一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素o、抗环瓜氨酸肽抗体、c反应蛋白的检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒。本发明提供一种检测试剂盒，包括互相独立的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本发明所提供的检测试剂盒通过一次加样操作就能检测出样本中类风湿因子、抗链球菌溶血素O、抗环瓜氨酸肽抗体、CRP的含量，简化了操作过程。
【专利说明】一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸 肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血 素0、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002]类风湿因子（rheumatoidfactor,RF)可分为IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型（注： 在临床内科学中描述为四型，没有IgD型；但在实验室诊断学中描述为5型），是类风湿关 节炎血清中针对IgGFC片段上抗原表位的一类自身抗体，类风湿因子阳性患者较多伴有关 节外表现，如皮下结节及血管炎等。IgM型RF阳性率为60% -78%。
[0003] 机体因咽炎、扁桃体炎、猩红热、丹毒、脓皮病、风湿热等感染A组链球菌后，可产 生链球菌溶血素0抗体，即"Anti-Streptolysin0(AS0) "。
[0004] 抗环瓜氨酸肽抗体（CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对 类风湿性关节炎（RA)具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较 抗CCP抗体阴性者严重。类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA)是一种常见的慢 性自身免疫性疾病。在全世界大约有1%的人罹患此病。RA能引起关节的疼痛、僵直及肿 胀。在发病2年内即可能出现不可逆的骨关节损伤，并可引起多种并发症，如神经系统疾 病、心包炎、淋巴腺炎等。因此，及早诊断RA及给予缓解病情的药物治疗，对控制病情非常 重要。1998年，国外，首次报道的抗环瓜氨酸肽抗体（anti-cycliccirullinatedpeptide antibodies,抗CCP抗体）的检测，对RA具有较高的敏感性和特异性，是RA新的血清标志 物。
[0005] 人类C反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时 血浆中一些急剧上升的蛋白质（急性蛋白）。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而 起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天 然免疫过程中发挥重要的保护作用。关于CRP的研宄已经有70多年的历史，传统观点认为 CRP是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研宄揭示了CRP直接参与了炎症与动脉粥样 硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子与危险因子。
【发明内容】
[0006] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种定量检测类风湿因 子、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途， 用于解决现有技术中的问题。
[0007] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种定量检测类风湿因子（RF)、抗 链球菌溶血素O(ASO)、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白（CRP)的检测试剂盒，包括互相独立 的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素〇和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检 测试纸卡、抗链球菌溶血素〇和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的 从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述类风湿 因子检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含人变性IgG，所述抗链球菌溶血素0检测试纸 卡的荧光标记物结合垫上包含链球溶菌素〇(SLO)，所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的荧 光标记物结合垫上包含环瓜氨酸肽，所述C反应蛋白检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包 含C反应蛋白单克隆抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述荧光标记 物结合垫上的链球溶菌素0、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体采用荧光微球 记D
[0008] 优选的，所述荧光标记物结合垫上的链球溶菌素0、人变性IgG、C反应蛋白单克隆 抗体采用180nm焚光微球标记，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信号受背景干扰小，检测 灵敏度高，结果重复性好的优点。
[0009] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述的荧光标 记物结合垫还经过预处理，预处理中所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、 果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸 的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L，缓冲液的pH值为7. 2 - 7. 6。
[0010] 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
[0011]
【权利要求】
1. 一种定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检 测试剂盒，包括互相独立的类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸肽抗体 和C反应蛋白检测试纸卡，所述类风湿因子检测试纸卡、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸肽 抗体和C反应蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列 的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述类风湿因子检测试纸卡的荧光 标记物结合垫上包含人变性IgG，所述抗链球菌溶血素0检测试纸卡的荧光标记物结合垫 上包含链球溶菌素0,所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含环瓜 氨酸肽，所述C反应蛋白检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含C反应蛋白单克隆抗体，所 述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述荧光标记物结合垫上的链球溶菌素0、人 变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体采用荧光微球标记。
2. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于 离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。
3. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述类风湿因子检测试纸卡的检测 线上包被有人变性IgG，所述抗链球菌溶血素0检测试纸卡的检测线上包被有链球菌溶血 素〇,所述抗环瓜氨酸肽抗体检测试纸卡的检测线上包被有环瓜氨酸肽。
4. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白检测试纸卡的检测线 上包被有C反应蛋白单克隆抗体。
5. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各质控线上包被羊抗鼠抗体。
6. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上 盖，所述背卡设有四个平行的试纸卡卡槽，所述试纸卡分别嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上 盖设有四个测试窗和四个加样孔，所述三个测试窗的位置分别与四个试纸卡的检测线和质 控线的位置相配合，所述四个加样孔的位置与四个试纸卡的样品垫的位置相配合。
7. 如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述四个加样孔之间还设有连接四 个加样孔的横槽。
8. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于同时定量检测 类风湿因子、抗链球菌溶血素0、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的含量。
9. 如权利要求1-8任一权利要求所述的定量检测类风湿因子、抗链球菌溶血素0、抗环 瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤： 1) 用荧光微球标记的SL0、人变性IgG、环瓜氨酸肽、C反应蛋白单克隆抗体溶液分别喷 涂抗链球菌溶血素0、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白荧光标记物结合垫； 2) 在抗链球菌溶血素0硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂SL0及羊抗鼠抗 体，在类风湿因子硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂人变性IgG及羊抗鼠抗体， 在抗环瓜氨酸肽抗体硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂环瓜氨酸肽及羊抗鼠抗 体、在C反应蛋白硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂CRP单克隆及羊抗鼠抗体； 3) 将四套样品垫、步骤1制备的荧光标记物结合垫、步骤2制备的硝酸纤维素膜、吸水 垫依次粘贴在各自的底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测 试剂盒。
【文档编号】G01N33/577GK104459140SQ201410736412
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】段继凤 申请人:重庆乾德生物技术有限公司