生食水产品寄生虫的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种生食水产品寄生虫的检测方法，包括如下步骤：（1)制备人工消化液后备用；(2)取肌肉用组织捣碎机打浆粉碎，置三角烧瓶中以1:8-1:12加入胃蛋白酶溶液，充分搅拌;(3)于35-39°C水浴箱或恒温箱中放置4-5h使肌肉充分消化，用吸管吸去上清液，再加入蒸馏水，搅拌后沉淀20-60min，再吸去上清液，反复清洗，直至上清液透明为止，沉淀备用；（4)取上述经处理的沉淀物，在显微镜下，边用蒸馏水稀释边观察寄生虫；(5)撕开肌肉、内脏后用肉眼直接检查体积较大的虫种。本发明操作简单、快速、结果可靠，能够有效的检测出寄生虫。
【专利说明】生食水产品寄生虫的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及农业和动物检疫【技术领域】，具体涉及一种生食水产品寄生虫的检测方 法。
【背景技术】
[0002] 我国先后有23个省份报道并殖吸虫感染主要就是生吃溪蟹喇蛄小龙虾囊蚴而感 染《人体寄生虫学》（第五版，詹希美主编）。异尖线虫病为海洋自然疫源性疾病，人吃了生 的海鱼片、鱼肝、鱼子、乌贼等而感染第三期幼虫。日本及太平洋地区20多个国家报告病 例。国内市售海鱼中，新鲜鲐鱼、小黄鱼、带鱼肌肉异尖线虫幼虫检出率接近100%，对东海 黄海30多种海捕鱼、软体动物检测，带幼虫率84%。广州管圆线虫，全球报道3000例，中间 宿主为田螺、蜗牛、蛙类、福寿螺等，人生吃中间宿主而感染第二三期幼虫，北京70例。
[0003] 目前缺乏一种有效检测、检出率高的生食水产品寄生虫的检测方法。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种有效检测、检出率高的生食水产品寄生虫 的检测方法。
[0005] 为了实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：本发明的一种生食水产品寄 生虫的检测方法，包括如下步骤：
[0006] (1)制备人工消化液：取胃蛋白酶5-50g，溶解于900ml去离子水中，加浓盐酸 7-70ml，再加去离子水至1000ml，充分混匀，放置15-30min后备用；
[0007] (2)制备待测样品：取生食水产品的肌肉用组织捣碎机打浆粉碎；
[0008] (3)将待测样品与胃蛋白酶溶液以1:8-1 :12的比例置于三角烧瓶中，充分搅拌； [0009] (4)在35-39°C的水浴箱或恒温箱中放置4-5h使待测样品充分消化，用吸管吸去 上清液，再加入蒸馏水，搅拌后沉淀20-60min，再吸去上清液，反复清洗，直至上清液透明为 止，沉淀备用；
[0010] (5)取上述经处理的沉淀物，在显微镜下，边用蒸馏水稀释边用观察寄生虫；
[0011] (6)撕开水产品的肌肉后用肉眼直接检查体积较大的虫种，必要时镜检鉴定。
[0012] 进一步地，在步骤（5)中，将沉淀物移至盛有少量生理盐水的培养皿中，轻微摇动 培养皿使沉淀集中于培养皿中部。
[0013] 进一步地，在步骤（5)中，所述寄生虫选自吸虫囊蚴、线虫、绦虫中的一种或几种 的组
[0014] 更进一步地，所述线虫为异尖线虫幼虫。
[0015] 进一步地，所述绦虫为阔节裂头绦虫或裂头蚴。
[0016] 进一步地，在步骤（3)中，使用搅拌机进行搅拌，所述搅拌机的转速为500-20001·/ min〇
[0017] 更进一步地，在步骤（5)中，所述显微镜的倍数为4X10-10X10。
[0018] 有益效果：本发明操作简单、快速、结果可靠，能够有效的检测出寄生虫。本发明 方法显著缩短了检测时间，减少了酶的用量，并能在较长时间内保持寄生虫的存活，检出率 高。适用于对寄生虫虫卵特别是吸虫囊蚴、线虫、绦虫的定量检测，适用的范围十分广泛。
[0019] 本发明优点在于：本发明通过采取上述促进胃蛋白酶和样品组织接触的措施，减 少了胃蛋白酶的用量；在实施过程中对寄生虫伤害小，分离出寄生虫后，能够在较长时间段 内保持寄生虫存活，便于后期相关操作；本发明的方法检出率高，与常规消化法相比无显著 差异。
[0020] (1)本发明的方法与常规消化法相比：1)增加了使用搅拌机对样品组织块搅拌的 步骤，利用工具加工使样品组织成为匀浆状组织液，便于胃蛋白酶液进行消化；
[0021] (2)在搅拌前向样品组织中加入少量胃蛋白酶液，使之在搅拌过程中能与样品充 分接触，可缩短酶液的反应时间。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1是异尖线虫幼虫的显微图；
[0023] 图2是异尖线虫幼虫的示意图；
[0024] 图3是在海鱼内脏表面取出异尖线虫幼虫的显微图；
[0025] 图4是蛙腿皮下组织内的裂头蚴的显微图；
[0026] 图5是曼氏迭宫绦虫裂头蚴的显微图；
[0027] 图6是卫氏并殖（肺）吸虫囊蚴的显微图。
【具体实施方式】
[0028] 以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明并不限于这 些实施例，该领域的技术熟练人员可以根据上述内容对本发明作出一些非本质的改进和调 整，都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
[0029] 实施例1
[0030] 如图1至图6所示，本发明的一种生食水产品寄生虫的检测方法，包括如下步骤：
[0031] (1)制备人工消化液：取胃蛋白酶5g，溶解于900ml去离子水中，加浓盐酸7ml，再 加去离子水至1000ml，充分混勻，放置15min后备用；
[0032] (2)制备待测样品：取生食水产品的肌肉用组织捣碎机打浆粉碎；
[0033] (3)将待测样品与胃蛋白酶溶液以1:8的比例置于三角烧瓶中，充分搅拌；使用搅 拌机进行搅拌，所述搅拌机的转速为500r/min。
[0034] (4)在35°C的水浴箱或恒温箱中放置4_5h使待测样品充分消化，用吸管吸去上清 液，再加入蒸馏水，搅拌后沉淀20min，再吸去上清液，反复清洗，直至上清液透明为止，沉淀 备用；
[0035] (5)取上述经处理的沉淀物，在显微镜下，边用蒸馏水稀释边用观察寄生虫；将沉 淀物移至盛有少量生理盐水的培养皿中，轻微摇动培养皿使沉淀集中于培养皿中部。所述 寄生虫选自吸虫囊蚴、线虫幼虫中的一种或几种的组合。所述显微镜的倍数为4X10。
[0036] (6)撕开水产品的肌肉后用肉眼直接检查体积较大的虫种，必要时镜检鉴定。
[0037] 表1为本发明检测的寄生虫指标；
[0038] 表 1
[0039]
【权利要求】
1. 一种生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 制备人工消化液：取胃蛋白酶5-50g，溶解于900ml去离子水中，加浓盐酸7-70ml， 再加去离子水至1000ml，充分混勻，放置15-30min后备用； (2) 制备待测样品：取生食水产品的肌肉用组织捣碎机打浆粉碎； (3) 将待测样品与胃蛋白酶溶液以1:8-1 :12的比例置于三角烧瓶中，充分搅拌； (4) 在35-39°C的水浴箱或恒温箱中放置4-5h使待测样品充分消化，用吸管吸去上清 液，再加入蒸馏水，搅拌后沉淀20-60min，再吸去上清液，反复清洗，直至上清液透明为止， 沉淀备用； (5) 取上述经处理的沉淀物，在显微镜下，边用蒸馏水稀释边用观察寄生虫； (6) 撕开水产品的肌肉后用肉眼直接检查体积较大的虫种，必要时镜检鉴定。
2. 根据权利要求1所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：在步骤（5)中， 将沉淀物移至盛有少量生理盐水的培养皿中，轻微摇动培养皿使沉淀集中于培养皿中部。
3. 根据权利要求1所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：在步骤（5)中， 所述寄生虫选自吸虫囊蚴、线虫、绦虫中的一种或几种的组合。
4. 根据权利要求3所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：所述线虫为异 尖线虫幼虫。
5. 根据权利要求3所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：所述绦虫为阔 节裂头绦虫或裂头蚴。
6. 根据权利要求1所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：在步骤（3)中， 使用搅拌机进行搅拌，所述搅拌机的转速为500-2000r/min。
7. 根据权利要求1所述的生食水产品寄生虫的检测方法，其特征在于：在步骤（5)中， 所述显微镜的倍数为4 X 10-10 X 10。
【文档编号】G01N21/84GK104215635SQ201410459314
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】张卫兵 申请人:南通市卫生监督所, 张卫兵