，以这3种成分的含量作为判定三七药材质量优劣的指标。白芍、赤芍、牡丹皮、枳实、骨碎补为组方中的佐药，可以加强君、臣药的治疗作用，亦可解除次要的兼证，为组方中不可缺少的部分。白芍、赤芍和牡丹皮中的芍药苷；枳实、骨碎补中的柚皮苷；枳实中的橙皮苷、新橙皮苷的含量是衡量白芍、赤芍、牡丹皮、枳实、骨碎补药材质量的参考性指标。作为跌打片组方中的君药续断，臣药三七，以及佐药白芍、赤芍、牡丹皮、枳实、骨碎补中所含的芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、川续断皂苷V1、人参皂苷Rb1这8种成分的紫外检测波长是不完全相同的，而高效液相色谱-紫外检测器只能对检测波长相同的成分同时进行检测，对检测波长不同的成分需分次进行检测，需要消耗大量的时间和试剂。而且，这8种成分中检测波长相同的仅有三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1共3种成分，即使采用高效液相色谱-紫外检测器同时检测这3种成分，也只能利用其在紫外区的末端吸收进行测定，检测波长为203nm，检测灵敏度相对较低，检测结果准确度较差。目前跌打片成药尚无有效控制其质量的检测方法，仅依靠显微镜对成药中的部分药味进行显微检测，或对成药中的某I种成分或2种检测波长相同的成分采用高效液相色谱-紫外检测器法进行含量测定，来片面地反映跌打片中成药的质量，如王瑾等(中国药师.15 (5):678-679)采用高效液相色谱-紫外检测器法测定跌打片中芍药苷的含量，一次性测定I种成分。王亮等(中国药师.12 (5):349-351)测定跌打片中的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量，一次性仅能测定2种检测波长相同的成分。其检测对跌打片的质量可控性差，不能全面有效地衡量跌打片质量的优劣。显然检验效率高、定量准确的检测方法，以满足中成药多组分含量的质量可控的快速检测是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种跌打片中成药多组分含量的快速检测方法，一次性地快速检测出中成药跌打片的8种成分，以弥补现有技术的不足。本发明运用中医药理论，对跌打片的组方进行了研究分析。方中续断为组方中首要的、针对主病起主要治疗作用的君药，三七为辅助君药加强治疗主病的臣药，白芍、赤芍、牡丹皮、枳实、骨碎补为作用比君药、臣药稍弱的佐药。按照中药君、臣、佐、使组方原则，依照药味作用主次而选择了可以较全面地反映跌打片成药的质量的君、臣、佐药的8种指标性成分进行检测。又，跌打片是一个大处方中药制剂，组方药味多，化学成分十分复杂，测定时杂质极易干扰所需要测定的指标性成分，且各指标性成分之间也会产生相互干扰。研究发现，续断中的川续断皂苷VI;三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1 ;白芍、赤芍和牡丹皮中的芍药苷；枳实、骨碎补中的柚皮苷；枳实中的橙皮苷、新橙皮苷均有溶于甲醇的性质，利用该性质，考虑到采用甲醇超声提取法，能有效地将这8种成分提取出来，既能避免组方中乳香、没药等胶质成分的溶出，又可减少杂质对测定的干扰，且操作简便。又考虑到蒸发光散射检测器虽属于通用型检测器，但是其检测成分无需具有光吸收特性，散射光强度依赖于所测成分粒子的大小，形状和质量，可以同时测定多种挥发性低于流动相的成分，能够实现对于跌打片中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等具有末端吸收的成分准确定量，从而避开了紫外检测器在测定具有末端吸收的成分时只能选择在检测灵敏度相对较低，检测结果准确度相对较差的203nm波长处。从而解决了跌打片成药因组方大，成分复杂所导致的干扰多的问题，并同时检测出跌打片中多种成分，达到了更全面、更准确地控制跌打片中成药质量的目的。本发明的技术方案如下(I)对照品溶液的制备:分别取芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、三七皂苷札、人参皂苷Rgl、川续断皂苷V1、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含芍药苷150 μ g、柚皮苷100 μ g、橙皮苷50 μ g、新橙皮苷200 μ g、三七皂苷RjO μ g、人参皂苷RgjO μ g、川续断皂苷VI 100 μ g和人参皂苷RbjO μ g的混合溶液作为对照品溶液。(2)供试品溶液的制备:取跌打片成品20片，除去糖衣，精密称定总重，研细，精密称定粉末lg，置25ml量瓶中，加甲醇15ml，超声处理(功率300W，频率40KHz)30分钟，放冷至室温，加甲醇定容至25ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。(3)含量测定方法:分别精密吸取对照品溶液5 μ 1、10 μ 1，供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪进行测定，用外标两点法对数方程计算跌打片中8种组分的含量。显然，本发明既解决了跌打片成药因组方大，成分复杂所导致的提取并测定芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、川续断皂苷V1、人参皂苷Rb1这8种成分时干扰多的问题，也避免了对这8种成分必须多次进行检测所产生的耗费时间和试齐U，以及定量检测不准确的问题，方法操作简便，大大地提高了工作效率和精度，可以更全面、更有效地控制中成药跌打片的质量。
图1:本发明的跌打片8种成分的对照品混合溶液的HPLC-ELSD色谱图。图2:本发明的跌打片样品溶液的HPLC-ELSD色谱图。图3:本发明的跌打片阴性样品溶液的HPLC-ELSD色谱图。
具体实施例方式下面给出详细的实施例。本发明采用:仪器与试药:Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪；AlltechELSD2000ES蒸发光散射检测器；Sartoris BP211D电子天平；乙腈为色谱用试剂，其它试剂均为分析纯；芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110736-201136)、柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110722-201111)、橙皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号=110721-200613)、新橙皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:111857-201102)、三七皂苷R1对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110745_200617)、人参皂苷Rg1对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110703-201027 )、川续断皂苷VI对照品(中国食品药品检定研究院，批号:111685-201003 )、人参皂苷Rb1对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110704-201122)。色谱条件:色谱柱:PhenomenexKinetex, C18,100 X 4.6mm, 2.6 μ m ;以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温:30°C;流速:0.5ml/min ;蒸发光散射检测器漂移管温度:110°C，空气流速:3.0L/min。理论板数按川续断皂苷VI峰计算应不低于 10000。
权利要求
1.一种跌打片中成药多组分含量的快速检测方法，包括以下步骤: (1)对照品溶液的制备:分别取芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、川续断皂苷V1、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含芍药苷150 μ g、柚皮苷100 μ g、橙皮苷50 μ g、新橙皮苷200 μ g、三七皂苷RjO μ g、人参皂苷RgjO μ g、川续断皂苷VI 100 μ g和人参皂苷RbjO μ g的混合溶液作为对照品溶液； (2)供试品溶液的制备:取跌打片成品20片，除去糖衣，精密称定总重，研细，精密称定粉末lg，置25ml量瓶中，加甲醇15ml，超声处理30分钟，放冷至室温，加甲醇定容至25ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液； (3)测定:分别精密吸取对照品溶液5μ 1、10 μ 1，供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪进行测定，用外标两点法对数方程计算跌打片中8种组分的含量。
2.如权利要求1所述的跌打片中成药多组分含量的快速检测方法，其特征是上述高效液相色谱仪的设定条件:Phenomenex Kinetex, C18,100 X 4.6mm, 2.6 μ m色谱柱；以乙腈为流动相A，水为流动相B，A+B=100% ;梯度洗脱:0 15min，0%A — 19%A ；15 35 min，19%A — 30%A ；35 50 min ；30%A — 40%A ；50 55 min，40%A — 60%A ；55 60 min,60%A — 0%A ;流速为 0.5ml/min ;柱温为 30°C。
3.如权利要求1所述的跌打片中成药多组分含量的快速检测方法，其特征是上述Alltech ELSD2000ES蒸发光散射检测器检测的参数:漂移管温度为110°C，空气流速为3.0L/mino
4.如权利要求1所述的跌打片中成药多组分含量的快速检测方法，其特征是上述的超声处理条件为功率300W，频率40KHz。
全文摘要
本发明涉及一种跌打片中成药多组分含量的快速检测方法。采用甲醇超声提取，应用HPLC-ELSD法一次性同时测定中成药跌打片中君药续断、臣药三七、佐药白芍、赤芍、牡丹皮、枳实、骨碎补中的芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、川续断皂苷Ⅵ、人参皂苷Rb1这8种成分的含量。本发明既解决了跌打片成药因组方大，成分复杂所导致的提取并测定这8种成分时干扰多的问题，也避免了对这8种成分必须多次进行检测所产生的耗费时间和试剂，以及定量检测不准确的问题。本发明方法操作简便，大大地提高了工作效率和精度，有望成为跌打片中成药质量控制的标准方法。
文档编号G01N30/02GK103149290SQ201310052659
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月18日 优先权日2013年2月18日
发明者张春辉, 吴爱英, 李新荣, 楚敏 申请人:青岛市药品检验所