一种翼首草的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种翼首草的检测方法。本发明的方法可以同时对翼首草中马钱苷、熊果酸和/或齐墩果酸进行检测，并通过简单的流动相梯度变化，即能实现极性差别较大的马钱苷和熊果酸、齐墩果酸的分离和含量测定，进一步满足实际检测需求。
【专利说明】-种翼首草的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种翼首草的检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 翼首草为川续断科翼首花属植物匙花叶翼首草Pteroc巧halus hookeri (Clarke) 化eck，W根或带根全草入药，是藏族习用药材。现代研究表明；翼首草主要含皂巧、环帰 離聰等化学成分，并且认为齐域果酸、熊果酸是翼首草中主要的活性成分，近几年的研究表 明，具有显著抗炎效果的马钱巧也是翼首草的主要有效成分之一。
[0003] 现有技术中对翼首草的检测方法研究较多，中国专利CN103792303A翼首草药材 的检测方法，提供了翼首草药材的检测方法，它是通过超快速液相色谱法UFLC进行测定 的，流动相；流动相A为0. 2 %磯酸水溶液，流动相B为己膳，其梯度程序如下；0 - lOmin， 10 % 一 19 % B ;10 一 17min，19 % 一 30 % B ;17 一 25min，30 % 一 100 % B。中国专利 CN102645507A提供一种清肺止咳制剂的检测方法，所述清肺止咳剂的原料药包含余甘子、 木香和翼首草，其特征在于，该方法通过薄层色谱法鉴别所述清肺止咳制剂中的余甘子、木 香和/或翼首草，其中对翼首草的展开剂为环己焼-己醇。但上述文献均为针对齐域果酸 和熊果酸的薄层或含量检测方法，未发现能够同时检测马钱巧、熊果酸和/或齐域果酸的 检测方法，造成翼首草检测结果与实际需求偏差较大，无法对其药效成分做出较为全面的 评价，且检测方法复杂，操作困难。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种翼首草的检测方法。该方法能够 同时对马钱巧、熊果酸和/或齐域果酸进行检测。
[0005] 本发明的技术方案如下：
[0006] 一种翼首草的检测方法，包括如下鉴别和/或含量检测方法：
[0007] 鉴别：
[0008] 取翼首草粉末0. 2-lg，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇20-80ml，密塞，回流或超声 处理0. 5-1.化，放冷，滤过，滤液浓缩至2-lOml，作为供试品溶液；另取马钱巧、齐域果酸对 照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg马钱巧和0. 1-0. 3mg齐域果酸的混合溶液，作为对照 品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2-10 y 1，分别点于同一 娃胶G薄层色谱板上，W体积份数比为4-7 ;1-3 ;1-3的环己焼-氯仿-甲醇为展开剂，展 开，取出，瞭干，喷W体积百分比为1%的香草酵硫酸己醇溶液，105C加热至斑点显色清晰， 日光下检视；供试品图谱中，在与对照溶液相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[000引含量检测：
[0010] 色谱条件与系统适用性试验：W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；梯 度洗脱，甲醇-己膳-体积份数比0.05 %磯酸水溶液为流动相，梯度变化如下： Omin - 15min - 20min - 60min，甲醇的体积百分比变化为 28%- 28%- 28%- 28%,己 膳的体积百分比变化为0% - 0% - 62% - 62%，体积份数比0. 05%磯酸水溶液的体积百 分比变化为72 % - 72 % - 10 % - 10 %，检测波长为210-230nm ;理论板数按马钱巧峰计算 不低于2000 ;
[0011] 对照品溶液的制备；取马钱巧对照品、齐域果酸对照品、熊果酸对照品，加甲醇制 成每Iml含马钱巧0. Img、齐域果酸0. Img、熊果酸0. 2mg的混合溶液，即得对照品溶液；
[0012] 供试品溶液的制备；取翼首草粉末2-8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，加入 20-70ml甲醇，密塞，称定重量，超声提取0. 5-化或回流提取1-化，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10-30ml，浓缩至2-7ml，即得；
[0013] 测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20 y 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0014] 本发明优选的，上述翼首草的检测方法，其中含量检测方法中的供试品溶液的制 备为：取翼首草粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，加入50ml甲醇，密塞，称定重量，超 声处理比，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml， 浓缩至5ml，即得；
[0015] 测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0016] 本发明还优选的，上述翼首草的检测方法，其中鉴别方法为：
[0017] 取翼首草粉末0. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超声处理比，放冷， 滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取马钱巧、齐域果酸对照品，加甲醇制成每Iml 含马钱巧0. Img、齐域果酸0. 3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取 上述二种溶液各5 y 1，分别点于同一娃胶G薄层色谱板上，W体积份数比为5:2:2的环己 焼-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W体积百分比为1%香草酵硫酸己醇溶液， 105C加热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品图谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
[0018] 本发明的有益效果
[0019] 1、本发明同时对翼首草中的马钱巧、熊果酸和齐域果酸进行鉴别或含量检测，对 其有效成分的检测更加全面，进一步满足实际检测需求。
[0020] 2、齐域果酸、熊果酸的极性较小，而马钱巧的极性较大，二者的保留时间相差甚 大，常规的HPLC条件难W同时检测，本发明通过简单的梯度变化即能较好的完成检测，且 操作简单。
[0021] 3、鉴别实验中，因为马钱巧和齐域果酸的极性相差甚大，故展开剂中甲醇的比例 对展开效果有很大的影响，本发明通过大量试验并付出了创造性的劳动，优选出了展开剂 的最佳比例。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1为翼首草药材的薄层色谱图谱；
[002引 图2为空白溶剂的HPLC图谱；
[0024] 图3为混合对照溶液的HPLC图谱；
[002引图4为翼首草样品的HPLC图谱；
[0026] 其中，图I中，I为马钱巧为齐域果酸混合对照；2为翼首草样品（I) ;3为翼首草样 品（2) ;4为翼首草样品（3);
[0027] 图3中，1为马钱巧对照峰；2为齐域果酸对照峰；3为熊果酸对照峰；
[002引 图2-图4的横坐标是时间，单位：分钟（min);纵坐标是电压，单位：毫伏（mv)。
【具体实施方式】
[0029] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0030] 实验例和实施例所用的翼首草均为金巧藏药股份有限公司提供，批号20131201、 20131202 和 20131203。
[0031] 实验例1 ;翼首草鉴别实验
[0032] 取翼首草粉末0. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超声处理比，放冷， 滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取马钱巧、齐域果酸对照品适量，加甲醇制成每 Iml含马钱巧0. Img、齐域果酸0. 3mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸 取上述二种溶液各5yl，分别点于同一娃胶G薄层色谱板上，W体积份数比为5:2:2的环己 焼-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W体积比1 %香草酵硫酸己醇溶液，105C加 热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品图谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。结果见图1。
[003引结果分析；展开剂中甲醇的比例对展开效果有很大的影响，当甲醇比例较小，马钱 巧难W展开甚至未展开，而当甲醇比例较大时，齐域果酸斑点展开过快至溶剂前沿。因此， 实验发现展开剂比例在环己焼-氯仿-甲醇（体积比4-7 :1-3-1-3)范围内展开效果较好， 其中环己焼-氯仿-甲醇（体积比5:2:2)最佳。
[0034] 实验例2 ;翼首草含量检测实验 [00巧]1.仪器、试药和供试样品
[0036] 仪器；高效液相色谱仪；日立心2100粟，L-2400紫外检测器；岛津AUW220D电子天 平。
[0037] 对照品；马钱巧对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111640-201005);齐域 果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505);熊果酸对照品（中国食品 药品检定研究院，批号：110742-201220)。
[0038] 2.检测波长的选择
[0039] 分别取马钱巧对照品溶液、齐域果酸对照品溶液、熊果酸对照品溶液及混合对照 溶液，于190-600nm波长范围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定210-230、尤其220nm为 检测波长。
[0040] 3.流动相选择
[0041] 研究发现，马钱巧极性较大，齐域果酸与熊果酸为同分异构体，极性较小。在反相 色谱系统中，采用等度洗脱，马钱巧与齐域果酸、熊果酸保留时间差异很大，因此，需采用梯 度洗脱。研究表明，流动相中有机相（甲醇、己膳）比例越高，齐域果酸与熊果酸分离度越 好，而有机相比例提高，马钱巧保留时间变化较大，难W掌控，因此，本发明W甲醇（A)-己 膳炬)-体积份数比0.05%磯酸水溶液（C)为流动相，梯度洗脱，梯度变化见
[0042] 表1流动相梯度变化
[0043]
【权利要求】
1. 一种翼首草的检测方法，特征在于，包括如下鉴别和/或含量检测方法： 鉴别： 取翼首草粉末〇. 2-lg，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇20-80ml，密塞，回流或超声处理 0. 5-1. 5h，放冷，滤过，滤液浓缩至2-10ml，作为供试品溶液；另取马钱苷、齐墩果酸对照 品，加甲醇制成每lml含0. 1-0. 3mg马钱苷和0. 1-0. 3mg齐墩果酸的混合溶液，作为对照品 溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2-10 μ 1，分别点于同一硅 胶G薄层色谱板上，以体积份数比为4-7 :1-3 :1-3的环己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以体积百分比为1%的香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日 光下检视；供试品图谱中，在与对照溶液相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量检测： 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；梯度 洗脱，甲醇-乙腈-体积份数比〇. 05 %磷酸水溶液为流动相，梯度变化如下： Omin - 15min - 20min - 60min，甲醇的体积百分比变化为 28% - 28% - 28% - 28%,乙 腈的体积百分比变化为62%- 62%，体积份数比0. 05%磷酸水溶液的体积百 分比变化为72% - 72% - 10% - 10%，检测波长为210-230nm ;理论板数按马钱苷峰计算 不低于2000 ; 对照品溶液的制备：取马钱苷对照品、齐墩果酸对照品、熊果酸对照品，加甲醇制成每 lml含马钱苷0. lmg、齐墩果酸0. lmg、熊果酸0. 2mg的混合溶液，即得对照品溶液； 供试品溶液的制备：取翼首草粉末2-8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，加入20-70ml 甲醇，密塞，称定重量，超声提取0. 5-2h或回流提取l-2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减 失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10_30ml，浓缩至2-7ml，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
2. 根据权利要求1所述的翼首草的检测方法，特征在于，含量检测方法中的供试品溶 液的制备为：取翼首草粉末5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，加入50ml甲醇，密塞，称定 重量，超声处理lh，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 25ml，浓缩至5ml，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
3. 根据权利要求1或2所述的翼首草的检测方法，特征在于，鉴别方法为： 取翼首草粉末〇. 5g，置具塞的锥形瓶中，加入甲醇50ml，密塞，超声处理lh，放冷，滤 过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取马钱苷、齐墩果酸对照品，加甲醇制成每lml含 马钱苷0. lmg、齐墩果酸0. 3mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述 二种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比为5:2:2的环己烷-氯 仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积百分比为1%香草醛硫酸乙醇溶液，l〇5°C加 热至斑点显色清晰，日光下检视；供试品图谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。
【文档编号】G01N30/90GK104237446SQ201410403099
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月15日 优先权日:2014年8月15日
【发明者】班玛才仁, 孙绪丁, 任松鹏, 赵丽丽 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司