一种hit抗体检测免疫荧光层析试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，该试纸条由依次在衬板上相互搭接的样品垫、反应膜和吸收垫组成，所述样品垫两端分别设置有第一加样点和第二加样点，所述反应膜固定有一条内部质控带和至少一条抗体检测带。通过上述方式，本实用新型HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，检测过程简单、高效、准确、价廉且实用，可实现半定量或定量检测，为我国临床肝素诱导的血小板减少症及相关并发症的诊断提供较为可靠实用的方法。
【专利说明】—种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及医学检测领域，特别是涉及一种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条。
【背景技术】
[0002]肝素是临床上应用最为广泛的抗凝药物之一，其主要副作用是出血、血小板减少并伴随血栓栓塞，以及过敏反应和注射部位皮肤坏死等，其中肝素所致的血小板减少症(heparin-1nduced thrombocytopenia, HIT)及血栓栓塞并发症(心脏栓塞和心肌梗死、肢体血管栓塞和肢体坏死)最为严重，发病率大于5%，其中死亡率约为20-30%。
[0003]由于HIT及血栓并发症临床表现多样性，且缺少特异性的辅助检查方法，做到早期诊断有困难。病人在被临床确定诊断时，常常是已经发生了难以逆转的多发性危及生命的静脉和动脉血栓；该病误诊又常误导实施血小板输血治疗，进而加重血栓综合症和增高死亡率。英国血小板输血指南中明确指出“肝素引起的免疫性血小板减少症是血小板输注禁忌症”，然而迄今全世界HIT的诊断和治疗均尚未规范化，特别是在我国临床，一般不对血小板减少患者进行相关抗体检测，更不对其进行抗体鉴定和分析，造成大量HIT患者难以准确诊断，误输血小板，导致严重的动静脉血栓甚至死亡。早期诊断HIT并采取治疗措施对于减少血栓栓塞等严重并发症的发生具有重要意义，除密切观察临床表现、动态监测血小板数量外，对肝素治疗的或者高度怀疑HIT的患者进行HIT抗体检测以支持诊断很有必要，但目前HIT抗体检测尚未普及，其诊断主要依据临床表现，尽管国外现存的HIT抗体检测技术和方法较多，但存在诸多缺陷，目前尚缺乏一种实用、简便、快捷而且特异性高的检测方法。
[0004]研究表明，HIT抗体检测是诊断HIT的必要条件，韩国学者Lee等检测91例维持性血液透析患者血清HIT抗体，结果显示血液透析患者HIT抗体的阳性率达到34%，为正常健康人的10倍，HIT抗体阳性的血液透析患者其血管通路堵塞的发生率显著高于阴性患者。HIT抗体产生的概率随着使用肝素的治疗持续时间延长逐渐上升。如心血管手术患者因长时间使用肝素，产生HIT抗体者可达30% -60%。通常，HIT抗体检查呈强阳性的患者易于发展为HIT。CarrierM等的研究发现,体内HIT抗体的生成与患者的死亡率相关,进一步的研究表明，维持性血液透析治疗的患者体内HIT抗体的生成可以显著增加心血管病死亡率。美国病理学会建议，在接受肝素治疗期间出现血小板减少或新血栓的患者应检测HIT抗体。目前HIT的诊断主要依据临床表现，HIT抗体相关的实验室检测可为HIT确诊提供重要依据，并能预测非HIT患者不良心脏事件的发生。
[0005]国内目前HIT的诊断和治疗均尚未规范化，替代抗凝治疗更是很少被应用，临床医师尤其非血液专科医师对HIT的认识程度尚且不够，在临床工作中需加强对HIT的警惕和认识，从而及早发现及时治疗，尽量避免形成严重的血栓并发症。尽管现存的HIT抗体检测技术和方法很多，但国内临床上还没有具有实用价值的简便、快捷而且特异性很高的检测方法，因此对HIT准确、便捷的检测方法的进一步研究，将有助于本病的早期诊断和防治O
[0006]美国等国家已经研发出相关的检测试剂，但特异性较差，此外价格昂贵，购买繁琐也限制了其在国内的应用，且其中阴阳性的预测值是根据本国群体统计而来，直接用国外产品的阴阳预测值来判断国内个体的检测结果，因群体的差异，可能会导致假性结果的产生，因此中国群体应该有自己的阴阳性的预测值，使检测结果的准确性提高。
实用新型内容
[0007]本实用新型主要解决的技术问题是提供一种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，该试纸条使用上简单、高效、准确、价廉且实用。
[0008]为解决上述技术问题，本实用新型采用的一个技术方案是:提供一种免疫荧光层析试纸条，包括反应膜、样品垫、吸收垫和底板，所述反应膜位于所述底板上，所述反应膜上固定有检测带和质控带，所述样品垫和所述吸收垫分别与所述反应膜的两侧部分重叠，并位于所述反应膜和所述底板上，所述样品垫上固定有第一加样点和第二加样点，所述第一加样点设置在远离所述样品垫与所述反应膜重叠的一侧，所述第二加样点设置在接近所述样品垫与所述反应膜重叠的一侧。
[0009]在本实用新型一个较佳实施例中，所述检测带为至少一条，所述检测带上固定有肝素-血小板因子4复合物，每条所述检测带的间距为5mm。
[0010]在本实用新型一个较佳实施例中，所述质控带为一条，所述质控带上固定有人IgG0
[0011]在本实用新型一个较佳实施例中，所述反应膜的材料为硝酸纤维膜，醋酸纤维膜，尼龙膜或聚四氟乙烯膜。
[0012]本实用新型的有益效果是:本实用新型的HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，免疫荧光层析技术操作快速简便，结合检测仪器可实现半定量或定量检测，检测过程简单、高效、准确、价廉且实用，不容易漏检，对操作人员技术要求不高，能辅助临床对肝素诱导血小板减少症相关疾病的早期诊断，快速诊断血小板减少症以及血栓栓塞等严重并发症是否是由肝素引起，对及时停用肝素和避免误输血小板而加重病情的诊疗起指导作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]为了更清楚地说明本实用新型实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中:
[0014]图1是本实用新型的HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条一较佳实施例的结构示意图；
[0015]附图中各部件的标记如下:1、反应膜，2、样品垫，3、吸收垫，4、底板，5、检测带，6、质控带，7、第一加样点，8、第二加样点。
【具体实施方式】
[0016]下面将对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本实用新型的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本实用新型保护的范围。
[0017]实施例一:
[0018]请参阅图1，提供一种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，包括反应膜1、样品垫2、吸收垫3和底板4。所述反应膜I位于所述底板4上，所述反应膜I上固定有检测带5和质控带6，所述检测带5为两条，所述质控带6为一条，所述反应膜的材料可以选为硝酸纤维膜，醋酸纤维膜，尼龙膜或聚四氟乙烯膜。
[0019]所述样品垫2和所述吸收垫3分别与所述反应膜I的两侧部分重叠，并位于所述反应膜I和所述底板4上。所述样品垫2上包括第一加样点7和第二加样点8,所述第一加样点7设置在远离所述样品垫2与所述反应膜I重叠的一侧，所述第二加样点8设置在接近所述样品垫2与所述反应膜I重叠的一侧。
[0020]所述HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条的制备过程为:
[0021]I)反应膜的制备
[0022]选取Millipore HF 180带背衬膜作为反应膜，将其裁成30 X 1.8cm大小备用。用
0.0lM的pH值为7.2的磷酸盐缓冲液将人IgG的浓度调节为0.5mg/ml，加入体积分数为1%的Tween-20，使用划膜仪将其喷于NC膜表面作为质控线，划膜量为0.5 μ 1/cm。用0.0lM的PH为7.2磷酸盐缓冲液即PBS配置20 μ g/ml PF4和5 μ g/ml肝素，两者等体积混合后，于4°C过夜后加入体积分数为1%的Tween-20，使用划膜仪将其喷于NC膜表面作为检测线，每条线间隔为5_，划膜结束后立即放入37°C烘箱中干燥过夜，室温保存备用。
[0023]2)试纸条的组装
[0024]选取国产优质玻璃纤维膜BT100作为样品垫材料，将其剪成30X1.8cm大小备用。选取国产优质吸水纸CH37K，并将其剪裁成30X 1.8cm大小备用。在规格为30X6cm的PVC底板上先黏贴反应膜，再将样本垫与吸水纸采取搭接的方法黏贴于底板上，搭接的长度为
0.5mm,以便于反应液的扩散。组装好后，将其切成4mm宽的试纸条，并封装于塑料外壳中，放于铝箔袋中，4 °C下密封保存。
[0025]实施例二:
[0026]提供一种实施例一所述试纸条用于肝素诱导的血小板减少症抗体检测的方法:
[0027](I)荧光反应液的制备
[0028]将抗人IgG抗体溶液用磷酸盐缓冲液调节其浓度为2mg/ml，pH为7.5至8.0。取Iml抗体溶液，缓慢加入100 μ I浓度为lmg/ml的cy5荧光染料，在4°C下缓慢搅拌3h后再室温反应lh，再用pH为7.4的磷酸盐缓冲液进行透析，去除未反应的cy5染料。透析液完成后回收偶联好的荧光抗体，测定偶联效率与抗体浓度后，在4°C下避光保存。
[0029](2)检测步骤
[0030]I)将试纸条和荧光反应液平衡至室温即18_25°C ；
[0031]2)加入5μ I待检样本至样品垫中。
[0032]3)加入15 μ I含有体积分数为0.5%的Tween-20的pH为7.2的0.15M PBS至样
品垫中。
[0033]7)加入5μ1 cy5_抗人IgG至样品垫中。[0034]8 )重复步骤2 )三次。
[0035]9)将试纸条置于荧光信号读取仪器中，读取荧光信号进行测定。
[0036]以上所述仅为本实用新型的实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是利用本实用新型说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的【技术领域】，均同理包括在本实用新型的专利保护范围内。
【权利要求】
1.一种HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，其特征在于，包括反应膜、样品垫、吸收垫和底板，所述反应膜位于所述底板上，所述反应膜上固定有检测带和质控带，所述样品垫和所述吸收垫分别与所述反应膜的两侧部分重叠，并位于所述反应膜和所述底板上，所述样品垫上固定有第一加样点和第二加样点，所述第一加样点设置在远离所述样品垫与所述反应膜重叠的一侧，所述第二加样点设置在接近所述样品垫与所述反应膜重叠的一侧。
2.根据权利要求1所述的HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，其特征在于，所述检测带为至少一条，所述检测带上固定有肝素-血小板因子4复合物，每条所述检测带的间距为5mm ο
3.根据权利要求1所述的HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，其特征在于，所述质控带为一条，所述质控带上固定有人IgG。
4.根据权利要求1所述的HIT抗体检测免疫荧光层析试纸条，其特征在于，所述反应膜的材料为硝酸纤维膜，醋酸纤维膜，尼龙膜或聚四氟乙烯膜。
【文档编号】G01N33/558GK203396776SQ201320432876
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年7月19日 优先权日:2013年7月19日
【发明者】王红梅, 李勇, 尹焕才, 丁少华, 段生宝, 田晶晶, 陈烨洲, 史素霞, 李冬 申请人:中国科学院苏州生物医学工程技术研究所