一种荧光传感器，其制备方法，用途以及检测Heparin分子的方法
【专利摘要】本发明涉及一种荧光传感器，其制备方法，用途以及检测Heparin分子的方法，其为一种SG荧光染料与无标记DNA构型转换构成的荧光传感器，利用目标Heparin分子与Coralyne的静电作用，应用于目标Heparin分子的检测。包括如下步骤：将DNA溶解在Tris-HCl缓冲溶液中；在含有DNA的缓冲溶液中加入SG并培养；再加入配置好的Coralyne溶液并培养，得到DNA-SG-Coralyne的混合物；将已配置好的Heparin溶液放入到含有DNA-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中并培养；得到基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的传感器制备成功。本荧光传感器的制备方法，使用的是无标记的DNA，操作简单，成本很低，避免任何化学标记和修饰。且具有操作简单，灵敏度高，检测限低的特点。
【专利说明】—种荧光传感器，其制备方法，用途以及检测Hepar in分子的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于荧光传感器【技术领域】，具体涉及用SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器及其应用于目标DNA分子的检测，具体涉及一种荧光传感器，其制备方法，用途以及检测Heparin分子的方法。
【背景技术】
[0002]21世纪是生命科学的世纪，多糖作为一种生物活性物质，在诸多方面有着重要作用，特别是在医学应用方面更为广泛。多糖的生物荧光传感器的研究已成热点，比如肝素(Heparin)。有很多与此相关的研究致力于无标记的DNA的突光分析方法检测Heparin。Heparin在体内体外都有抗凝作用，可以防治静脉血栓栓塞，调节各种正常生理和病理过程，如凝血和炎症反应，细胞生长，免疫防御，脂质运输和新陈代谢等，是目前最为广泛的抗凝药物。但如果在使用过程中过量会产生副作用，比如出血和血小板减少。因此开发高选择性、高灵敏性、简单及无标记的生物传感器用于检测Heparin至关重要。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种荧光传感器，其制备方法，用途以及检测!teparin分子的方法，通过一种操作简单，成本很低的制备方法得到的荧光传感器，实现对Heparin灵敏性、特异性的检测。具体技术方案如下:
[0004]一种荧光传感器的制备方法，包括如下步骤:
[0005](I)将DNA溶解在Tris-HCl缓冲溶液中；
[0006](2)在含有DNA的缓冲溶液中加入SG并培养；
[0007](3)再加入配置好的Coralyne溶液并培养，得到DNA-SG-Coralyne的混合物；
[0008](4)将已配置好的Heparin溶液放入到含有DNA-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中并培养；
[0009](5)得到基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的传感器制备成功。
[0010]进一步地，步骤⑴中DNA序列为A4Q，Tris-HCl缓冲溶液pH值为7.0。
[0011]进一步地，步骤(1)所得溶液在-4°C下保存备用。
[0012]进一步地,步骤(1)和(2)之间还包括步骤:对所用的物质如coralyne,heparin,SG配置成相应的浓度。
[0013]进一步地，步骤(2)中混合溶液在35°C的干燥箱里培养10分钟。
[0014]进一步地，步骤⑶中在48°C的干燥箱里培养10分钟，得A4tl-SG-Coralyne的混合物。
[0015]进一步地,步骤(4)中Heparin溶液放入到含有A4tl-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中，并在45°C的干燥箱里培养10分钟。
[0016]一种荧光传感器，采用如上述的方法制备得到。
[0017]一种荧光传感器的用途，进一步地，用于检测Ifeparin分子。
[0018]一种上述荧光传感器检测Heparin分子的方法，进一步地，基于静电作用的简单无标记的突光分析法对不同浓度的Heparin进行定量检测:Heparin的浓度不同，Heparin从A4ci上剥夺下的Coralyne的量也不同，随着Heparin浓度的增加，SG的突光强度会逐渐变弱。
[0019]与目前现有技术相比，本发明提供了基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器及其应用于Ifeparin的检测，本发明使用SG与双链DNA的嵌插作用，利用coralyne 与 Att 的 DNA 中的 A 结合形成 adenine2-coralyne_adenine2 混合物改变 DNA的结构，制备出基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器，利用Heparin和coralyne之间的静电作用,此传感器实现了对Heparin灵敏性、特异性的检测。
[0020]具体来说，本荧光传感器的制备方法，使用的是无标记的DNA，操作简单，成本很低，避免任何化学标记和修饰。通过Heparin与coralyne之间的静电作用，能够制备出检测Heparin的传感器。结果显示此传感器对Heparin的检测结果令人满意,约从20到10nM有较灵敏的检测，且具有操作简单，灵敏度高，检测限低的特点。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1 (a) (b)为每一步加入不同物质过程中SG的荧光光谱图。
[0022]a存在SG时的荧光光谱图。
[0023]b存在SG和coralyne时的荧光光谱图。
[0024]c存在SG, coralyne和Heparin时的突光光谱图。
[0025]图2(a) (b) (c) (d)为不同物质浓度(存在与不存在Heparin情况下)对应的突光光谱。
[0026]其中(A)不同浓度SG (不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0027](B)不同浓度coralyne (不存在Heparin)对应的突光光谱
[0028](C)不同浓度NaCl (不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0029](D)不同浓度NaCl (存在Heparin)对应的荧光光谱
[0030]图3(a) (b) (c) (d) (e) (f)为反应时间,温度，pH(存在于不存在Heparin情况下)对应的荧光光谱。
[0031]其中(A)不同反应时间(不存在H印arin)对应的荧光光谱
[0032](B)不同反应时间(不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0033](C)不同温度(不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0034](D)不同温度(不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0035](C)不同pH(不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0036](D)不同pH(不存在Heparin)对应的荧光光谱
[0037]图4为基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器的选择性考察。
[0038]图5 (a) (b)为基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器检测Heparin相关结果图
[0039]其中:(A)不同浓度H印arin对应荧光光谱
[0040](B)荧光强度与不同Heparin浓度对数间线性关系
[0041]图6为基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器检测Heparin的示意图
【具体实施方式】
[0042]下面根据附图对本发明进行详细描述，其为本发明多种实施方式中的一种优选实施例。
[0043]实施例一:
[0044]基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器制备及应用的步骤如下:
[0045]a、将购买的DNA序列(A4tl)溶解在0.05M Tris-HCl (pH7.0)缓冲溶液中，并在_4°C下保存备用。
[0046]b、对所用的物质如coralyne, heparin, SG配置成相应的浓度。
[0047]C、在含有DNA A4tl的缓冲溶液中加入SG并在35°C的干燥箱里培养此混合溶液10分钟；再加入配置好的Coralyne溶液，在48 °C的干燥箱里继续培养10分钟，得A40-SG-Coralyne 的混合物。
[0048]d、将已配置好的Ifeparin溶液放入到含有A4tl-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中，在45°C的干燥箱里培养10分钟,利用Coralyne和Heparin之间的静电作用，基于SG突光染料与无标记DNA构型转换的传感器制备成功。
[0049]e、由于Heparin的浓度不同，Heparin从A4tl上剥夺下的Coralyne的量也会不同，随着Heparin浓度的增加，SG的荧光强度会逐渐变弱。因此此传感器可对不同浓度的Heparin进行定量检测。
[0050]实施例二:
[0051]一种基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的荧光传感器制备方法，包括如下步骤:
[0052](I) DNA序列:A40，溶解在缓冲溶液中，并保存备用；
[0053](2)对所用的物质如coralyne, heparin, SG配置成相应的浓度
[0054](3)在含有DNA A40的缓冲溶液中加入SG并培养得到混合溶液；
[0055](4)再加入制备好的Coralyne溶液得到A4tl-SG-Coralyne的混合物。利用A4。和SG之间的静电作用，基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的传感器制备成功
[0056]步骤(I)中，将DNA序列溶解在(λ 05M Tris-HCl (pH7.0)缓冲溶液中，并在_4°C下保存备用。步骤(2)中所配置溶液在步骤(2)定容之后使用。步骤(3)在含有DNA A4tl的缓冲溶液中加入SG并培养此混合溶液10分钟在35°C的干燥箱里；步骤(4)加入配置好的Coralyne溶液,在48°C的干燥箱里继续培养10分钟,得DNA-SG-Coralyne的混合物。
[0057]上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种荧光传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)将DNA溶解在TriS-HCl缓冲溶液中； (2)在含有DNA的缓冲溶液中加入SG并培养； (3)再加入配置好的Coralyne溶液并培养，得到DNA-SG-Coralyne的混合物； (4)将已配置好的Ifeparin溶液放入到含有DNA-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中并培养； (5)得到基于SG荧光染料与无标记DNA构型转换的传感器制备成功。
2.如权利要求1所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(I)中DNA序列为A40, Tris-HCl缓冲溶液pH值为7.0。
3.如权利要求1或2所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(I)所得溶液在-4 °C下保存备用。
4.如权利要求1-3中任一项所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(I)和(2)之间还包括步骤:对所用的物质如coralyne, heparin, SG配置成相应的浓度。
5.如权利要求1-4中任一项所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中混合溶液在35°C的干燥箱里培养10分钟。
6.如权利要求1-5中任一项所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中在48°C的干燥箱里培养10分钟，得A4tl-SG-Coralyne的混合物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中Heparin溶液放入到含有A4c1-SG-Coralyne混合物的缓冲溶液中，并在45°C的干燥箱里培养10分钟。
8.一种荧光传感器，其特征在于，采用如权利要求1-7所述的方法制备得到。
9.一种如权利要求8所述荧光传感器的用途，其特征在于，用于检测Heparin分子。
10.一种如权利要求8所述突光传感器检测Heparin分子的方法,其特征在于，基于静电作用的简单无标记的突光分析法对不同浓度的Heparin进行定量检测:Heparin的浓度不同，Heparin从A4tl上剥夺下的Coralyne的量也不同，随着Heparin浓度的增加，SG的突光强度会逐渐变弱。
【文档编号】G01N21/64GK104076014SQ201410310220
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】王广凤, 江红 申请人:安徽师范大学