一种还原糖检测方法
【专利摘要】一种还原糖检测方法，在250ml的三角瓶中依次加入10?15mlA液、10?15mlB液、0.5?1.5ml样品液(葡萄糖当量在30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml;加热煮沸2?5min后，迅速冷却到室温，加入5?15mlC液、5?15mlD液；用E液滴定，接近终点即颜色为谈黄色时，加2?3ml2%淀粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变为粉红色，即为终点，本发明的有益效果是无需进行热滴定，操作简单安全，葡萄糖标准溶液消耗少、操作快速、数据准确。
【专利说明】一种还原糖检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于检测【技术领域】，更具体地说是一种发酵过程中还原糖含量的检测方 法。
【背景技术】
[0002] 还原糖是发酵、食品领域最基本的工业原料，还原糖快速、准确的测定对生产过程 控制和食品质量检测具有重要的意义，目前普遍采用的检测方法是菲林试剂法。还原糖与 斐林试剂中的CuS04中的二价铜离子还原为一价铜，反应终点由次甲基蓝指示，根据一定 量的斐林试剂完全还原所需的还原糖量，可计算所加入样品中还原糖含量。但是，现有的菲 林试剂法检测需要将样品在煮沸的状态下进行滴定操作，操作难度高，干扰因素多，且标准 糖溶液消耗大，使用费用高。
【发明内容】
[0003] 为了解决上述问题，本发明提供了一种无需进行热滴定，操作简单，标准糖溶液消 耗小，数据准确，可以快速检测还原糖含量的还原糖检测方法，其具体方法步骤为： 1.试剂的配制： (1) A液：称取硫酸铜（CuS04*5H20) 60?80g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (2) B液：称取酒石酸钾钠（KNaC4H406*4 H20) 300?400g和氢氧化钠50?150. 0g， 用蒸馏水充分溶解并稀释到1L ; (3) C液：称取碘化钾200?400g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (4) D液：量取含量为98%的浓硫酸100?200ml，加入蒸馏水中，充分混合，冷却定容 至1L ; (5) E液：称取AR级硫代硫酸钠（Na2S203*5H20) 20?30g (或16g无水硫代硫酸钠）， 加入碳酸钠〇. 1?〇. 3g于烧杯中，用蒸馈水充分溶解，定容至1L ; (6) 淀粉指示剂（2%):称取可溶性淀粉1. 0?3. 0g用煮沸的蒸馏水100ml冲溶，加入 少许水杨酸防腐； (7) 葡萄糖标准溶液（350g/L):称取无水葡萄糖35g用蒸馏水溶解后定容至100ml。
[0004] 2.检测步骤 (1) 样品的测定 在250ml的三角瓶中依次加入10?15mlA液、10?15mlB液、0· 5?1. 5ml样品液(葡 萄糖当量在30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml ;加热煮沸2?5min 后，迅速冷却到室温，加入5?15 ml C液、5?15 ml D液；用E液滴定，接近终点即颜色 为谈黄色时，加2?3ml 2%淀粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变 为粉红色，即为终点，E液滴定消耗体积记作：' (ml);在测定的同时，做空白试验（即不加 试验样品，加蒸馏水30ml )，空白试验E液滴定体积记作：％ (ml); (2) F值测定 取350g/L的标准葡萄糖溶液5. OmL，加蒸馏水定容至250mL ;量取葡萄糖稀释液5. OmL (含有葡萄糖35mg)，按步骤（1)中还原糖的测定操作，得到相应的E液滴定消耗体积记作： V2 (ml)； (3)结果计算 F=10. 79(V〇- Y,)/ (V〇- V2) 式中： F值：用来查阅糖值表的相关系数； 10. 79 :35mg葡萄糖查糖值表所对应的还原糖值； %:空白试验消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); ' :样品消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); V2 :35mg葡萄糖消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); 通过查"葡萄糖含量对照表"得F值对应还原糖值G (g/L)。
[0005] 本发明的有益效果是无需进行热滴定，操作简单安全，葡萄糖标准溶液消耗少、操 作快速、数据准确。
【具体实施方式】
[0006] 本发明所述的还原糖检测方法步骤如下： 实施例1 3.试剂的配制： (1) A液：称取硫酸铜（CuS04*5H20) 60g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (2) B液：称取酒石酸钾钠（KNaC4H406*4 H20) 300g和氢氧化钠50g，用蒸馏水充分溶 解并稀释到1L ; (3) C液：称取碘化钾200g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (4) D液：量取含量为98%的浓硫酸100ml，加入蒸馏水中，充分混合，冷却定容至1L ; (5) E液：称取AR级硫代硫酸钠（Na2S203*5H20) 20g (或16g无水硫代硫酸钠)，加入 碳酸钠〇. lg于烧杯中，用蒸馈水充分溶解，定容至1L ; (6) 淀粉指示剂（2%):称取可溶性淀粉1. 0g用煮沸的蒸馏水100ml冲溶，加入少许水 杨酸防腐； (7) 葡萄糖标准溶液（350g/L):称取无水葡萄糖35g用蒸馏水溶解后定容至100ml。
[0007] 4.检测步骤 (1) 样品的测定 在250ml的三角瓶中依次加入10mlA液、10mlB液、1. 5ml样品液(葡萄糖当量在 30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml ;加热煮沸2?5 min后，迅速冷却 到室温，加入5 ml C液、5 ml D液；用E液滴定，接近终点即颜色为谈黄色时，加2ml 2%淀 粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变为粉红色，即为终点，E液滴定 消耗体积记作A (ml);在测定的同时，做空白试验（即不加试验样品，加蒸馏水30ml)，空 白试验E液滴定体积记作：Vd (ml); (2) F值测定 取350g/L的标准葡萄糖溶液5. OmL，加蒸馏水定容至250mL ;量取葡萄糖稀释液5. OmL (含有葡萄糖35mg)，按步骤（1)中还原糖的测定操作，得到相应的E液滴定消耗体积记作： V2 (ml)； (3)结果计算 F=10. 79(V〇- Y,)/ (V〇- V2) 式中： F值：用来查阅糖值表的相关系数； 10. 79 :35mg葡萄糖查糖值表所对应的还原糖值； %:空白试验消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); ' :样品消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); V2 :35mg葡萄糖消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); 通过查"葡萄糖含量对照表"得F值对应还原糖值G (g/L)。
[0008] 实施例2 1.试剂的配制： (1) A液：称取硫酸铜（CuS04*5H20) 69. 2g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (2) B液：称取酒石酸钾钠（KNaC4H406*4 H20)346g和氢氧化钠100g，用蒸馏水充分溶解 并稀释到1L ; (3) C液：称取碘化钾300g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (4) D液：量取含量为98%的浓硫酸142ml，加入蒸馏水中，充分混合，冷却定容至1L ; (5) E液：称取AR级硫代硫酸钠（Na2S203*5H 20) 26g (或16g无水硫代硫酸钠)，加入碳 酸钠〇. 2g于烧杯中，用蒸馏水充分溶解，定容至1L ; (6) 淀粉指示剂（2%):称取可溶性淀粉2. 0g用煮沸的蒸馏水100ml冲溶，可加入少许 水杨酸防腐。
[0009] (7)葡萄糖标准溶液（350g/L):称取无水葡萄糖35g用蒸馏水溶解后定容至 100ml〇
[0010] 2.检测步骤 (1) 样品的测定 在250ml的三角瓶中依次加入10mlA液、10mlB液、lml样品液(葡萄糖当量在 30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml ;加热煮沸2min后，迅速冷却到室 温，加入10 ml C液、10 ml D液；用E液滴定，接近终点即颜色为谈黄色时，加2. 5ml 2%淀 粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变为粉红色，即为终点，E液滴定 消耗体积记作A (ml);在测定的同时，做空白试验（即不加试验样品，加蒸馏水30ml)，空 白试验E液滴定体积记作：Vd (ml); (2) F值测定 取350g/L的标准葡萄糖溶液5. OmL，加蒸馏水定容至250mL ;量取葡萄糖稀释液5. OmL (含有葡萄糖35mg)，按步骤（1)中还原糖的测定操作，得到相应的E液滴定消耗体积记作： V2 (ml)； (3) 结果计算 F=10.79(V〇- V!)/ (V V2) 式中： F值：用来查阅糖值表的相关系数； 10. 79 :35mg葡萄糖查糖值表所对应的还原糖值； %:空白试验消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); ' :样品消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); V2 :35mg葡萄糖消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); 通过查"葡萄糖含量对照表"得F值对应还原糖值G (g/L)。
[0011] 实施例3 5.试剂的配制： (1) A液：称取硫酸铜（CuS04*5H20) 80g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (2) B液：称取酒石酸钾钠（KNaC4H406*4 H20)400g和氢氧化钠150. 0g，用蒸馈水充分 溶解并稀释到1L ; (3) C液：称取碘化钾400g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (4) D液：量取含量为98%的浓硫酸200ml，加入蒸馏水中，充分混合，冷却定容至1L ; (5) E液：称取AR级硫代硫酸钠（Na2S203*5H20) 30g (或16g无水硫代硫酸钠)，加入 碳酸钠〇. 3g于烧杯中，用蒸馈水充分溶解，定容至1L ; (6) 淀粉指示剂（2%):称取可溶性淀粉3. 0g用煮沸的蒸馏水100ml冲溶，加入少许水 杨酸防腐； (7) 葡萄糖标准溶液（350g/L):称取无水葡萄糖35g用蒸馏水溶解后定容至100ml。
[0012] 6.检测步骤 (1) 样品的测定 在250ml的三角瓶中依次加入15mlA液、15mlB液、1. 5ml样品液(葡萄糖当量在 30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml ;加热煮沸2?5 min后，迅速冷却 到室温，加入15 ml C液、15 ml D液；用E液滴定，接近终点即颜色为谈黄色时，加3ml 2% 淀粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变为粉红色，即为终点，E液滴 定消耗体积记作A (ml);在测定的同时，做空白试验（即不加试验样品，加蒸馏水30ml)， 空白试验E液滴定体积记作：V。（ml); (2) F值测定 取350g/L的标准葡萄糖溶液5. OmL，加蒸馏水定容至250mL ;量取葡萄糖稀释液5. OmL (含有葡萄糖35mg)，按步骤（1)中还原糖的测定操作，得到相应的E液滴定消耗体积记作： V2 (ml)； (3) 结果计算 F=10.79(V〇- V!)/ (V V2) 式中： F值：用来查阅糖值表的相关系数； 10. 79 :35mg葡萄糖查糖值表所对应的还原糖值； %:空白试验消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); ' :样品消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); V2 :35mg葡萄糖消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); 通过查"葡萄糖含量对照表"得F值对应还原糖值G (g/L)。
[0013] 本发明的有益效果是无需进行热滴定，操作简单安全，葡萄糖标准溶液消耗少、操 作快速、数据准确。
[0014] 葡萄糖含量对照表表格的使用方法： 先找到F值小数点前整数值对应位置，然后从该位置下侧找到F值十分位数值对应的 行，再从该位置右侧找到F值百分位数值对应的列，其表格中相应交叉的数值即为F值对 应的葡萄糖含量； 表中第一列为F整数值与十分位数值，F整数值对应的行为百分位数值； 如：F值为2. 35时，葡萄糖含量为7. 39。
[0015] 下表为葡萄糖含量对照表：。
【权利要求】
1. 一种还原糖检测方法，其特征在于：所述的还原糖检测方法，其具体方法步骤为： 试剂的配制： (1) A液：称取硫酸铜（CuS04*5H20) 60?80g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (2) B液：称取酒石酸钾钠（KNaC4H406*4 H20) 300?400g和氢氧化钠50?150. 0g， 用蒸馏水充分溶解并稀释到1L ; (3) C液：称取碘化钾200?400g，用蒸馏水充分溶解，稀释到1L ; (4) D液：量取含量为98%的浓硫酸100?200ml，加入蒸馏水中，充分混合，冷却定容 至1L ; (5) E液：称取AR级硫代硫酸钠（Na2S203*5H20) 20?30g (或16g无水硫代硫酸钠）， 加入碳酸钠〇. 1?〇. 3g于烧杯中，用蒸馈水充分溶解，定容至1L ; (6) 淀粉指示剂（2%):称取可溶性淀粉1. 0?3. 0g用煮沸的蒸馏水100ml冲溶，加入 少许水杨酸防腐； (7) 葡萄糖标准溶液（350g/L):称取无水葡萄糖35g用蒸馏水溶解后定容至100ml。
2. 检测步骤 (1) 样品的测定 在250ml的三角瓶中依次加入10?15mlA液、10?15mlB液、0· 5?1. 5ml样品液(葡 萄糖当量在30-80mg)，用蒸馏水将三角瓶中液体总体积补充到50ml ;加热煮沸2?5 min 后，迅速冷却到室温，加入5?15 mlC液、5?15 mlD液；用E液滴定，接近终点即颜色为 谈黄色时，加2?3ml 2%淀粉指示剂，被测溶液变为紫色，继续滴定使被测溶液由紫色变为 粉红色，即为终点，E液滴定消耗体积记作：' (ml);在测定的同时，做空白试验（即不加试 验样品，加蒸馏水30ml )，空白试验E液滴定体积记作：％ (ml); (2) F值测定 取350g/L的标准葡萄糖溶液5. OmL，加蒸馏水定容至250mL ;量取葡萄糖稀释液5. OmL (含有葡萄糖35mg)，按步骤（1)中还原糖的测定操作，得到相应的E液滴定消耗体积记作： V2 (ml)； (3) 结果计算 F=10.79(V〇- V!)/ (V V2) 式中： F值：用来查阅糖值表的相关系数； 10. 79 :35mg葡萄糖查糖值表所对应的还原糖值； %:空白试验消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); ' :样品消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); V2 :35mg葡萄糖消耗0. lmol/L硫代硫酸钠溶液的体积，单位为毫升（mL); 通过查"葡萄糖含量对照表"得F值对应还原糖值G (g/L)。
【文档编号】G01N31/16GK104215737SQ201410438460
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】李兆博, 邵明丽 申请人:梁山正大菱花生物科技有限公司