盐酸溴己新葡萄糖注射液的中间体或成品的检测方法
【专利摘要】本发明提供了盐酸溴己新葡萄糖注射液中有关物质的检测方法。本发明有关物质检测方法经由大量试验数据对比发现，本产品有关物质按原国家标准（标准号YBH10902004）中流动相试验检出的杂质峰有2个，而按本方法可检出4个明显的杂质峰，更能真切的反映内在有关物质的真实水平，确保产品有更为优异的质量。
【专利说明】盐酸溴己新葡萄糖注射液的中间体或成品的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及盐酸溴己新葡萄糖注射液的中间体或成品的检测方法。
【背景技术】
[0002]盐酸溴己新葡萄糖注射液适用于慢性支气管炎及其他呼吸道疾病如哮喘、支气管扩张、矽肺等有粘痰而不易咳出者、脓性痰患者需加用抗生素控制感染，术后肺部并发症的预防治疗，术前呼吸道的廓清、早产儿、新生儿及婴儿呼吸窘迫综合症(IRDS)的治疗，目前已广泛应用于临床，通过这几年来的生产和质检，发现由于原料药质量、技术要求、人员素质的波动等因素的影响，容易造成产品批次间的差异(超警戒限、超法定限、数据偏差大等因素)，难以保证盐酸溴己新葡萄糖注射液的质量稳定在最佳状态，因此，建立一套高质量的产品质量控制方法，对保证该产品的优化升级显得尤为必要。
[0003]然而，本产品有关物质按原国家标准(标准号YBH10902004)中流动相试验检出的杂质峰仅有2个，不利于对产品中有关物质量的控制。另外，据国家新版GMP相关技术要求，药液从配制完成到开灌时间不得超过2个小时。这就要求在2小时内完成半成品质量的检验，合格后才可开灌并生产。目前中间体含量控制采用高效液相色谱法检测中间体盐酸溴己新含量，存在以下问题:1、主峰保留时间约12min，正常情况下按一批时间算，对照品六针样品四针总共完成要耗时约2h，如需再复测含量时间就没有，不利于保证在线中间体质量控制，日产按8批算要IOh以上，这与新制定的该产品生产工艺规程(SMP)有背离。并且仪器基本上是24h连续运行，晚班另外安排分析员2人轮流加班到第二天白班，夜以继日上机；2、盐酸溴已新葡萄糖注射液由于产量较大(每月均要生产15天左右，日计划生产7?8批次，3.5万瓶/批)，测试方法中流动相为消耗大，以lml/min的流速运行，按每周生产需要配制流动相15000ml计算需要消耗4200ml的色谱乙腈,按市价60元/瓶(500ml)计算为504元，生产二周需要耗资1008元；3、由于检验用到HPLC仪器检测占用时间长，不利于其他四条生产线品种相应的检测，容易影响正常生产。
【发明内容】
[0004]针对上述问题，本发明的目的在于提供一种盐酸溴己新葡萄糖注射液中有关物质的检测方法。本发明的另一目的在于提供一种盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体或成品的检测方法。
[0005]本发明提供了盐酸溴己新葡萄糖注射液中有关物质的检测方法，它是采用HPLC进行检测的，包括如下操作步骤:
[0006](I)取待测酸溴己新葡萄糖注射液，溶解或/和稀释，制备供试品溶液；
[0007](2)取供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在下述色谱条件下检测；
[0008]色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
[0009]检测波长:249nm；
[0010]流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液=28:72，所述磷酸盐缓冲液由如下方法制备:0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1 % v/v三乙胺溶液，用冰醋酸调节pH为3.3 ;
[0011](3)根据步骤(2)的检测结果，计算有关物质含量即可。
[0012]进一步地，步骤(I)中，溶解或/和稀释所用溶剂为步骤(2)的流动相。
[0013]进一步地，所述色谱柱的尺寸为250X4.60mm，5 μ m。
[0014]优选地，所述色谱柱选自AIItima?C18, 250 X 4.60mm5 μ m。
[0015]进一步地，柱温为30°C，流动相流速为1.0ml/min。
[0016]本发明有关物质检测方法经由大量试验数据对比发现，本产品有关物质按原国家标准(标准号YBH10902004)中流动相试验检出的杂质峰有2个，而按本方法可检出4个明显的杂质峰，更能真切的反映内在有关物质的真实水平，确保产品有更为优异的质量。
[0017]本发明还提供了盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体和成品的检测方法，其中，所述中间体采用紫外分光光度法进行检测，它包括如下操作步骤:
[0018]A、取待测盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体，以葡萄糖溶液稀释，制备得到中间体供试品溶液；
[0019]B、取盐酸溴己新对照品，加入95% (v/v)乙醇溶解后，再用葡萄糖溶液稀释，制备得到对照品溶液；
[0020]C、以葡萄糖溶液为空白对照，分别取中间体供试品溶液、对照品溶液，在294nm下进行检测，采用外标法计算中间体供试品溶液中盐酸溴己新含量即可；
[0021]所述成品采用HPLC进行检测，包括如下操作步骤:
[0022](I)取待测酸溴己新葡萄糖注射液成品，溶解或/和稀释，制备成品供试品溶液；
[0023](2)取成品供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在下述色谱条件下检测即可；
[0024]色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
[0025]检测波长:249nm；
[0026]流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液=28:72，所述磷酸盐缓冲液由如下方法制备:
0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸调节pH为3.3。
[0027]本发明研究发现，在紫外分光光度法检测中，使用95%乙醇溶解对照品后再用5%葡萄糖溶液稀释操作，其检测数据稳定，结果理想。
[0028]进一步地，步骤A?C中，所述葡萄糖溶液浓度均为5% (g/ml)。
[0029]进一步地，步骤B中，盐酸溴己新对照品与95% (v/v)乙醇用量比例为0.02g:
1.5ml。
[0030]进一步地，步骤(I)中，溶解或/和稀释所用溶剂为步骤(2)的流动相。
[0031]进一步地,所述色谱柱的尺寸为250 X 4.60mm, 5 μ m。
[0032]优选地，所述色谱柱选自AIItima?C18，250X4.60mm5 μ m。
[0033]进一步地，柱温为30°C，流动相流速为1.0ml/min。
[0034]本发明提供的中间体和成品检测方法中，采用紫外分光光度法用于盐酸溴己新葡萄糖注射液半成品含量控制，能快速准确的检测出按配制工艺配制好的中间体盐酸溴己新含量，为下道工序流水作业取得生产完成时间保证，同时为配液工序半成品保证在规定的时间开灌；采用HPLC对成品进行质量检测，具有良好的专属性，可以更好地将主成分与有关物质分离，其含量测定更准确可靠，分离度、拖尾因子、不对称度均符合中国药典求，检测结果良好，能够有效用于盐酸溴己新葡萄糖注射液成品含量项目的检验控制。【专利附图】
【附图说明】
[0035]图1 :原部颁标准测YBH10902004检测成品A130412A有关物质
[0036]图2 :原部颁标准测YBH10902004检测成品A130412B有关物质
[0037]图3 :原部颁标准测YBH10902004检测成品A130412C有关物质
[0038]图4:研究使用的方法检测成品A130412A有关物质
[0039]图5 :研究使用的方法检测成品A130412B有关物质
[0040]图6 :研究使用的方法检测成品A130412C有关物质 [0041 ]图7 :空白峰（5%葡萄糖溶液色谱图峰）
【具体实施方式】
[0042]实施例1本发明有关物质的检测方法
[0043](1)取待测酸溴己新葡萄糖注射液，加入流动相溶解、稀释，制备供试品溶液；
[0044](2)取供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在下述色谱条件下检测；
[0045]色谱柱：AIItima?C18,250 X 4. 60mm5 u m ；
[0046]检测波长：249nm；
[0047]流动相：乙腈：磷酸盐缓冲液=28:72，所述磷酸盐缓冲液由如下方法制备： 0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0. 1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸调节pH为3. 3 ;
[0048](3)根据步骤（2)的检测结果，计算有关物质含量即可。
[0049]本发明中采用自身对照法计算有关物质含量，但不排除其他计算方法。
[0050]采用上述方法测定3批供试品溶液的有关物质限量，结果见下表1、图1-6 ：
[0051]表1三批成品有关物质检测分析比较表
[0052]批号A130412AA130412BA130412C原部颁标准方法0. 87%0. 76%0. 83%研究使用的方法1. 15%1. 04%1. 10%结论符合规定符合规定符合规定
[0053]从上表中结果看出，本品制剂有关物质含量均小于2%，质量符合要求。
[0054]从以上表中结果看出，本品制剂采用2种方法检测均符合规定，但原方法结果比 现研究的方法结果偏小，且有关物质分离不完全，未能真实显现内在的有关物质变化；而本 发明方法分离出的有关物质色谱峰较多，各方面试验较稳定，其测值能够更为真实地反映 有关物质的变化。
[0055]实施例2色谱条件的考察
[0056]以AIItima?C185 y (250X4. 60mm5micron)为色谱柱，柱温为 30°C,流速为 1. OmL/ min,进样量为20 u L，对检测波长和流动相作考察。
[0057]1检测波长选择取用含量项下的对照液和供试液在紫外光区200?400nm波长段 扫描，结果显示,盐酸溴已新有三个最大吸收,分别为205nm、249nm、309nm,而205nm为末端 吸收，平衡时间长，基线出现漂移，不稳定；309nm处吸收度太小，都不利于产品中微量的有 关物质检查；249nm出峰多，分离度好，因此选择249nm为检测波长。
[0058]2流动相的选择在249nm下，分别考察了 5种流动相对盐酸溴己新葡萄糖注射液中的有效成分及杂质的洗脱分离效果。
[0059]以(I) 1%冰醋酸水溶液:甲醇(50:50)为流动相试验时，出峰时间较合适，含量检测较好，理论塔板数在2000以上。但有关杂质峰面积较小，而且只检测到一个杂质峰。
[0060]以(2) 1%冰醋酸水溶液:乙腈(50:50)为流动相试验时，出峰时间提前，含量检测较好，理论塔板数在3000以上，分离度也较好，但有关杂质峰不出峰，后调整流速为0.8ml/min重新试验,结果仍未检出相应的杂质峰。
[0061]以(3)甲醇:磷酸盐缓冲液(0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1%三乙胺溶液，用冰醋酸调节PH为3.3)(体积比28: 72)为流动相试验时，试验结果是含量检测较好，理论塔板数在4000以上，有关物质只检出有一个峰。
[0062]以(4)乙腈:磷酸盐缓冲液(0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1 %三乙胺溶液，用冰醋酸调节PH为3.3)(体积比28: 72)为流动相时，盐酸溴己新的峰形好，理论塔板数在6000以上，辅料也不干扰其测定，有关物质能检测出4个峰，分离效果较好。
[0063]综上，本发明采用(4)号流动相条件为试验条件进行以下试验。
[0064]实施例3盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体和成品的检测方法
[0065](一)盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体的检测
[0066]1-1色谱条件:采用日本岛津仪器双光束校正紫外分光光度计(SHIMADZUUV-2450), UV-VISIBLESPECTROPHOTOMETER UVProbe 软件工作站；
[0067]1-2检测波长的确定:精密吸取盐酸溴己新葡萄糖注射液IOml至20ml容量瓶中，用5%葡萄糖溶液稀释刻度，摇匀，为测试液。取5%葡萄糖溶液为空白溶液作为基线背景校零，而后取测试液进行紫外扫描，结果，在249nm波长处有最大吸收；
[0068]1-3对照品溶剂筛选方案:对照品分别采用a、注射用水溶解；b、95%乙醇(生产工艺上起助溶作用)溶解；c、PH6.8的磷酸盐缓冲液溶解；d、1.5ml95%乙醇溶解后再用5%葡萄糖溶液溶解。
[0069]试验结果见下表:
[0070]表2
[0071]
【权利要求】
1.盐酸溴己新葡萄糖注射液中有关物质的检测方法，其特征在于:它是采用HPLC进行检测的，包括如下操作步骤: (1)取待测盐酸溴己新葡萄糖注射液，溶解或稀释，制备供试品溶液； (2)取供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在下述色谱条件下检测； 色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料； 检测波长:249nm ； 流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液=28:72，所述磷酸盐缓冲液由如下方法制备:0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1 % (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸调节pH为3.3; (3)根据步骤(2)的检测结果，计算有关物质含量即可。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:步骤(I)中，溶解或/和稀释所用溶剂为步骤(2)的流动相。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述色谱柱的尺寸为250X4.60mm,5 μ m0
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于:所述色谱柱选自AIItima?C18。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:柱温为30°C，流动相流速为1.0ml/mirio
6.盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体和成品的检测方法，其特征在于:所述中间体采用紫外分光光度法进行检测，它包括如下操作步骤: A、取待测盐酸溴己新葡萄糖注射液中间体，以葡萄糖溶液稀释，制备得到中间体供试品溶液； B、取盐酸溴己新对照品，加入95%(v/v)乙醇溶解后，再用葡萄糖溶液稀释，制备得到对照品溶液； C、以葡萄糖溶液为空白对照，分别取中间体供试品溶液、对照品溶液，在294nm下进行检测，采用外标法计算中间体供试品溶液中盐酸溴己新含量即可； 所述成品采用HPLC进行检测，包括如下操作步骤: (1)取待测酸溴己新葡萄糖注射液成品，溶解或/和稀释，制备成品供试品溶液； (2)取成品供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在下述色谱条件下检测即可； 色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料； 检测波长:249nm ； 流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液=28:72，所述磷酸盐缓冲液由如下方法制备:0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，加0.1% (v/v)三乙胺溶液，用冰醋酸调节pH为3.3。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于:步骤A?C中，所述葡萄糖溶液浓度均为 5% (g/ml)。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于:步骤B中，盐酸溴己新对照品与95%(v/v)乙醇用量比例为0.02g:1.5ml。
【文档编号】G01N30/02GK103499647SQ201310414886
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日
【发明者】艾建高, 张从俊, 谢国龙, 饶高堂, 周群娥, 丁勇 申请人:江西科伦药业有限公司