一种血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种血葡萄糖的检测方法，采用酶学速率测定法，根据在波长500nm处，反应体系吸光度的升高速率与样本中血葡萄糖的浓度成正比，延迟30～60秒后，测定30～180秒内的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量,使用酶学速率测定法，测定的是反应的速率，在反应过程中的线性期进行读数，可以完全排除血清样品本底的干扰，提高了结果的准确度；延迟时间短，读数时间也很短，这样就使整个反应时间大大缩短，由原来的5～15分钟缩短为3分钟以内，提高了效率。
【专利说明】一种血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种血葡萄糖的检测方法，具体地说，涉及一种酶学速率法人血清血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒，用于体外定量测定人血清、血浆中的血葡萄糖的浓度，属于医用诊断制剂【技术领域】。
【背景技术】
[0002]正常情况下，人体中糖的分解和合成代谢处于动态平衡中，保持相对恒定。血清葡萄糖是指血液中的葡萄糖浓度，一般禁食8?12h后空腹抽取静脉血，标本在I小时内送检，血糖测定是诊断糖尿病的最主要检查项目之一。
[0003]正常参考值成人3.9?6.lmmol/L,足月新生儿2.8?4.5mmol/L。异常结果分析，生理性增高见于餐后I?2h和情绪紧张时，但不应超过lOmmol/L ;生理性降低见于饥饿、妊娠、剧烈运动后。病理性增高有以下几种情况:(1)胰岛功能低下，胰岛素分泌不足的糖尿病；(2)使血糖升高的激素分泌增多，如嗜铬细胞瘤、肾上腺皮质功能亢进(库欣综合征)、垂体前叶功能亢进(肢端肥大症)、甲状腺功能亢进等；(3)中枢性疾病，如颅内压增高，颅内出血，重症脑炎，颅脑外伤、脑瘤、脑膜炎等；(4)其他疾病，如慢性胰腺炎、甲状腺功能亢进、心肌梗死、皮质醇增多症、肢端肥大症、嗜铬细胞瘤、胰高血糖素瘤、肝硬化、妊娠呕吐、脱水、全身麻醉时。病理性降低有以下几种情况:(1)胰岛β细胞瘤，胰岛素分泌过多；(2)降血糖药物用量过多；(3)垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退、艾迪生病、甲状腺功能减退；(4)长期营养不良、严重肝炎、肝硬变、糖原累积病、酒精中毒等。
[0004]血糖测定方法很多，迄今为止大体可分为四类:氧化还原法、缩合法、酶法及其他类方法。其中酶法包括葡萄糖氧化酶法(G0D)、己糖激酶法(HK)和葡萄糖脱氢酶法(⑶H)，其中以GOD法应用最为广泛。己糖激酶(HK)法是目前国际上公认的测定葡萄糖参考方法，但试剂比较昂贵。目前有很少单位仍沿用邻甲苯胺法。其他方法已基本没有使用。以上方法均为终点法测定，有一个共同的缺点就是易受血清本底干扰，而且反应时间长，大大影响了结果的准确性和测定效率。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种酶学速率法人血清血葡萄糖的检测方法，用于体外定量测定人血清、血浆中的血葡萄糖的浓度，克服了现有检测方法易受血清本底干扰、反应时间长的缺陷，本发明检测方法以酶催化法，创新使用酶学速率测定法，完全排除了血清本底的干扰，大大缩短了反应时间，操作简便，结果准确可靠，适用于各种生化分析仪器。
[0006]本发明的另一目的是提供一种实施该检测方法的检测试剂盒。
[0007]为解决以上问题，本发明采用的技术方案是:一种血葡萄糖的检测方法，其特征在于:所述检测方法为采用酶学速率测定法，根据在波长500nm处，反应体系吸光度的升高速率与样本中血葡萄糖的浓度成正比，延迟30?60秒后，测定30?180秒内的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。
[0008]一种优化方案，所述吸光度上升速率测定步骤:
a、制备反应液
取空白管、标准管及样本管，分别加入缓冲液；然后在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，混匀，37°C条件下保温3~5分钟，再加入酶试剂，混匀，得到反应液；或
将缓冲液和酶试剂按比例混合配成试剂工作液，稳定3~5分钟；然后根据测定取所需要的空白管、标准管及样本管，分别加入试剂工作液；再分别在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸懼水及标准液，得到反应液；
b、反应液在37°C条件下反应，延迟30~60秒后，在波长500nm处读取反应液的吸光度变化，读数间隔时间为30~180秒，计算平均每分钟吸光度变化率，得到空白管、标准管及样本管内反应液的每分钟吸光度变化率。
[0009]进一步地，所述缓冲液与酶试剂的体积比为5:1~1:1 ;缓冲液、酶试剂之和与样本的体积比为200:1~100:1。
[0010]进一步地，所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.lmol/L的磷酸盐缓冲液。
[0011]进一步地，所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5~200U/ml ;过氧化酶浓度为2~30U/ml。
[0012]进一步地，所述标准液为葡萄糖溶液，浓度为2~7mmol/L。
[0013]基于所述检测方法的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括包装盒、缓冲液、酶试剂、标准液；
所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.lmol/L的磷酸盐缓冲液。
[0014]进一步地，所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5~200U/ml ;过氧化酶浓度为2~30U/ml。
[0015]进一步地，所述标准液为葡萄糖溶液，浓度为2~7mmol/L。
[0016]另一种优化方案，根据下列公式计算血葡萄糖的含量:
血葡萄糖含量(mmol/L) =
【权利要求】
1.一种血葡萄糖的检测方法，其特征在于:所述检测方法为采用酶学速率测定法，根据在波长500nm处，反应体系吸光度的升高速率与样本中血葡萄糖的浓度成正比，延迟30?60秒后，测定30?180秒内的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述吸光度上升速率测定步骤: a、制备反应液 取空白管、标准管及样本管，分别加入缓冲液；然后在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，混匀，37°C条件下保温3?5分钟，再加入酶试剂，混勻，得到反应液；或 将缓冲液和酶试剂按比例混合配成试剂工作液，稳定3?5分钟；然后根据测定取所需要的空白管、标准管及样本管，分别加入试剂工作液；再分别在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸懼水及标准液，得到反应液； b、反应液在37°C条件下反应，延迟30?60秒后，在波长500nm处读取反应液的吸光度变化，读数间隔时间为30?180秒，计算平均每分钟吸光度变化率，得到空白管、标准管及样本管内反应液的每分钟吸光度变化率。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述缓冲液与酶试剂的体积比为5:1?1:1 ;缓冲液、酶试剂之和与样本的体积比为200:1?100:1。
4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.lmol/L的磷酸盐缓冲液。
5.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5?200U/ml ;过氧化酶浓度为2?30U/ml。
6.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述标准液为葡萄糖溶液，浓度为2?7mmol/L。
7.实施如权利要求1-6其中之一所述检测方法的检测试剂盒，其特征在于:所述检测试剂盒包括包装盒、缓冲液、酶试剂、标准液； 所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.lmol/L的磷酸盐缓冲液。
8.如权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于:所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5?200U/ml ;过氧化酶浓度为2?30U/ml。
9.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于:所述标准液为葡萄糖溶液，浓度为2 ?7mmol/L。
【文档编号】G01N33/66GK103837685SQ201410101525
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月19日 优先权日:2014年3月19日
【发明者】孙希武, 郝树彬, 王春光, 彭新国, 王永庆 申请人:潍坊鑫泽生物科技有限公司