一种检测胃蛋白酶原Ⅰ的试纸条及应用其的试剂卡的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供一种检测胃蛋白酶原Ⅰ的试纸条及应用其的试剂卡，所述试纸条包括底板，以及沿所述试纸条长度方向顺次粘覆于所述底板上的吸水纸、硝酸纤维素包被膜、单克隆抗体结合垫以及样品垫；所述硝酸纤维素包被膜粘覆于所述底板的中间部位，且其上设置有相间隔的检测带和质控带，所述检测带靠近所述单克隆抗体结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸；所述单克隆抗体结合垫为喷涂有表面修饰了胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体Ⅰ的荧光微球的聚酯膜。所述检测胃蛋白酶原Ⅰ的试纸条及应用其的试剂卡可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高，批内、批间误差小，为临床使用提供了极大的便利。
【专利说明】—种检测胃蛋白酶原I的试纸条及应用其的试剂卡
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及临床免疫学检测领域，具体涉及一种快速、定量检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试纸条及应用其的试剂卡。
【背景技术】
[0002]胃蛋白酶原(英文全称为Pesinogen，简称PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，分为胃蛋白酶原I (简称PGI)和胃蛋白酶原II (简称PGII)。PGI主要由胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，血清PGI含量与胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等上消化道疾病有密切关系。通过测定PGI含量可检测消化道疾病，已广泛应用于临床检测和体检筛查。
[0003]对于胃蛋白酶原I的检测，目前临床常用的方法包括:乳胶增强免疫比浊法、酶联免疫法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)以及放射免疫分析法(RIA)，但是这些方法都有各自的特点及不足。放射免疫分析法(RIA)所用的试剂具有放射性且有效期短，一般不推荐使用；乳胶增强免疫比浊法，操作简单，可以全自动化，但是，其灵敏度不高，无法实现精确定量；ELISA法和时间分辨免疫法虽然能够定量准确，但操作过程复杂，且不适合单人份和较小批量检测用。
实用新型内容
[0004]为此，本实用新型所要解决的是现有技术中胃蛋白酶原I的检测方法不可兼顾高灵敏度和简单操作的技术问题，提供一种操作简单、灵敏度高，可快速、定量检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试纸条及应用其的试剂卡。
[0005]为解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案如下:
[0006]本实用新型所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，包括:
[0007]底板，以及沿所述底板长度方向顺次粘覆于所述底板上的吸水纸、硝酸纤维素包被膜、单克隆抗体结合垫以及样品垫；其中，
[0008]所述硝酸纤维素包被膜粘覆于所述底板的中间部位，且其上设置有相间隔的喷涂有胃蛋白酶原I单克隆抗体II的检测带和喷涂有兔抗鼠IgG抗体的质控带，所述检测带靠近所述单克隆抗体结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸；
[0009]所述单克隆抗体结合垫是喷涂有表面修饰了胃蛋白酶原I单克隆抗体I的荧光微球的聚酯膜；
[0010]所述吸水纸、所述硝酸纤维素包被膜、所述单克隆抗体结合垫以及所述样品垫之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
[0011]所述荧光微球的粒径为10?lOOOnm。
[0012]所述试纸条的宽度为0.3?2cm。
[0013]所述吸水纸、所述硝酸纤维素包被膜、所述单克隆抗体结合垫以及所述样品垫之间，依次与且仅与相邻部位部分重叠区域的重叠长度彼此独立的为I?5mm。[0014]所述吸水纸与所述硝酸纤维素包被膜的所述部分重叠区域在所述硝酸纤维素包被膜的上侧。
[0015]所述底板是塑料底板。
[0016]本实用新型所述的一种检测胃蛋白酶原I的试剂卡，包括所述的试纸条以及包覆所述试纸条的外壳；所述外壳进一步包括底座和卡盖，所述卡盖上设置有观察口和加样口，以露出试纸条的局部区域；所述加样口开口于所述样品垫上部，以露出部分或全部所述样品垫区域；所述观察口开口于所述包被膜上侧，以露出全部所述检测带和所述质控带。
[0017]所述底座为塑料底座。
[0018]所述卡盖为塑料卡盖。
[0019]本实用新型的上述技术方案相比现有技术具有以下优点:
[0020]1、本实用新型所提供的检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂条以荧光微球为信号源，突光微球的体积远大于突光染料分子的体积，不但可以负载大量的突光染料分子，而且便于荧光染料分子在检测带和质控带处的聚集，起到信号放大的作用，可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高、误差小，为临床使用提供了极大的便利。
[0021]2、本实用新型所提供的检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡，体积小、便于携带，易于保存，有利于基层医院的应用与推广。
[0022]3、本实用新型所提供的检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡，制备方法简单，可实现批量生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]为了使本实用新型的内容更容易被清楚的理解，下面根据本实用新型的具体实施例并结合附图，对本实用新型作进一步详细的说明，其中
[0024]图1是本实用新型所述一种检测胃蛋白酶原I的试剂卡的结构示意图；
[0025]图2是本实用新型所述一种检测胃蛋白酶原I的试纸条设置在底座上的主视图；
[0026]图3是本实用新型所述试纸条的侧视图。
[0027]图中附图标记表不为:1_底座、2_卡盖、3_试纸条、4_底板、5_样品塾、6_单克隆抗体结合垫、7-硝酸纤维素包被膜、8-吸水纸、9-检测带、10-观察口、11-质控带、12-加样□。
【具体实施方式】
[0028]为了使本实用新型的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本实用新型的实施方式作进一步地详细描述。
[0029]本实用新型可以以许多不同的形式实施，而不应该被理解为限于在此阐述的实施例。相反，提供这些实施例，使得本实用新型公开将是彻底和完整的，并且将把本实用新型的构思充分传达给本领域技术人员，本实用新型将仅由权利要求来限定。在附图中，为了清晰起见，会夸大层和区域的尺寸和相对尺寸。
[0030]下述实施例中，所述胃蛋白酶原I单克隆抗体1、胃蛋白酶原I单克隆抗体I1、兔抗鼠IgG抗体、磷酸缓冲溶液、牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液、包裹有荧光染料且表面修饰有氨基或羧基的聚苯乙烯球、碳二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀亚酰胺(NHS)、蔗糖、聚酯膜、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、高强度吸水纸均为市售。
[0031]如图1-3所示，本实用新型提供一种检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试纸条3，所述试纸条3包括底板4，以及沿所述试纸条3长度方向顺次粘覆于所述底板4上的吸水纸
8、硝酸纤维素硝酸纤维素包被膜7、单克隆抗体结合垫6以及样品垫5。
[0032]所述硝酸纤维素硝酸纤维素包被膜7粘覆于所述底板4的中间部位，且其上设置有相间隔的检测带9和质控带11,所述检测带9靠近所述单克隆抗体结合垫6,所述质控带11靠近所述吸水纸8。
[0033]所述单克隆抗体结合垫6是喷涂有表面修饰了胃蛋白酶原I单克隆抗体I的荧光微球的聚酯膜。
[0034]所述样品垫5是玻璃纤维素膜。所述检测带9是涂布在所述硝酸纤维素上的胃蛋白酶原I单克隆抗体II带，质控带11是涂布在所述硝酸纤维素包被膜7上的兔抗鼠IgG抗体带。
[0035]所述吸水纸8、所述硝酸纤维素硝酸纤维素包被膜7、所述单克隆抗体结合垫6以及所述样品垫5之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
[0036]本实施例还提供一种检测胃蛋白酶原I的试剂卡，包括所述的试纸条3以及包覆所述试纸条3的外壳；所述外壳进一步包括底座I和卡盖2，所述卡盖2上设置有观察口 10和加样口 12，以露出试纸条3的局部区域；所述加样口 12开口于所述样品垫5上部，以露出部分或全部所述样品垫5区域；所述观察口 10开口于所述硝酸纤维素包被膜7上侧，以露出全部所述检测带9和所述质控带11。
[0037]所述底板4是塑料底板。所述荧光微球的粒径为10?lOOOnm，本实施例优选200nm。所述荧光微球是包裹有荧光染料的聚苯乙烯球，且修饰有鼠源性单克隆抗体；所述吸水纸8优选高强度吸水纸；所述底座4是塑料底座，优选聚氯乙烯(PVC)板。
[0038]所述检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡的制备方法为:
[0039]S1、制备底座I和具有观察口 10、加样口 12的卡盖2，所述底座I和卡盖2相扣合后形成仅具有观察口 10、加样口 12两个开口的中空腔体，所述底座I为塑料底座，所述卡盖2为塑料卡盖。
[0040]S2、提纯胃蛋白酶原I单克隆抗体I。选用商品化胃蛋白酶原I单克隆抗体I，4°C条件下，用浓度为0.05mol/L, pH值为7.2-7.6的磷酸缓冲溶液对的商品化胃蛋白酶原I单克隆抗体I进行透析提纯处理。
[0041]S3、制备单克隆抗体结合垫6。所述突光微球选用商品化包裹有突光染料且表面修饰有氨基或羧基的聚苯乙烯球，粒径为200nm ;首先用浓度为0.05mol/L, pH值为7.2-7.6的MES冲溶液对的荧光微球进行洗涤处理，并将质量浓度调整为1%，然后用碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀亚酰胺(NHS)共价偶联的方式将步骤S2中处理得到的胃蛋白酶原I单克隆抗体I标记在所述荧光微球上；再使用定量喷膜仪以3?5μ Ι/cm的量将标记有胃蛋白酶原I单克隆抗体I喷涂于聚酯膜上，避光条件下35?38°C烘干I小时，制得单克隆抗体结合垫6，加入干燥剂封存备用。荧光微球的体积远大于荧光染料分子的体积，不但可以负载大量的荧光染料分子，而且便于荧光染料分子在检测带8和质控带11处的聚集，起到信号放大的作用。[0042]S4、制备硝酸纤维素包被膜7。使用含有lwt%蔗糖的浓度为0.05mol/L, pH值为
7.4的磷酸缓冲溶液分别将胃蛋白酶原I单克隆抗体I1、兔抗鼠IgG抗体、稀释至lmg/ml的浓度，再使用定量喷膜仪以I μ 1/cm的量将二者间隔喷涂在硝酸纤维素膜上，35?38°C烘干I小时，制成包括检测带9和质控带11的硝酸纤维素包被膜7，加入干燥剂封存备用。
[0043]S5、制备样品垫 5。用含有 lwt%BSA、0.lwt%tritonx_100 的浓度为 0.02mol/L, pH值为7.4的磷酸缓冲溶液浸泡玻璃纤维素膜0.5?3小时，35?38°C烘干3小时，制得样品垫5。
[0044]S6、组装试纸条3。在湿度小于35%，温度为20?25°C条件下进行试纸条3的组装，所述底板4选用聚氯乙烯(PVC)板，在所述底板4的同一面的长度方向上顺次连接且相邻部位部分重叠的样品垫5、单克隆抗体结合垫6、硝酸纤维素包被膜7、吸水纸8，所述部分重叠区域的重叠长度为I?5mm,本实施例优选2_ ;所述硝酸纤维素包被膜7设置时,在远离所述样品垫5的方向上依次为检测带9和质控带11，所述吸水纸8为高强度吸水纸；组装好后进行裁切，形成宽度为0.3?2cm的试纸条3,本实施例优选0.5cm。
[0045]S7、组装检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡。将步骤S6中制备得到的试纸条3在所述底座I上居中设置，所述底板4与所述底座I相连，扣合卡盖2，所述观察口 10正对硝酸纤维素包被膜7，加样口 12正对样品垫5 ;也可以在所述底座I和卡盖2相扣合后形成的中空腔体中加入干燥剂。
[0046]使用时，将样品液通过加样口 12滴加到样品垫5上，在毛细作用下，样品液向吸水纸8—侧泳动，当样品液中含有胃蛋白酶原I时，胃蛋白酶原I与荧光微球上的胃蛋白酶原I单克隆抗体I形成抗原-抗体复合物，随着层析作用，所述抗原-抗体复合物继续向吸水纸8 —侧泳动，到达识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II处，即检测带9处，形成抗体-抗原-抗体复合物，在检测带9处形成带有抗体-抗原-抗体复合物的荧光微球的聚集。而未结合单克隆抗体I的荧光微球继续向吸水纸8 —侧泳动，到达质控带11时，兔抗鼠IgG抗体与荧光微球上的鼠源性单克隆抗体结合，在质控带11处产线荧光微球的聚集。
[0047]反应完全后，将上述检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡置于荧光检测仪内，读取检测带9和质控带11两处的荧光信号，将读取值与预设的标准值进行比对就可以计算出定量的结果。
[0048]本实用新型所提供的检测胃蛋白酶原I的荧光免疫层析试剂卡可实现快速、单人份定量检测，且灵敏度高，批内、批间误差小，为临床使用提供了极大的便利；而且，体积小、便于携带，易于保存，有利于基层医院的应用与推广；另外，制备方法简单，可实现批量生产。
[0049]显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本实用新型的保护范围之中。
【权利要求】
1.一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，包括: 底板(4)，以及沿所述底板(4)长度方向顺次粘覆于所述底板(4)上的吸水纸(8)、硝酸纤维素包被膜(7)、单克隆抗体结合垫(6)以及样品垫(5);其中， 所述硝酸纤维素包被膜(7)粘覆于所述底板(4)的中间部位，且其上设置有相间隔的喷涂有胃蛋白酶原I单克隆抗体II的检测带(9)和喷涂有兔抗鼠IgG抗体的质控带(11)，所述检测带(9 )靠近所述单克隆抗体结合垫(6 )，所述质控带(11)靠近所述吸水纸(8 ); 所述单克隆抗体结合垫(6)是喷涂有表面修饰了胃蛋白酶原I单克隆抗体I的荧光微球的聚酯膜； 所述吸水纸(8)、所述硝酸纤维素包被膜(7)、所述单克隆抗体结合垫(6)以及所述样品垫(5)之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
2.根据权利要求1所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的粒径为10?lOOOnm。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，所述试纸条的宽度为0.3?2cm。
4.根据权利要求3所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，所述吸水纸(8)、所述硝酸纤维素包被膜(7)、所述单克隆抗体结合垫(6)以及所述样品垫(5)之间，依次与且仅与相邻部位部分重叠区域的重叠长度彼此独立的为I?5mm。
5.根据权利要求4所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，所述吸水纸(8)与所述硝酸纤维素包被膜(7)的所述部分重叠区域在所述硝酸纤维素包被膜(7)的上侧。
6.根据权利要求5所述的一种检测胃蛋白酶原I的试纸条，其特征在于，所述底板(4)是塑料底板。
7.—种检测胃蛋白酶原I的试剂卡，其特征在于，包括权利要求1-6之一所述的试纸条以及包覆所述试纸条的外壳；所述外壳进一步包括底座(I)和卡盖(2)，所述卡盖(2)上设置有观察口(10)和加样口(12)，以露出试纸条的局部区域；所述加样口(12)开口于所述样品垫(5)上部，以露出部分或全部所述样品垫(5)区域；所述观察口(10)开口于所述包被膜(7)上侧，以露出全部所述检测带(9)和所述质控带(11)。
8.根据权利要求7所述的检测胃蛋白酶原I的试剂卡，其特征在于，所述底座(I)为塑料底座。
9.根据权利要求7所述的检测胃蛋白酶原I的试剂卡，其特征在于，所述卡盖(2)为塑料卡盖。
【文档编号】G01N33/577GK203385732SQ201320495844
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年8月14日 优先权日:2013年8月14日
【发明者】黄飚, 周衍, 邹霈, 蒋叶华, 王翌, 张珏, 张艺, 周彬 申请人:江苏省原子医学研究所