免疫层析用装置制造方法
【专利摘要】提供一种高定量性的免疫层析用装置。该免疫层析用装置形成为，包含玻璃板，该玻璃板具有：用于将含有抗原的样品向所述装置添加的样品添加部，用于将由样品添加部添加的样品从装置中回收的样品回收部，用于使样品从样品添加部移动至样品回收部的展开部，以及存在于展开部中、用于承载与抗原结合的抗体的抗体承载部；展开部含有透明板，玻璃板和透明板之间具有可以使样品利用毛细现象在展开部中移动的间隔而平行地设置。
【专利说明】免疫层析用装置
[0001]【技术领域】
本发明涉及一种免疫层析(immunochromatography )用装置。
[0002]【背景技术】
当前，免疫层析法作为流感病毒等的抗原检查工具而广泛使用(例如参照专利文献I )。其中，硝化纤维素或玻璃纤维滤纸等用作为样品的载体(例如参照专利文献I)。
[0003]专利文献1:日本特愿2009 - 159020公开公报。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种高定量性的免疫层析用装置。
[0005]本发明的一个实施方式提供一种免疫层析用装置，其包含玻璃板，该玻璃板具有:样品添加部，其用于将含有抗原的样品向所述装置添加；样品回收部，其用于将由所述样品添加部添加的样品从装置中回收；展开部，其用于使所述样品从所述样品添加部移动至所述样品回收部；以及抗体承载部，其存在于所述展开部中，用于承载与所述抗原结合的抗体；所述展开部含有透明板，所述玻璃板和所述透明板之间具有可以使样品利用毛细现象在所述展开部中移动的间隔而平行地设置。优选所述间隔为3?50 μ m。另外，优选所述玻璃板中的所述展开部或所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成。并且，优选所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度为0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度为0.1 一 150.0 μ m，凸出的间隔为 10 — 2000 μ m。
[0006]或者，优选在所述透明板中，与所述玻璃板中的所述展开部及/或所述抗体承载部的表面粗糙的玻璃相对的部分由表面粗糙的玻璃构成。并且，优选所述玻璃板和所述透明板中的所述展开部及所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成，不存在用于保持所述玻璃板和所述透明板之间的间隔的分隔件。
[0007]本发明的另一实施方式为一种用于使用免疫层析用装置检测样品中的抗原的检测方法，所述装置包含玻璃板，该玻璃板具有:样品添加部，其用于将所述样品向所述装置添加；样品回收部，其用于将由所述样品添加部添加的样品从装置中回收；展开部，其用于使所述样品从所述样品添加部移动至所述样品回收部；以及抗体承载部，其存在于所述展开部中，用于与所述抗原结合；所述展开部含有透明板，该透明板与所述玻璃板平行地设置，两者之间具有可以使所述样品利用毛细现象在所述展开部中移动的间隔；所述检测方法包含下述工序，即:将所述样品向所述样品添加部添加并在所述展开部中展开的工序；由所述样品回收部将在所述展开部中展开的所述样品进行回收的工序；以及检测与所述抗体承载部结合的所述抗原的工序，所述展开部或所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成，所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度为0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度为0.1 一150.0 μ m，凸出的间隔为10 — 2000 μ m。
[0008]发明的效果
根据本发明，可以提供一种高定量性的免疫层析用装置。【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1是本发明的一个实施方式的免疫层析用装置的示意图。
[0010]图2是本发明的一个实施方式的免疫层析用装置的构成部件的示意图。
[0011]图3是表示使用本发明的一个实施方式的免疫层析用装置进行的免疫层析法的流程的图。
[0012]图4是本发明的其它实施方式的免疫层析用装置的示意图。
[0013]图5是本发明的一个实施方式中，没有分隔件而将两片玻璃直接贴合的免疫层析用装置的示意图。
[0014]图6是表示本发明的一个实施例中，使用本发明的免疫层析芯片进行的免疫层析的结果的曲线图。
[0015]标号的说明
10免疫层析用装置 11样品添加部 12样品回收部 13展开部 14抗体承载部 15玻璃板 16透明板 17分隔件 18液体吸收体 19器具
20阳性对比部。
[0016]【具体实施方式】
本发明的目的、特征、益处及其构思都可以通过本说明书的记载而使本领域的技术人员了解，根据本说明书的记载，本领域的技术人员可以容易地再现本发明。下面记载的发明的实施方式及具体实施例等仅示出本发明的优选实施方式，是用于进行例示或说明的，并不由此限定本发明。本领域的技术人员明确地是，可以在本说明书所公开的本发明的意图及范围内，基于本说明书的记载而进行各种改变及修饰。
[0017]==免疫层析用装置==
本发明的免疫层析用装置10具有玻璃板15，该玻璃板15包含:(I)用于将含有抗原的样品向装置10添加的样品添加部11，(2)用于将添加到样品添加部11中的样品从装置10中回收的样品回收部12，(3)用于使样品从样品添加部11移动至样品回收部12的展开部13，(4)存在于展开部13中、用于承载与样品的抗原结合的抗体的抗体承载部14。另外，在利用夹心法检测样品中的抗原的情况下(方法的详细内容在后面记述)，也可以具有(5)存在于展开部中、用于承载对抗原的标记抗体进行识别的2次抗体的阳性对比部20。图1示出装置的一个实施方式。
[0018]该玻璃板15可以是表面光滑的玻璃也可以是表面粗糙的玻璃，但优选玻璃板15的展开部13及抗体承载部14由表面粗糙的玻璃构成。优选该表面粗糙的玻璃的平均粗糙度(Ra)为0.01 — 20.0 μ m，更优选为0.05 一 10.0 μ m，进一步优选为0.1 一 Ιμπι，进一步优选为0.2 — 0.3 μ m，特别优选为0.226 一 0.252 μ m。另外，该表面粗糙的玻璃的凸出的最大深度(Rz)优选为0.1 - 150.0 μ m，更优选为0.5 — 100.0 μ m，进一步优选为1.0 —10.0 μ m，进一步优选为2.0 — 3.0 μ m，特别优选为2.19 - 2.70 μ m。另外，该表面粗糙的玻璃的凸出的间隔(Sm)优选为10 - 2000 μ m,更优选为30 — 1000 μ m,进一步优选为50 —500 μ m，进一步优选为100 - 200 μ m，特别优选为165 — 179 μ m。此外，平均粗糙度(Ra)、最大深度(Rz)、凸出的间隔(Sm)都使用在JIS B0601中规定的定义。如上所述，通过使抗体承载部14形成为表面粗糙的玻璃，从而可以增加能够承载的抗体的量。另外，在将抗体承载部14形成为表面粗糙的玻璃的情况下，如果展开部13也形成为表面粗糙的玻璃，就会比较容易制造。
[0019]展开部具有透明板16，玻璃板15和透明板16之间具有可以使样品利用毛细现象导入展开部中的间隔而平行地设置。该玻璃板15和透明板16之间也可以利用分隔件等保持间隔，但也可以使展开部从板的表面凹下而由此保持间隔。在后者的情况下，并不特别需要分隔件。玻璃板15和透明板16之间的间隔只要可以使样品利用毛细现象在展开部中移动即可，并不特别限定，可以是I?100 μ m,优选为3?50 μ m,最优选为5?30 μ m。透明板16只要是可以用于免疫层析的板即可，其材料并不特别限定，例如可以是玻璃板，也可以是丙烯板或聚丙烯板等塑料板。在这里，所谓“透明板”不仅是在干燥状态下透明的板，也包括在进行免疫层析法时、例如在展开部13被缓冲液浸湿时变得透明的板，具体地说，还包括表面粗糙的玻璃或表面粗糙的塑料。在透明板16为玻璃板的情况下，可以是表面光滑的玻璃也可以是表面粗糙的玻璃，但优选展开部13为表面粗糙的玻璃。另外，玻璃板15和透明板16之间可以分离，也可以直接或经由分隔件等间接粘接。
[0020]该装置10也可以具有用于保持玻璃板15和透明板16之间的间隔的分隔件17。分隔件17的厚度与玻璃板15和透明板16之间的间隔相同，可以是I?100 μ m，优选为3?50 μ m,最优选为5?30 μ m。分隔件17的材料并不特别限定，但优选为丙烯等塑料、玻璃等可以以加工至与玻璃板15和透明板16能够紧密接触的材料。另外，这里所谓的分隔件17只要可以在展开部13中确保玻璃板15和透明板16的间隔即可，形状并不特别限定，可以是正方体或长方体等以板状或线状的形状与玻璃板15或透明板16在较大区域内粘接的形状，也可以是前端形成为尖端而以点状与玻璃板15或透明板16粘接的形状。分隔件17的数量也并不特别限定，可以与其形状对应而适当地决定。另外，也可以在玻璃板15或透明板16的表面涂覆树脂或油墨等，也可以进行印刷。并且，优选玻璃板15、透明板16和配置在展开部的左右两侧的分隔件17以使得流过展开部13的样品不会从展开部13脱落而漏出的方式紧密结合。玻璃板15、透明板16及分隔件17可以分别利用粘接剂等粘接，也可以利用夹具等压接。
[0021]在玻璃板15和透明板16的展开部13这两者都是通过对表面光滑的玻璃切削而制作成的表面粗糙的玻璃的情况下，则如图5所示，通过使玻璃板15及透明板16的、夹着展开部13的左右两侧形成光滑面，无需分隔件而将两片玻璃直接贴合，从而可以制作装置
10。通过将表面光滑的玻璃彼此贴合，从而在表面粗糙的部分的贴合位置处，产生可以使样品利用毛细现象而在展开部13中移动的间隔，利用该两侧的表面光滑的玻璃可以抑制样品漏出。在此情况下，构成透明板16的表面粗糙的玻璃也可以适用与针对玻璃板15记述的条件相同的表面粗糙的玻璃条件。[0022]==免疫层析法==
使用上述免疫层析用装置10的免疫层析法可以是竞争法、夹心法等，并不特别限定，作为一个例子，下面记述夹心法。
[0023]首先，在玻璃板15的抗体承载部14中，将用于与样品中含有的抗原直接或间接结合的抗体固相化。该固相化方法并不特别限定，可以利用硅烷耦合法，硅生物法(日本特愿2006 - 135572号发明专利申请)等，本领域技术人员公知的方法进行固相化。然后，设置分隔件17及透明板16等而组装装置10 (图2)。
[0024]另一方面，将包含作为调查对象的抗原的样品，与针对该抗原的标记抗体进行混合。标记并不特别限定，可以使用例如酶、胶体金、胶体钼-金、荧光色素等。将含有标记抗体以及与标记抗体结合后的抗原的样品，向第I玻璃板15上的样品添加部11中添加，将样品导入展开部13 (图3A)。该导入可以利用移液器(pipetman)或微型吸管等器具19直接进行，也可以通过样品垫等进行。另外，也可以替代针对抗原的标记抗体而使用针对抗原的I次抗体及针对I次抗体的标记2次抗体。另外，在抗体承载部14上固相化的抗体可以是直接与抗原结合的抗体，也可是特异性识别针对抗原的I次抗体、从而间接与抗原结合的2次抗体。如上所述，这些技术的应用技术存在很多，它们都落在本发明的技术范围内。
[0025]然后，导入展开部13中的样品利用毛细现象而在展开部13展开并移动，越过抗体承载部14而到达样品回收部12 (图3B)。因此，从样品回收部12回收样品，可以是全部回收，也可以是在展开部13中残留一部分样品。如果残留物会成为测量的障碍，也可以在通过样品后，仅通过不含有胶体金的缓冲液，对展开部13进行清洗。回收的方法并不特别限定，可以利用移液器或微型吸管等进行回收，也可以在样品回收部12处放置样品垫或海绵、滤纸等液体吸收体18，从而使样品浸入而进行回收(图3C、图4)。
[0026]在该作业时，为了提高定量性，优选以使得样品全部通过抗体承载部14的方式将抗体固相化。例如，在展开部13为密封的通路状，其入口和出口分别设置样品添加部11和样品回收部12的情况下，以横穿通路的方式承载抗体，则如果样品通过通路，就必然通过所承载的抗体上，由此，可以最大限度的灵活应用抗体承载部14的抗原结合活性，可以尽可能多地回收抗原。相同地，在设置阳性对比部20的情况下，也为了最大限度地发挥其效果，而优选在抗体承载部14和样品回收部12之间，以横穿通路的方式承载针对标记抗体的抗体。
[0027]然后，只要检测与抗体承载部14结合的抗原即可，但如上所述使用了针对其抗原的标记抗体的情况下，只要对抗体承载部14上捕获的标记抗体以标记为指标进行检测即可。例如在标记为酶的情况下，可以与样品相同地将基质溶液在展开部13中展开，与酶发生反应而显色，在标记为荧光素酶等的情况下，通过相同地施加虫荧光素等基质，就可以发光。另外,在突光黄(fluorescein)等的突光素的情况下,可以通过激发而使其放出突光。在装置10具有阳性对比部20的情况下，将样品中混合的标记抗体与阳性对比部20的抗体结合，从而阳性对比部20也显色或发光。
[0028]最后，利用标记而显色的检测方法并没有特别限定，可以利用玻璃板15及透明板16的透明性，利用透射光检测标记的显色。例如，可以将适当选择的波长的光从上部向抗体承载部照射，通过对透射光的量进行分析而对信号强度进行定量。另外，可以在对色箱上放置显色后的装置10，将利用ccd照相机拍摄的数字照片利用分析软件对信号的浓度进行定量。或者，也可以在白纸上放置显色后的装置，对反射光进行检测。为了精确地进行定量，优选绘制每次检测量的变化曲线，但通过尽可能使条件恒定，则可以根据信号的浓度直接计算出抗原的浓度。
[0029]【实施例】
(1)免疫层析芯片的制作
一边搅拌99mL的水一边加入0.5mL的醋酸,并且滴入0.5mL的3_Glycidyloxypropyl-trimethoxysilane,在室温下搅拌I个小时。在该溶液中以室温浸溃一晚5mmX25mm的单面粗糙的玻璃板或表面光滑的玻璃板。然后，用水清洗玻璃板并风干，以115°C加热5分钟，使玻璃表面活性化。所使用的表面粗糙的玻璃板的特征如下述表1所示。
[0030]【表1】
【权利要求】
1.一种免疫层析用装置，其特征在于， 包含玻璃板，该玻璃板具有: 样品添加部，其用于将含有抗原的样品向所述装置添加； 样品回收部，其用于将由所述样品添加部添加的样品从装置中回收； 展开部，其用于使所述样品从所述样品添加部移动至所述样品回收部；以及 抗体承载部，其存在于所述展开部中，用于承载与所述抗原结合的抗体， 所述展开部含有透明板， 所述玻璃板和所述透明板之间具有可以使样品利用毛细现象在所述展开部中移动的间隔而平行地设置。
2.根据权利要求1所述的免疫层析用装置，其特征在于， 所述间隔为3?50 μ m。
3.根据权利要求1或2所述的免疫层析用装置，其特征在于， 所述玻璃板中的所述展开部或所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成。
4.根据权利要求3所述的免疫层析用装置，其特征在于， 所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度为0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度为0.1 一150.0 μ m，凸出的间隔为10 — 2000 μ m。
5.根据权利要求3或4所述的免疫层析用装置，其特征在于， 在所述透明板中，与所述玻璃板中的所述展开部及/或所述抗体承载部的表面粗糙的玻璃相对的部分由表面粗糙的玻璃构成。
6.根据权利要求5所述的免疫层析用装置，其特征在于， 所述玻璃板和所述透明板中的所述展开部及所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成，不存在用于保持所述玻璃板和所述透明板之间的间隔的分隔件。
7.—种检测方法，其是用于使用免疫层析用装置检测样品中的抗原的检测方法，该检测方法的特征在于， 所述装置包含玻璃板，该玻璃板具有: 样品添加部，其用于将所述样品向所述装置添加； 样品回收部，其用于将由所述样品添加部添加的样品从装置中回收； 展开部，其用于使所述样品从所述样品添加部移动至所述样品回收部；以及 抗体承载部，其存在于所述展开部中，用于与所述抗原结合， 所述展开部含有透明板，该透明板与所述玻璃板平行地设置，两者之间具有可以使所述样品利用毛细现象在所述展开部中移动的间隔， 所述检测方法包含下述工序，即: 将所述样品向所述样品添加部添加并在所述展开部中展开的工序； 由所述样品回收部将在所述展开部中展开的所述样品进行回收的工序；以及 检测与所述抗体承载部结合的所述抗原的工序， 所述展开部或所述抗体承载部由表面粗糙的玻璃构成，所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度为0.01 — 20.0 μ m，凸出的最大深度为0.1 — 150.0 μ m，凸出的间隔为10 — 2000 μ m。
【文档编号】G01N33/558GK103630680SQ201310366481
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年8月21日 优先权日:2012年8月22日
【发明者】本庄勉 申请人:森永制果株式会社