专利名称：血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种血细胞分析用的溶血素，具体涉及一种用于血细胞分析用无氰白 细胞三分群环保型溶血素。
技术背景白细胞分类计数和血红蛋白浓度的测定是医学诊断中分析人体血液的重要指标。 血液中的白细胞有五种类型淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和 嗜碱性粒细胞，后三者统称为粒细胞，因此，将白细胞分为三个亚群即为淋巴细胞、 单核细胞、粒细胞。溶血素是测试血红蛋白含量(Hb)和白细胞计数(WBC)或白细胞分类的关键试 剂，属临床检验最常用的试剂之一，与稀释液等配套应用于血细胞分析仪。测定血红蛋白浓度和白细胞分类计数均需要稀释血液样本，并且需要特异的溶血素， 一方面，溶血素使红细胞(RBC)迅速溶解，释放出血红蛋白与溶血素结合形成稳定的血红蛋白衍生物，这种衍生物在特定波长下有最大吸收峰，通过测定其吸光度，乘以其摩尔浓度从而计算出血液样本中的血红蛋白的含量；同时溶解红细胞，进行白细胞计数，以免干扰白细胞的检测(因为血液中的红细胞数量远远多于白细胞数量)。 另一方面，为了保证白细胞三个亚群的检测，白细胞的体积也需要一定程度的改变， 此时的白细胞膜需要一定程度的溶解，以便释放出胞浆，同时维持细胞核的完整状态， 保持一定体积以便进行分群测定。1996年，国际血液学标准化委员会(International Council for StEmdardization in Hematology, ICSH )推荐氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法作为国际血红蛋白测 定标准方法，其主要特征为在波峰人二540nm,波谷人二504nm时，具有明显的波峰、波 谷，该法虽然能够较精确地测量Hb，但其最大的缺点就是，使用的氰化物有剧毒，对使 用者的人体健康和环境构成威胁。专利号为00106117.8的文献公开了一种无氰溶血素，该溶血素由十六垸基三甲基 溴化铵、聚乙二醇辛基苯基醚、医用级乙醇组成。专利号为03140211.9的文献公开了一种无氰化物溶血素及其使用方法，该溶血素 包括一种阳离子表面活性剂、 一种阴离子表面活性剂、 一种非离子表面活性剂。专利号为200610078645.2的文献公开了一种用于血细胞分析仪的无氰溶血素及其 制备方法，其组成为季铵盐、咪唑、碱金属氯化盐、水。专利号为200610012725.8的文献公开了一种环保无氰溶血剂，该溶血素由缓冲液与贮存液混合而成，其中缓冲液各组分配比为磷酸氢二钾15.63g/L、柠檬酸3.78g/L、 水为余量；贮存液各组分配比为十二垸基三甲基氯化铵100.00g/L，磷酸氢二钠 15.63g/L、柠檬酸3.78g/L，水为余量。上述专利适用于测定Hb而不能同时准确进行白细胞三分群。本发明既能与国际 血液学标准化委员会(International Council for Standardization in Hematology, ICSH )推荐的氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法高度相关，又能准确、快速的进行白 细胞三分群。发明内容本发明的目的在于克服现有技术不足，提供一种既能与国际血液学标准化委员会 (International Council for Standardization in Hematology, ICSH)推荐氰化高铁 血红蛋白(HiCN)测定法高度相关，又能准确、快速的进行白细胞三分群的血细胞分 析用无氰白细胞三分群环保型溶血素。为达到以上目的，本发明的技术方案为血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素，包括以下组分1、 月桂基硫酸钠(SLS)，其含量范围是0.5 5.0g/1。作为血细胞分析用无氰白细 胞三分群环保型溶血素的成分之一，其原理是，血液中各种Hb均可与低浓度SLS作 用，生成SLS-Hb棕红色化合物，其吸收曲线波峰在538nm。使用月桂基硫酸钠(SLS) 测定血红蛋白浓度的优点是操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，并且SLS 本身环保、无公害。使用月桂基硫酸钠(SLS)作为溶血素的成分之一，必须掌握好其 浓度，高浓度的月桂基硫酸钠(SLS)对白细胞的破坏过大。进一步，所述的月桂基硫酸钠(SLS)，优选浓度范围为1.0 2.0g/L。2、 季铵盐，表面活性剂含量范围是3.0 10.0g/L。进一步，季铵盐优选C,2 C,8 长链垸基季铵盐。季铵盐的作用是溶解红细胞，便于释放出血红蛋白(Hb)与SLS结 合，同时溶解掉红细胞以利于白细胞计数。3、 非离子表面活性剂，含量范围是0.5 5.0g/L。非离子表面活性剂主要作用是溶 解脂质，加快红细胞的溶解，并有效防止血液测定液的浑浊。4、 碱金属盐，含量范围是0.5 3.0g/L。碱金属盐的作用是调节溶血素的离子强度， 并增加表面活性剂的活性。5、 余量为去离子水。该发明所述血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素配合稀释液使用，溶解 红细胞，以利于白细胞计数；并使白细胞穿孔，胞浆流出，细胞膜收縮(检测内核)， 皱縮后的白细胞中，淋巴细胞最小，单核细胞稍大，嗜中性粒细胞反而以大细胞形式 存在；同时与红细胞中释放的血红蛋白结合，快速形成稳定的SLS-Hb棕红色化合物，用于测定血红蛋白浓度。本发明的溶血素能快速溶解红细胞，并释放出血红蛋白，溶血素与血红蛋白形成 稳定的血红蛋白衍生物，使浓度准确并容易测定，并且同时进行白细胞三分群测定。 本发明的溶血素既能与国际血液学标准化委员会(International Council for Standardization in Hematology, ICSH)推荐氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法高度 相关，又能准确、快速的进行白细胞三分群。
-图l:本发明实施例1的溶血素血红蛋白衍生物曲线2:本发明实施例1的溶血素与HiCN手工法测定血红蛋白浓度结果比较3:本发明实施例1的溶血素与镜检白细胞总数结果比较4:本发明实施例1的溶血素与镜检淋巴细胞结果比较5:本发明实施例1的溶血素与镜检单核细胞结果比较6:本发明实施例1的溶血素与镜检粒细胞结果比较图
具体实施例方式
实施例l:按下列比例配制本溶血素(1) 月桂基硫酸钠 1.7g(2) 十六垸基三甲基溴化铵 5.8g(3) 乳化剂OP 0.8g(4) 氯化钾 1.4g(5) 去离子水 1000ml将月桂基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、乳化剂OP、氯化钾按上述比例混合， 加去离子水至1000ml，室温下搅拌至均匀，使用过滤器过滤。将本发明所述血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素利用分光光度计进行 血红蛋白衍生物测定实验，结果如图1所示。将本发明所述血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素应用到血液分析仪(1) 测定血红蛋白浓度，结果与氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法比较；(2) 进行白细胞三分群，结果与手工法显微镜镜检比较。 测试结果见图2至图6。综上所述并根据测定结果分析，本发明血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶 血素血红蛋白衍生物吸收曲线最大吸光度在538nm处，根据国际标准氰化高铁血红蛋 白(HiCN)测定法最大吸光度540nm以及血红蛋白浓度测定结果比较，本发明所述溶 血素完全符合血红蛋白浓度测定要求。应用本发明所述溶血素的白细胞三分群结果与手工法显微镜镜检白细胞三分群结血素完全符合白细胞三分群测定要求。 实施例2:按下列比例配制本溶血素(1)月桂基硫酸钠2.0g(2)十四垸基三甲基溴化铵6.0g(3)Triton X-100l.Og(4)氯化钾2.0g(5)去离子水1000ml制备方法与实施例1相同。本发明血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素血红蛋白衍生物吸收曲线最大吸光度在538nm处，根据国际标准氰化高铁血红蛋白(HiCN )测定法最大吸光度540nm 以及血红蛋白浓度测定结果比较，本发明所述溶血素完全符合血红蛋白浓度测定要求。 应用本发明所述溶血素的白细胞三分群结果与手工法显微镜镜检白细胞三分群结 果高度相关，本发明所述溶血素完全符合白细胞三分群测定要求。实施例3:按下列比例配制本溶血素(1)月桂基硫酸钠2.0g(2)十二烷基三甲基溴化铵8.0g(3)吐温-804.0g(4)氯化钾0.9g(5)去离子水100C制备方法与实施例1相同。本发明血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素血红蛋白衍生物吸收曲线最大吸光度在538nm处，根据国际标准氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法最大吸光度540nm 以及血红蛋白浓度测定结果比较，本发明所述溶血素完全符合血红蛋白浓度测定要求。 应用本发明所述溶血素的白细胞三分群结果与手工法显微镜镜检白细胞三分群结 果高度相关，本发明所述溶血素完全符合白细胞三分群测定要求。权利要求
1.一种血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素，其特征是包括以下组分月桂基硫酸钠，其含量范围是0.5～5.0g/L；季铵盐，含量范围是3.0～10.0g/L；非离子表面活性剂，含量范围是0.5～5.0g/L；碱金属盐，含量范围是0.5～3.0g/L；余量为去离子水。
2. 根据权利要求l所述的血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素，其特征是所 述的月桂基硫酸钠的浓度范围为1.0~2.0g/L。
3. 根据权利要求l所述的血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素，其特征是所述的季铵盐为Cu d8长链烷基季铵盐。
全文摘要
本发明涉及一种血细胞分析用的溶血素，具体涉及一种用于血细胞分析用无氰白细胞三分群环保型溶血素。包括以下组分1.月桂基硫酸钠(SLS)，0.5～5.0g/1。2.季铵盐，3.0～10.0g/L。3.非离子表面活性剂，0.5～5.0g/L。4.碱金属盐，0.5～3.0g/L。5.余量为去离子水。本发明的溶血素能快速溶解红细胞，并释放出血红蛋白，溶血素与血红蛋白形成稳定的血红蛋白衍生物，使浓度准确并容易测定，并且同时进行白细胞三分群测定。本发明的溶血素既能与国际血液学标准化委员会(International Council for Standardization in Hematology，ICSH)推荐氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法高度相关，又能准确、快速的进行白细胞三分群。
文档编号G01N1/28GK101329229SQ20081013872
公开日2008年12月24日 申请日期2008年7月30日 优先权日2008年7月30日
发明者宫奇林, 张国栋, 张忠房, 王春莲, 韩作湘 申请人:山东兰桥医学科技有限公司