一种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体的说是一种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方 法。
【背景技术】
[0002] 腹膜透析液（乳酸盐）国家质量标准草案中，采用了间接碘量法和反滴定法对葡 萄糖含量进行了测定。具体方法为：精密量取本品适量，精密加碘滴定液（〇. lmol/L) 25ml， 边振摇边滴加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L) 50ml，摇匀，在暗处放置30分钟，加稀硫酸5ml， 用硫代硫酸钠滴定液（0. lmol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消 失，并将滴定的结果用空白试验校正，即得，每lml的碘滴定液（0. lmol/L)相当于9. 909mg 的 C6H1206 ? H20。
[0003] 该方法涉及的反应条件比较多，如精密加入0. lmol/L的碘滴定液25ml、精密加入 0. lmol/L的氢氧化钠滴定液50ml、边加边振摇（振摇速度均匀稳定）、水封（有时发现没水 封好）、在暗处放置30分钟等要求，都会影响测定结果的准确性和平行性。其中1 2在水中溶 解度很小，且易挥发，易见光分解，碘离子很容易被空气中的〇2氧化。另外，滴加氢氧化钠溶 液时，滴加速率不易过快，否则10来不及与葡萄糖反应而歧化为I0 3和I，从而导致葡萄 糖不能被完全氧化。上述这些条件都会对葡萄糖含量的测定带来较大影响，产生较大误差， 以至于对该方法做方法学验证时葡萄糖回收率数据偏高或偏低，不能准确反应样品中葡萄 糖的含量。
[0004] 葡萄糖通常还使用比旋度法测定含量，但由于腹膜透析液处方中含具旋光性的 乳酸钠，比旋度法测定葡萄糖存在干扰。
【发明内容】
[0005] 根据上述不足指出，本发明的目的是提供一种适用于腹膜透析液中葡萄糖含量的 检测方法，摒弃反应复杂的滴定分析法，能更好地对腹膜透析液中葡萄糖的含量进行控制， 指导工艺研究，提商广品质量。
[0006] 为实现上述目的，本发明的技术方案是：一种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方 法，它包括以下步骤：
[0007] (1)配制对照品溶液：精密称取无水葡萄糖对照品，用去离子水溶解，稀释，制成 每lml中含葡萄糖5. 0-6. 5mg的溶液；
[0008] (2)配制供试品溶液：精密量取中性腹膜透析液，用去离子水稀释制成每lml中含 葡萄糖5. 0-6. 5mg的溶液；
[0009] (3)分别精取对照液和供试液各20 yl，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰 面积计算，即得葡萄糖的标示量。
[0010] 其中，所述的色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX 6. 5mm，6. 5um ;流 动相：去离子水；流速：〇. 5±0. lml/min ;柱温：80±5°C ;示差检测器设置温度：40±5°C ;进 样量：20iil。
[0011] 优选的是：所述的色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX 6. 5mm, 6. 5um ;流动相：去离子水；流速：0. 5ml/min ;柱温：80°C ;示差检测器设置温度：40°C ;进样 量：20 y 1。
[0012] 优选的是：所述的流动相去离子水中加入抑菌剂叠氮化钠。
[0013] 本发明的有益效果在于：本发明通过高效液相色谱法，检测腹膜透析液中葡萄糖 的含量，对腹膜透析液的质量进行精确控制，有利于优化工艺，提高产品质量和安全性。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0015] -种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法，它包括以下步骤：
[0016] (1)配制对照品溶液：精密称取无水葡萄糖对照品，用去离子水溶解，稀释，制成 每lml中含葡萄糖5. 0-6. 5mg的溶液；
[0017] (2)配制供试品溶液：精密量取中性腹膜透析液，用去离子水稀释制成每lml中含 葡萄糖5. 0-6. 5mg的溶液；
[0018] (3)分别精取对照液和供试液各20 yl，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰 面积计算，即得葡萄糖的标示量。
[0019] 其中，所述的色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX 6. 5mm，6. 5um ;流 动相：去离子水；流速：〇. 5±0. lml/min ;柱温：80±5°C ;示差检测器设置温度：40±5°C ;进 样量：20iil。
[0020] 优选的色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX6. 5mm，6. 5um ;流动相： 去离子水；流速：〇. 5ml/min ;柱温：80°C ;示差检测器设置温度：40°C ;进样量：20iil。
[0021] 为了防止流动相中长菌而影响试验结果，流动相去离子水中加入抑菌剂叠氮化 钠。
[0022] 试验针对色谱柱的柱温、检测器的温度、流速和流动相（水）中是否加入叠氮化钠 进行了一系列的条件筛选。
[0023] 首先，将色谱柱的柱温在原有80°C的条件下分别升高和降低5°C进行试验，结果 发现，柱温在80°C时，色谱条件最佳。柱温差异检测结果见表1。
[0024] 表1柱温差异检测结果
[0025]
[0026] 又4检测器的温度在原有^ 4(TC的条件+分别升高和降低5°C，结果i现检测器温 度在40°C时，色谱条件最佳。检测器温度差异检测结果见表2。
[0027] 表2检测器温度差异检测结果
[0028]
[0029] 又将流速在原有0. 5ml/min的条件下分别升高0. lml/min和降低0. lml/mn，结果 发现流速在〇. 5ml/min时，在分离度和拖尾因子相对较好的情况下，柱校最佳。流速差异检 测结果见表3。
[0030] 表3流速差异检测结果
[0031]
[0032]而k，向流动相（水）中加入适量的W菌剂叠氮化"，发现在试验过!程中峰形基 本保持不变，始终很好看。在不加叠氮化钠的情况下，试验时间一长（因为这种腹透规格 多，批次比较大，试验时间比较长），峰形就会出现变化，比较难看，这是由于水中长菌，只能 停下试验，把柱子卸下来，因为柱子不能接触有机溶剂，所以采用甲醇或乙腈将系统冲洗60 分钟左右，再用新制备的高纯水把系统中的有机溶剂冲净，接上柱子继续试验，峰形就会正 常。这样试验既费时又费力。自从向水中加入适量的叠氮化钠或其他抑菌剂后试验过程中 峰形一直很好，既使试验进行得非常顺利，又节省了时间。
[0033] 一、高效液相法准确度验证
[0034] 精密称取1. 36g(或2. 27g、3. 86g)的80%、100%、120%无水葡萄糖各3份共9 份，分别置l〇〇ml量瓶中，分别加入以下溶液（分别取无水氯化钠5. 44g、氯化钙0. 183g (或 0. 257g)、氯化镁0. 0508g、乳酸钠4. 48g，置于100ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀， 既得。）l〇ml，用水溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取上述溶液10ml、6ml、4ml，至25ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每lml中含葡萄糖约为5. 5mg的溶液，作为供试品溶 液。分别精密量取20 yl，注入液相色谱仪，记录色谱图。计算回收率和回收率的相对标准 偏差，结果回收率应在98.0%~102.0%之间，RSDS 2.0%。含1.5%、2.5%、4.25%葡萄 糖准确度试验结果分别见表4、5、6。
[0035] 表4含1. 5 %葡萄糖准确度试验结果
[0036]
[0037] 表5含2. 5 %葡萄糖准确度试验结果
[0038]
[0039] 表6含4. 25 %葡萄糖准确度试验结果
[0040]
[0041] 从表4、5、6的试验结果可知，采用本发明方法测量腹膜透析液中葡萄糖含量，其 准确度良好。
[0042] 二、高效液相法精密度验证
[0043] ⑴.重复性：取本品，配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可 能相同的条件下按照上述葡萄糖含量检测方法进行测试，记录葡萄糖标示量。含1.5%、 2. 5%、4. 25%葡萄糖制剂重复性试验结果分别见表7、8、9。
[0044] 表7含1. 5 %葡萄糖制剂重复性试验结果
[0045]
[0046] 表8含2. 5 %葡萄糖制剂重复性试验结果
[0047]
[0048] 表9含4. 25 %葡萄糖制剂重复性试验结果
[0049]
[0050] 从表7、8、9的试验结果可知，采用本发明方法测量腹膜透析液中葡萄糖含量，其 重复性良好。
[0051] (2).中间精密度：取本品，在不同时间由不同的分析人员，平行制备6份供试液， 按照上述葡萄糖含量检测方法，记录测试结果，计算供试品溶液含量及其相对标准偏差。含 1. 5%葡萄糖制剂中间精密度试验结果见表10、11、12。
[0052] 表10含1. 5 %葡萄糖制剂中间精密度试验结果
[0053]
[0054] 表11含2. 5%葡萄糖制剂中间精密度试验结果
[0055]
[0056] 表12含4. 25%葡萄糖制剂中间精密度试验结果
[0057]
[0058] 从表10、11、12的试验结果可知，采用本发明方法测量腹膜透析液中葡萄糖含量， 其中间精密度良好。
[0059] 二、滴定法测得的回收率见表13。
[0060] 表13含1. 5 %葡萄糖准确度试验结果
[0061]
[0062] 将表4和表13的试验结果相比可知，采用滴定法测量腹膜透析液中葡萄糖含量其 准确度较采用发明测量腹膜透析液中葡萄糖含量的准确度差。
【主权项】
1. 一种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤： (1) 配制对照品溶液：精密称取无水葡萄糖对照品，用去离子水溶解，稀释，制成每Iml 中含葡萄糖5. 0-6. 5mg的溶液； (2) 配制供试品溶液：精密量取中性腹膜透析液，用去离子水稀释制成每Iml中含葡萄 糖5. 0-6. 5mg的溶液； (3) 分别精取对照液和供试液各20yl，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积 计算，即得葡萄糖的标示量。 其中，所述的色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX6. 5mm，6. 5um;流动 相：去离子水；流速：〇. 5±0.lml/min;柱温：80±5°C;示差检测器设置温度：40±5°C;进样 量：20ii1。2. 根据权利要求1所述的腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法，其特征在于：所述的 色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mmX6. 5mm，6. 5um;流动相：去离子水；流速： 0. 5ml/min;柱温：80°C;示差检测器设置温度：40°C;进样量：20iil。3. 根据权利要求1所述的腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法，其特征在于：所述的 流动相去离子水中加入抑菌剂叠氮化钠。
【专利摘要】本发明涉及一种腹膜透析液中葡萄糖含量的检测方法。其步骤为：精密称取无水葡萄糖对照品，用去离子水溶解稀释，制成每1ml中含葡萄糖5.0-6.5mg的溶液；精密量取中性腹膜透析液，用去离子水稀释制成每1ml中含葡萄糖5.0-6.5mg的溶液；分别精取对照液和供试液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算得葡萄糖的标示量。色谱条件为色谱柱：WatersSugarParkI柱，300mm×6.5mm，6.5μm；流动相：去离子水；流速：0.5±0.1ml/min；柱温：80±5℃；示差检测器设置温度：40±5℃；进样量：20μl。本发明通过高效液相色谱法，检测腹膜透析液中葡萄糖的含量，对腹膜透析液的质量进行精确控制，有利于优化工艺，提高产品质量和安全性。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105203650
【申请号】CN201410298138
【发明人】唐素华, 刘春霞, 陈红妍
【申请人】华仁药业股份有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2014年6月27日