吸收剂粒子的用于改进分析方法中信号检测的用途与流程

本发明涉及改进在分析方法期间对应于被分析物的存在的信号的检测，尤其是当该分析方法需要在液相的存在下获得信号时。

发明背景

分析方法使得可以检测在试样中一种或若干种被分析物的潜在存在。通常在固体支持体上完成分析方法。在分析方法中，多重分析方法允许同时检测在同一试样中的若干种被分析物的潜在存在。可以在包含斑点的固体支持体上或成套珠上完成多重分析方法。

传统上，分析方法包括：在包含待检测的被分析物的专门捕捉配体的固体支持体的至少一个斑点或珠的存在下安放待分析的试样的步骤，添加待分析并偶联到直接或间接标记物的被分析物的专门检测配体的步骤，可能的通过添加随后偶联到直接或间接标记物的报道物的显影步骤，和信号检测步骤(也称作信号获得步骤)。在过氧物酶类型的间接标记物的情况下，酶的底物的添加允许导致化学发光化合物产生的酶促反应。随后，通过化学发光检测信号。

原则上，为了连续地允许制备化学发光化合物，通过化学发光的信号的检测要求在酶的底物的存在下即在液相的存在下获得信号。事实上，如果在获得信号之前进行洗涤步骤，则消除了残余的底物并且酶促反应停止。然而通过化学发光化合物发射的信号被逐渐熄灭。因此，酶的底物必须存在于与固相接触的液相中，以允许稳定和可重现的足够信号发射。

然而，在液相的存在下在微量培养板的孔的斑点处，信号的获得导致光干涉。此光干涉具有若干来源：一方面，从斑点向孔的顶部发射的光子可以与包含化学发光化合物的溶液的化合物相互作用，并且在全部方向上漫射；另一方面，光子也可以被孔的壁和被液体/空气界面处的介质变化反射，更具体地，在由孔的壁与包含化学发光化合物的溶液的相互作用形成的弯月面处。

此光干涉可以产生相对于真实斑点稍微移位的被称作“孪生斑点(twin spots)”的斑点、在孔的周缘上可见的光环、或当在斑点处发射的信号强时甚至是光弧。此光干涉因此引起成问题的背景噪声，其可以是假阴性或假阳性结果的源头。例如，在孔周围的光环可以使背景噪声的阈值偏置，那么弱信号被淹没在背景噪声中。光干涉也可以阻碍通过斑点周围的环形测量进行的对斑点不存在缺陷的校验。

文献US 4,318,707描述了用于检测试样中的被分析物的方法，包括在偶联到配体/反配体对的第一成员的吸收剂粒子和第二被标记的成员的存在下安放试样，结合到偶联到吸收剂粒子的第一成员的第二被标记的成员的量与被分析物的量有关。在此文献中，因此将吸收剂粒子偶联到配体/反配体对的第一成员，并且使得当该对的两个成员结合时，可以熄灭所述对的第二被标记的成员的信号。

文献US 8,163,562描述了一种试验，使得可以减少从优选为细胞的细胞区划(compartment)浸泡在其中的溶液的荧光导致的不想要的光。此不想要的荧光尤其来自在试验中使用的探针或化学化合物。待检测的信号来自就位在膜区划中的光子产生剂。所以，在与膜区划的外表面接触的水溶液中使用对膜来说不可渗透的并且不专门结合到膜的光子减少剂。

因此，为了确保获得的结果同时避免假阳性或假阴性结果，对于使得可以在一个或多个斑点上的、在其间在一个或多个斑点处的信号的获得在液相的存在下发生的分析方法的情况下改进对应于被分析物的存在的信号的检测的方案，存在着需要。

发明详述

出人意料地，在斑点分析方法，发明人已经证明了使用吸收剂粒子例如碳粒子可以使得消除平常在液相的存在下获得信号后发生的不想要的光干涉中的一些或全部，却不干扰、或较少干扰被检测的对应于在斑点处的被分析物的存在的信号(例如，在发光中)的强度，并使得可以检测由在一个或多个斑点处作为对照存在的荧光团发射的荧光(如果可用)。根据本发明的吸收剂粒子的使用因此使得可以确保在分析方法的结束时获得的结果，即，保证在所述方法的结束时获得的所述结果的可靠性，尤其是通过避免产生假的阳性结果(也称作“假阳性”)和/或假的阴性结果(也称作“假阴性”)。

“假阳性”是反映在试样中被检测的一种或多种被分析物的存在的阳性结果，而所述一种或多种被分析物在试样中并不存在并且不应当被检测到。

“假阴性”是反映在试样中被检测的一种或多种被分析物的不存在的阴性结果，而所述一种或多种被分析物在试样中是存在的并且应当被检测到。

被检测的对应于在斑点处的被分析物的存在的信号使得可以检测被分析物在试样中的存在和/或量化在所述试样中的所述被分析物。

被检测的对应于在斑点处的被分析物的存在的信号是电磁辐射，尤其是光发射。

被检测的对应于在斑点处的被分析物的存在的信号优选是通过发光例如通过化学发光检测的信号，和/或通过荧光检测的信号。

当被检测的对应于在斑点处的被分析物的存在的信号是通过发光优选通过化学发光检测的信号时，根据本发明的吸收剂粒子使得可以改进被检测的信号/背景噪声比率。

在固体支持体的一个或多个斑点中存在的荧光团可以起到对在分析方法结束时一个或多个斑点的品质(尤其是它们的存在、位置和/或完整性)进行对照和/或改进一种或多种被分析物的检测的灵敏度的作用等，其是通过在分析方法结束时限定来自一个或多个斑点的实际位置的对应于一种或多种被分析物的信号的读取格栅完成的。在固体支持体的一个或多个斑点中使用荧光团因此也使得可以确保斑点分析方法的结果。

此外，根据本发明的吸收剂粒子使得可以对在固体支持体的区划的一个或多个斑点的存在下所述吸收剂粒子的安放进行对照，并且，当将所述吸收剂粒子以吸收剂组合物的形式添加时，使得可以对在固体支持体的区划的一个或多个斑点的存在下包含在所述吸收剂组合物中的任何化合物的安放进行对照。

根据本发明的吸收剂粒子因此使得可以改进(并且因此确保)在分析方法期间对应于被分析物的存在的信号的检测，其是通过部分地或全部地隐藏和/或吸收在液相的存在下获得待检测的信号期间的不想要的光干涉。信号检测的改进可以通过测量“被检测的信号/背景噪声”比率来评估。

此外，在根据本发明的分析方法中使用吸收剂粒子具有以下优点：能够使用其一个或多个区划的一个或多个壁包含透明材料或由透明材料组成的固体支持体，此类型的支持体与包含不透明材料或由不透明材料组成的那些相比较不昂贵。

本发明的第一目的是提供一种吸收剂组合物，其能够用于在一个或多个斑点上的分析方法中，以改进对应于被分析物的存在的信号的检测。

本发明的第二目的是提供一种分析方法，优选多重分析方法，使得可以改进对应于被分析物的存在的信号的检测，所述方法包括以下步骤：

a)提供固体支持体，所述固体支持体包含至少一个区划，所述区划包含用于检测被分析物的至少一个斑点，

b)在固体支持体的所述区划的一个或多个斑点的存在下安放待分析的试样，

c)在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放被分析物的至少一种检测配体，所述被分析物的检测配体与直接或间接检测标记物偶联，

d)当所述检测标记物是间接检测标记物时，在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放与所述检测配体偶联的所述间接检测标记物的报道物，

e)当在步骤d)中使用的报道物与间接标记物偶联时，在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放与所述报道物偶联的所述间接检测标记物的报道物，

f)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放吸收剂粒子，所述吸收剂粒子被包含在与所述区划的一个或多个斑点接触的液相中，以及

g)在包含所述吸收剂粒子的液相的存在下，检测对应于在所述区划的一个或多个斑点处被分析物的存在的信号。

本发明的第三目的涉及吸收剂粒子在一个或多个斑点上的分析方法中改进对应于被分析物的存在的信号的检测的用途，所述信号的检测上的改进例如特征在于背景噪声的强度的减少。

本发明的第四目的涉及用于进行分析方法的试剂盒，其使得可以改进对应于被分析物的存在的信号的检测。

试样

待分析的试样优选是生物试样。

生物试样可以是生物流体，如血液的试样、血液衍生物(如血浆或血清)、尿液、脑脊髓液、唾液，或组织试样，如由活组织检查获得的组织、细胞或细胞组、植物提取物，或它们的组合。

血液衍生物指的是任何从血液样品获得的产物，尤其是流体。

待分析的试样也可以是培养基和/或培养物上清液。

在被分析之前，试样可以经历一个或若干个前处理步骤，如稀释、离心、热处理、细胞溶解(例如通过一种或若干种离液剂、一种或若干种还原剂和/或通过加热)、萃取、PCR(聚合酶链反应)、添加未被标记的检测配体、或它们的组合。对于执行中和试验来说，添加未被标记的检测配体尤其有用，中和试验本身是本领域技术人员已知的试验。

试样也可以是至少两种样品的混合物，所述试样可以是相同性质或不同性质的。

不同性质的试样的混合物的实例是血浆和血清的混合物、血液和血浆的混合物、血清和血浆的混合物、或血液、血清和血浆的混合物。

一种优选的根据本发明的试样是血液和/或血液衍生物的试样或试样混合物。

被分析物

在试样中待检测的被分析物可以是人们希望在试样中检测和/或量化任何类型的天然的或合成的化合物。

被分析物可以例如是例如蛋白、肽、糖蛋白、碳水化合物、脂质、细胞、细胞器、病毒或核酸。

细胞可以是动物细胞、植物细胞、细菌细胞、原生动物、后生动物细胞、酵母细胞、真菌细胞或原生动物。

核酸指代通过磷酸二酯键连接的核苷的聚合物，如脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)或它们的类似物，如硫代膦酸酯或硫代酯，以单链或双链的形式。

被分析物或多种被分析物的至少一种例如选自由以下各项组成的组：抗原、抗体、抗体片段、半抗原、激素、激素受体、酶或核酸。

在此，“抗原”指的是天然的或合成的分子，其被免疫系统的抗体或细胞所识别并且能够引起免疫应答。抗原的实例是蛋白质、肽、糖蛋白、碳水化合物或脂质。

“半抗原”在此指的是能够被免疫系统所识别的具有低分子量的分子，但是其仅当它偶联到载体分子时才是免疫原性的。

在本申请中，“载体分子”尤其指的是蛋白质或碳水化合物载体分子。载体分子可以是多肽(尤其是蛋白质或肽)，其可以是或可以不是天然的(例如，重组的蛋白质或合成的肽)，官能化的聚合物(如葡聚糖、多糖或聚赖氨酸)、混合的共聚物(尤其是不同氨基酸的共聚物，例如赖氨酸-酪氨酸共聚物)或抗体(尤其是单克隆抗体或多克隆抗体)，例如免疫球蛋白(也称作Ig)。载体分子的一个实例是BSA(牛血清白蛋白)。

被分析物或多种被分析物中的至少一种优选是使得可以诊断受试者中可以是或可以不是病理性的病况或者诊断发展可以是或可以不是病理性的病况的风险的化合物。非病理性的病况的实例是妊娠。

受试者可以是人类、非人类动物或植物。非人类动物优选是哺乳动物，如猫、狗、猴、兔、小鼠或大鼠。

术语“人类”被广泛使用，并且尤其指代任何年龄的男人或女人，如婴儿、儿童、青少年、成人或老人。

当被分析物或多种被分析物中的至少一种是抗原时，它优选是使得可以诊断传染的抗原，例如由病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的传染。

当被分析物或多种被分析物中的至少一种是抗体时，它优选是使得可以诊断传染的抗体，例如由病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的传染。

典型地，这可以包括以下各项的一种或若干种抗原和/或一种或若干种抗体：

-病毒，如HIV(人类免疫缺损病毒)，尤其是HIV-1或HIV-2，HBV(乙型肝炎病毒)，HCV(丙型肝炎病毒)，HPV(人乳头瘤病毒)，HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒)，尤其HTLV-I或HTLV-II，

-寄生虫，如可以在人类或非人类动物内引起以下各项的寄生虫：弓形体病(尤其是弓形虫(Toxoplasma gondii))，疟疾(尤其是疟原虫属(Plasmodium genus)的寄生虫，例如恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)，间日疟原虫(Plasmodium vivax)，卵形疟原虫(Plasmodium ovale)，三日疟原虫(Plasmodium malariae)或诺氏疟原虫(Plasmodium knowlesi))或查加斯(Chagas)病(尤其是克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi))，或

-细菌，如能够在人类或非人类动物内引起以下各项的细菌：梅毒(苍白密螺旋体(Treponema pallidum))或莱姆(Lyme)病(尤其是来自包柔氏螺旋体属(Borrelia genus)的细菌)。

“寄生虫”在此指的是充当相对于身体的寄生虫的并且引起寄生虫病的后生动物或原生动物。在本发明的含义内的寄生虫因此不是病毒、细菌或真菌。

被分析物或多种被分析物中的至少一种也可以是用于疾病的标记物，如心血管病的标记物或糖尿病标记物，疾病如肝炎的进展的标记物，由病毒、细菌、真菌或寄生虫引起的传染的进展的标记物，对治疗例如对抗病毒治疗、抗生素治疗或癌症治疗的耐性的标记物。

可以在多重分析方法期间，在试样中同时检测若干种(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六或多于十六种)本申请中所述的被分析物。这可以使得可以在相同的试样中诊断受试者中一种或若干种传染或疾病、传染或疾病的进展、病况(病理性的或不是病理性的)、发展病况(病理性的或不是病理性的)的风险或对治疗的耐性的标记物。

在多重分析方法期间检测的被分析物可以是相同性质的(例如仅为抗体或仅为抗原)或不同性质的(例如，至少一种抗原和至少一种抗体)。

捕捉配体

捕捉配体是在斑点处固定在固体支持体上的化合物。

至少一种捕捉配体专门针对在试样中的待检测的被分析物。

捕捉配体可以是抗体、抗原、肽、碳水化合物、脂质或核酸。

捕捉配体优选是抗体或抗原。

当捕捉配体是抗体时，它例如包括单克隆抗体或多克隆抗体。

检测配体

检测配体意在揭示它专门针对的化合物的存在。

检测配体可以是抗体、抗原、肽、碳水化合物、脂质或核酸。

检测配体优选是抗体或抗原。

当检测配体是抗体时，它例如包括单克隆抗体或多克隆抗体。

检测配体优选是被标记的检测配体，即，向其共价或非共价附接了检测标记物的检测配体。

当检测配体是未被标记的时，可以通过使用所述检测配体的专门的被标记的抗体，获得它的检测。

至少一种检测配体专门针对在试样中的待检测的被分析物。

检测配体与所用的捕捉配体或所用的多种捕捉配体中的一种可以是同样的，区别在于检测标记物的任何存在，并且/或者在与被捕捉配体或多种捕捉配体中的一种结合的区域相同的区域连结到它专门针对的化合物。在这种情况下，如果捕捉配体和所述检测配体是抗体，则其涉及“同种三明治(allogenic sandwich)”。

捕捉配体和检测配体或多种检测配体中的一种可以针对它们所专门针对的化合物处的分开的区域，以避免捕捉配体和检测配体关于它们所专门针对的化合物由于位阻导致的竞争。在这种情况下，如果所述检测配体和所述捕捉配体是抗体，那么它涉及“异源三明治(allogenic sandwich)”。

在一个优选的实施方案中，专门针对同一化合物的检测配体和捕捉配体不结合到所述化合物上的同一位置。更优选地，所述检测配体结合到远离与所述捕捉配体的连结区域的所述化合物的区域。

在另一个优选实施方案中，检测配体与捕捉配体是同样的，区别在于检测标记物的任何存在，并且/或者在与被所述捕捉配体结合的区域相同的区域结合到它专门针对的化合物，尤其是当它专门针对的化合物是具有至少两个同样的结合区域的配合物的形式时。

检测标记物

检测标记物可以是直接标记物或间接标记物。

直接标记物是其信号可以被直接检测(即不需要在前添加报道物)的标记物。

直接标记物例如选自由以下各项组成的组：荧光团、发光化合物、和荧光或发光纳米粒子。

“发光”化合物可以是电致发光化合物、热致发光化合物或化学发光化合物。在一个优选的实施方案中，发光化合物是化学发光化合物。

可以用作直接标记物的一种实例发光化合物(更具体地，热致发光化合物)由二氧化硅纳米粒子组成，所述二氧化硅纳米粒子包含(例如掺杂有)二氧杂环丁烷化合物的分子，尤其是1，2-二氧杂环丁烷化合物，或二氧杂环丁烷化合物的衍生物，例如，1，2-二氧杂环丁烷的衍生物。

间接标记物是这样的标记物：对于其来说，信号的检测需要：在前添加报道物(也称作第一报道物)，以及，如果所述报道物它本身偶联到间接检测标记物(例如，酶)，添加偶联到所述第一报道物的间接检测标记物的第二报道物(例如，该酶的底物)。

间接标记物例如选自由以下各项组成的组：酶、配体-受体对的配体、配体-受体对的受体、半抗原、抗原和抗体。

配体-受体对的配体或受体是例如生物素、生物素的类似物、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白或地高辛配基。

报道物是间接标记物的底物或是专门结合到间接标记物的分子，所述分子它自己是直接或间接标记物或它自己偶联到直接或间接标记物。

底物是例如酶的底物。

专门结合到间接标记物的分子是，例如，配体-受体对的配体或受体，如生物素、生物素的类似物、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白或地高辛配基。

酶的报道物是例如所述酶的底物。

使得可以产生发光化合物的分子的报道物是例如底物、酶或催化剂。

生物素的报道物是，例如，抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或中性抗生物素蛋白，优选与直接标记物或间接标记物如酶偶联。

根据本发明的优选的间接标记物是生物素和酶，优选通过与底物的反应产生发光化合物的酶。

实例酶是过氧物酶，例如辣根过氧物酶(HRP)、荧光素酶或碱式磷酸酶。

一种优选的根据本发明的生物素报道物是与过氧物酶、优选辣根过氧物酶偶联的链霉抗生物素蛋白。

作为实例，如果偶联到被分析物的检测配体的间接检测标记物的报道物(称为第一报道物)偶联到过氧物酶，在后续步骤中必须添加此过氧物酶的报道物(也称作第二报道物)，即，此酶的底物，如鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物。在这种情况下，第二报道物是底物。

固体支持体

用于进行根据本发明的分析方法的一种或多种支持体是固体支持体。

固体支持体可以由任何适合于进行分析方法的材料制成。

固体支持体是例如具有聚合物的或聚合物的混合物的基底的支持体。适合的根据本发明的固体支持体是例如由聚苯乙烯、聚丙烯、聚(甲基)丙烯酸酯、聚丁二烯或它们的组合制成的支持体。

一种优选的固体支持体由聚苯乙烯和/或聚丙烯制成。

另一类型的适合的根据本发明的固体支持体是例如无机固体支持体，如玻璃。

支持体可以例如是板、微量培养板、载片或膜形式的。

固体支持体包含至少一个区划，其也称作分析区。固体支持体的一个或多个区划限定了固体支持体的定向。固体支持体的顶部(也称作所述固体支持体上表面)位于一个或多个区划的侧面上，并且因此在一个或多个斑点的侧面上。固体支持体的底部(也称作所述固体支持体的下表面)是相反的面。

根据本发明的一个特别的实施方案，固体支持体包含单一的区划。所述单一的区划可以是包含底部和一个或若干个壁的区划或由底部和一个或若干个壁组成的区划。

备选地，所述单一的区划可以不具有壁并且那么与固体支持体它自己是可比的。那么区划的底部可以由所述固体支持体的上面构成。

这样的包含单一区划(其可以包含或可以不包含一个或若干个孔)固体支持体的一个实例包括载片或膜。

根据本发明的另一个特别的实施方案，可以是例如微量培养板的固体支持体包含至少两个区划。

当固体支持体包含至少两个区划时，它们是相互隔离的，使得它们不相互沟通，即，使得在实施分析方法期间使用的各种组合物(尤其是溶液)不能在分析方法期间从一个区划流通到另一个。

因此，添加到一个区划中的溶液将不进入其他的区划。例如，一个或多个区划包含或由以下组成：底部和一个或若干个壁，所述一个或多个壁将一个或多个区划相互隔离开，使得它们不相互沟通。

固体支持体优选为微量培养板。在这种情况下，一种实例区划是孔。微量培养板典型是具有96孔或384孔的微量培养板。

在一个特别的实施方案中，当固体支持体包含至少两个区划时，可以使它们进一步相互隔离开，使得在一个区划处发射的信号完全或部分不在另一个区划中被检测到。为此，一个或多个区划的一个或多个壁可以包含不透明材料或由不透明材料组成。

“不透明材料”尤其指的是不允许或基本上不允许要被检测的对应于被分析物的存在的信号通过的材料。“基本上不允许要被检测的信号通过”意指不透明材料允许不大于20％、优选不大于15％、更优选不大于10％、再更优选不大于5％、且甚至更优选不大于2％、不大于1％或不大于0.5％的要被检测的信号通过。不透明材料的一个实例是黑色材料。

在另一个特别的实施方案中，当固体支持体包含至少两个区划时，一个或多个区划的一个或多个壁包含透明材料或由透明材料组成。

在另一个特别的实施方案中，当固体支持体包含至少两个区划时，一个或多个区划可以包含至少一个由透明材料组成的壁和至少一个由不透明材料组成的壁。

“透明材料”尤其指的是允许至少80％的要被检测的对应于被分析物的存在的信号通过的材料，优选至少85％的要被检测的信号，更优选至少90％的要被检测的信号，更优选至少95％的要被检测的信号。

在一个优选的实施方案中，固体支持体的一个或多个区划的底部包含透明材料或由透明材料组成，以允许通过区划的底部检测要被检测的对应于被分析物的存在的信号。

不透明材料的实例是有色玻璃、有色聚苯乙烯、有色聚乙烯、有色聚丙烯或它们的组合。

透明材料的实例是玻璃、聚苯乙烯、聚甲基戊烯、聚碳酸酯、丙烯腈丁二烯苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或它们的组合。

典型地，每个待分析的试样使用固体支持体的至少一个(例如一个或两个)区划。

在其中固体支持体(例如载片或膜)包含单一区划的本发明的一个特别的实施方案中，每个待分析的试样使用至少一个(例如一个或两个)固体支持体。

用于分析试样的固体支持体的区划包含至少一个斑点、至少两个斑点、至少三个斑点，例如三个斑点、四个斑点或五个斑点，或至少六个斑点，优选六个斑点、七个斑点、八个斑点，更优选至少九个斑点，例如九个斑点、十个斑点、十一个斑点、十二个斑点、十三个斑点、十四个斑点、十五个斑点、十六个斑点或多于十六个斑点。

“斑点”在此指的是位于固体支持体的区划的底表面上的区域，该区域包含至少一种感兴趣的化合物。感兴趣的一种或多种化合物因此可以通过非共价物理化学相互作用(例如弱键类型，且尤其是离子的、范德华、氢和/或疏水的)或通过共价键固定到区划的底表面。

斑点除了一种或多种感兴趣的化合物之外可以含有至少一种聚合物，尤其是至少一种包括亲水基团的聚合物，例如至少一种水凝胶。

在本申请的含义内，“至少”指的是一或若干，若干尤其意味着二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六或多于十六。

斑点对应于孔限定的区域，通常是小的，例如包含0.0078mm²至5.309mm²之间、优选0.196mm²至3.142mm²、更优选包含0.503mm²至2.011mm²。

斑点具有平圆形的或大约平圆形的(例如卵形的)形状，尤其是当固体支持体是微量培养板或载片时。

备选地，斑点可以具有正方或矩形的形状(尤其是条带)，例如当固体支持体是膜时，或任何其他形状。

使用本领域技术人员熟知的技术(参见例如文献US 7,470,547、US 6,576,295、US 5,916,524或US 5,743,960)，获得斑点。

例如，通过将至少一滴含有确定量的一种或多种所述感兴趣的化合物的溶液沉积在区划的表面上的特殊位置中，获得斑点。

当斑点包含至少一种聚合物(例如至少一种水凝胶)时，可以通过将至少一滴含有确定量的一种或多种所述感兴趣的化合物的溶液沉积在其上已经预先沉积了所述聚合物的区划的表面上的特殊位置中，获得所述斑点。

也可以通过一种或多种所述感兴趣的化合物在区划的表面上的特殊位置中的原位合成，获得斑点。在这种情况下，一种或多种所述感兴趣的化合物有资格作为探针。这可以涉及核酸或肽(见例如文献US 5,143,854)。

感兴趣的化合物可以例如是捕捉配体、偶联到间接标记物的载体分子、间接标记物、或荧光团。

在一个优选的实施方案中，区划的至少一个斑点包含专门针对待检测的被分析物的至少一种捕捉配体。

在一个有利的实施方案中，区划的至少一个斑点，优选区划的全部斑点，包含至少两种感兴趣的化合物，这些感兴趣的化合物中的一种是荧光团。所述荧光团尤其用于在分析方法尤其是多重分析方法结束时对斑点的存在、位置和/或完整性进行对照。例如，区划的至少一个斑点包含至少一种专门针对被分析物的检测配体和至少一种荧光团。

在一个有利的实施方案中，固体支持体的每个区划包含相同的斑点数量。此外，固体支持体的每个区划包含相同的斑点数量和相同的斑点组成。

在另一个有利的实施方案中，支持体可以包含一个或若干个区划，其没有斑点，或具有不同的斑点数量和/或斑点组成。支持体可以例如包含至少两个分开的区划的组(或类型)，分开的组的每个具有不同的斑点数量和/或斑点组成。

相对于每种待检测的被分析物，区划通常包含至少一个斑点，每种被分析物例如能够对应于待检测的传染或疾病、传染或疾病的进展、受试者的病况(病理性的或不是病理性的)、发展病况(病理性的或不是病理性的)的风险或对治疗的耐性的标记物。区划的若干斑点也可以意在分析相同的被分析物。区划因此包含至少一个意在检测被分析物的斑点，优选至少两个意在检测被分析物的斑点。

同一斑点可以包含若干不同的捕捉配体(例如，若干抗体和/或抗原)，它们例如针对相同的待检测的病理、传染或疾病是专门的(尤其针对相同的病毒、相同的细菌、相同的真菌或相同的寄生虫是专门的)，或者针对相同的传染或疾病的进展、相同的受试者的病况(病理性的或不是病理性的)、相同的发展病况(病理性的或不是病理性的)的风险或相同的对治疗的耐性的标记物是专门的。

在一个有利的实施方案中，区划包含至少一个对照斑点，使得可以验证分析方法尤其是多重分析方法的至少一个步骤。

信号的检测

信号的检测取决于所用的标记物的类型。

被检测的信号是电磁辐射。

电磁辐射可以是光，例如紫外辐射、可见光或红外辐射。紫外辐射是波长为10至380nm的电磁辐射。可见光是包含380nm至780nm的波长的电磁辐射。红外辐射是包含780nm至1mm的波长的电磁辐射。

在此，表述“信号的检测”和“信号的获得”是同义的。

“信号的检测”尤其指的是对应于被分析物的存在的信号的检测或对应于方法的对照的信号的检测。

本领域技术人员知道如何基于所用的一种或多种检测标记物检测在斑点处的信号。例如，使用捕捉固体支持体的底部的图像的照相机检测信号。

信号的检测通常包括测量信号的强度，例如以RLU(相对光单位)表示的强度。

可以通过在由光能激发后的荧光直接读取由荧光团型的直接标记物发射的信号。

事实上，荧光团，也称作荧色物或荧光分子，是能够在用光能激发之后发射荧光的临床物质。

在本发明的上下文中，所用的吸收剂粒子在信号的检测期间必须存在，并且信号的检测在液相的存在下完成。

通过使用根据本发明的吸收剂粒子，通过检测在斑点处发射的对应于被分析物的存在的信号，可以降低背景噪声，且尤其可以改进“被检测的信号/背景噪声”比率，优选通过捕捉固体支持体的底部的图像检测所述信号。

在一个优选的实施方案中，在根据本发明的分析方法中被检测的信号是由化学发光化合物通过化学发光发射的信号。

化学发光是导致光的产生的化学反应。一种此类型的反应是鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼，也称作5-氨基-2，3-二氢-酞嗪-1，4-二酮，原式为C₈H₇N₃O₂)、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物通过氧化剂(例如充氧水或任何氢氧化物)的氧化-还原。在化学发光反应期间，发现由反应产生的分子处于激发态：这是化学发光化合物。导致光的发射的是化学发光化合物向基态的返回。

在一个优选的实施方案中，通过化学发光检测的信号是通过过氧物酶与它的底物(例如鲁米诺、异鲁米诺(也称作4-氨基苯二甲酰肼)和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物)的反应发射的。此反应也需要氧化剂的存在，并且如果可用，需要电子介体的存在。

鲁米诺或异鲁米诺的衍生物优选分别是通过所有可能的一种或多种修改(例如，化学的和/或酶的)从鲁米诺或异鲁米诺获得的分子。鲁米诺或异鲁米诺的衍生物例如是过氧物酶的底物，所述过氧物酶与鲁米诺或异鲁米诺的所述衍生物的反应使得可以产生化学发光化合物。

异鲁米诺的衍生物可以是例如氨基乙基异鲁米诺(或AEI)、氨基乙基乙基异鲁米诺(或AEEI)、氨基丁基异鲁米诺(或ABI)、氨基丁基乙基异鲁米诺(或ABEI)、氨基戊基乙基异鲁米诺(或APEI)、氨基己基异鲁米诺(或AHI)、氨基己基乙基异鲁米诺(或AHEI)、氨基辛基甲基异鲁米诺(或AOMI)或氨基辛基乙基异鲁米诺(或AOEI)，如在出版物Dodeigne C.et al(2000)，Talanta 51，415-439，“作为诊断工具的化学发光.回顾(Chemiluminescence as diagnostic too/.A review)”中所述。

根据本发明的另一个特别实施方案，经由与选自下列各项的底物进行的酶反应或化学反应发射通过化学发光检测的信号：吖啶、腔肠素(coelenterazine)、二氧杂环丁烷或过氧草酸化合物，或它们的衍生物中的一种，并且特别是在出版物Dodeigne C.et al(2000)，Talanta 51，415-439，“作为诊断工具的化学发光.回顾(Chemiluminescence as diagnostic too/.A review)”中所述的化合物。

电子介体是，例如，3-(10’酚噻嗪基)丙烷1-磺酸钠、对-碘苯酚、对-碘苯基硼酸、4-(吩噻嗪-10-基)丁烷-1-磺酸、或它们的组合。

氧化剂例如是过氧化物，例如过氧化氢，或过硼酸钠。

在375nm至580nm包含的波长，例如425nm，读取从过氧物酶与鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物的反应所得的信号。

检测到的信号优选以RLU(相对光单位)表示。过氧物酶可以与检测配体(例如被分析的专门检测配体)或与间接检测标记物的报道物(如链霉抗生物素蛋白)偶联。

通常，使用包含至少两个溶液的试剂盒完成化学发光反应。

第一溶液包含用于过氧物酶的底物，例如鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，和电子中介体；第二溶液包含氧化剂。作为实例，可以使用以下试剂盒：″Immun-star western C″(Bio-Rad，United States)，″ELISTAR ETA C Ultra ELISA″(Cyanagen，Italy)，″Supersignal West Pico″(Thermo Scientific，United States)，″Chemiluminescent Sensitive Plus HRP″(Surmodics，United States)。

用作对照的荧光团

在一个有利的实施方案中，固体支持体的至少一个区划的一个或多个斑点包含用作对照的荧光团。

用作对照的荧光团优选不干扰或非常小地干扰对应于被分析物的存在的信号，例如，由化学发光化合物发射的信号。

作为实例，当对应于被分析物的存在的信号是从鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺获得的化学发光化合物时，用作对照的荧光团优选不发射425nm左右、尤其是400nm至550nm、优选375nm至550nm、更优选350nm至580nm的光。它可以例如发射仅在小于(或小于或等于)400nm、390nm、380nm、375nm、370nm、360nm或350nm的波长或仅在大于(或大于或等于)550nm、560nm、570nm、580nm、590nm或600nm的波长的光。

用作对照的荧光团，例如，选自由以下各项组成的组：香豆素、若丹明、carbopyronine、噁嗪、苯并吡喃鎓、藻红蛋白和它们的衍生物。所述荧光团任选地偶联到载体分子，例如蛋白质如BSA。

用作对照的荧光团，例如，选自由以下各项组成的组：香豆素、若丹明、carbopyronine、噁嗪、B-藻红蛋白、苯并吡喃鎓的衍生物、和它们的衍生物。

一种用作对照的荧光团优选地选自由以下各项组成的组：carbopyronine、carbopyronine的衍生物、噁嗪、噁嗪衍生物、苯并吡喃鎓衍生物、和藻红蛋白。

一种再更优选的用于作为对照的荧光团选自由以下各项组成的组：carbopyronine、苯并吡喃鎓衍生物、和藻红蛋白。

备选地，一种优选的用于作为对照的荧光团可以选自由以下各项组成的组：carbopyronine衍生物、苯并吡喃鎓衍生物、和藻红蛋白。

一种优选的可以用在斑点中作为对照的荧光团是例如包括以下基础结构的carbopyronine：

实例包括由Atto-Tec售卖的Atto 633carbopyronine和它的衍生物，尤其是Atto 633的胺衍生物。

优选的可以在斑点中用作对照的荧光团的另一个实例是由公司Dyomics以名称“Dye 634”售卖的荧光团(处于其偶联到载体分子例如BSA的形式)，其式如下：

这是苯并吡喃鎓衍生物。

Dye 634荧光团可以以其胺形式(Dye 634-胺)在斑点中用作对照。那时可以与载体分子且尤其是BSA偶联地或不偶联地使用它。

优选的可以在斑点中用作对照的源自苯并吡喃鎓的荧光团的还另一个实例是Dye 630的胺衍生物，Dye 630具有下式：

可以与载体分子且尤其是BSA偶联地或不偶联地使用Dye 630的胺衍生物。

吸收剂粒子

在此，“吸收剂粒子”指的是在完全或部分覆盖人们寻求(部分地或完全地)减少的信号(即光干涉的起源的信号)的发射波长范围的波长范围中的光的粒子。

当在分析方法中使用发光化合物例如化学发光化合物检测被分析物的存在时，根据本发明的吸收剂粒子优选吸收在完全覆盖所述发光化合物的发射波长范围的波长范围中的光。

典型地，对于使用过氧物酶在鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物上的反应的显影体系来说，根据本发明的吸收剂粒子优选吸收包含375nm至580nm的波长范围。

当在分析方法中使用荧光团以检测试样中被分析物的存在，并且任选地，量化试样中的被分析物时，所用的吸收剂粒子使得可以检测由所述荧光团发射的信号。因此，所用的吸收剂粒子可以吸收在所述荧光团的激发和/或发射波长范围内所含的波长的光的全部或部分，只要在所用的分析方法中由所述荧光团发射的信号保持可检测的和/或可量化的即可。此外，优选地，吸收剂粒子不漫射对应于所述荧光团的激发和/或发射波长范围的光。

在一个特别的实施方案中，当在分析方法中使用荧光团以检测试样中被分析物的存在和/或量化试样中的被分析物时，所用的吸收剂粒子不吸收在对应于所述荧光团的激发和/或发射波长范围的波长范围中的光，并且优选不漫射对应于所述荧光团的激发和/或发射波长范围的光。

在一个优选的实施方案中，由吸收剂粒子造成的潜在的漫射不妨碍孔的底部的信号水平的增加，尤其是吸收比它们漫射更多的光。吸收和漫射是可以通过本领域技术人员已知的技术测量的。

在一个优选的实施方案中，吸收剂粒子不发红色荧光，即，当它们被任何光激发时，尤其是在碱性介质中时，它们不发射620至780nm包含的波长处的光。

在一个特别的实施方案中，根据本发明的吸收剂粒子不在657nm处吸收，尤其是不在620和780nm之间、在610和800nm之间，在600和900nm之间或在580和950nm之间吸收，并且它们自己不发荧光。

优选地，在本发明的上下文中使用的吸收剂粒子不发荧光。

出人意料地，根据本发明的吸收剂粒子吸收在光干涉的源头处的信号，而不干扰或很少干扰要检测的信号，例如，不干扰或很少干扰作为局域地在斑点处由过氧物酶与鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物的反应的结果的化学发光化合物发射的光。

在此，表述“化合物X不干扰或很少干扰信号”意指在化合物X的存在下，信号的强度相对于在不存在所述化合物X的情况下测量的强度降低不大于20％、优选不大于15％、再更优选不大于10％。

此外，根据本发明的吸收剂粒子不导致与化学发光化合物的能量转移，所述能量转移如在荧光素的情况下可以被观察到，所述荧光素可以进入激活态并且发射比由过氧物酶与它的底物(例如，鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物)的反应产生的化学发光化合物的发射波长更高的波长。

吸收剂粒子优选具有小于50μm，优选小于40μm，例如小于30μm或小于20μm，更优选小于10μm，更优选小于6μm，更优选小于2μm，更优选小于1μm，再更优选小于0.5μm的直径。例如，吸收剂粒子具有小于0.45μm的直径。

吸收剂粒子的平均直径优选被包含在0.005μm至50μm，0.005μm至40μm，0.005μm至30μm，0.005μm至20μm，0.005μm至10μm，0.005μm至6μm，0.01μm至2μm，优选0.01μm至1μm，更优选0.05μm至0.5μm，再更优选0.05μm至0.1μm。吸收剂粒子的平均直径为例如0.050μm或0.070μm。

表述“粒子的直径”和“粒子的大小”在此是同义的。

可以通过本领域技术人员熟知的任何适当的方法测量吸收剂粒子的直径，例如，使用粒子分析仪，例如Nanotrac NPA150型的粒子分析仪。

在此，“平均直径”指的是吸收剂粒子的直径的平均值，每个直径由与考虑的吸收剂粒子具有相同体积的等效球的直径来定义。

在一个有利的实施方案中，根据本发明的吸收剂粒子还使得可以检测由荧光团发射的信号，所述荧光团作为对照存在于一个或多个斑点中。例如使用如在下文的“用于选择还允许在作为对照的一个或多个斑点的存在下检测由荧光团发射的信号的吸收剂粒子的方法”的段落中限定的吸收剂粒子选择方法获得或能够获得这样的吸收剂粒子。

在例如由碳粒子和彩色粒子组成的组中选择根据本发明的吸收剂粒子。

根据本发明的吸收剂粒子可以由不同的(至少两种)粒子类型(或组)的混合物组成，所述粒子类型由它们的吸收光谱和/或它们的平均直径区分。

因此，可以例如以彩色粒子的混合物(优选不同的彩色粒子的混合物)的形式供给彩色粒子，所述彩色粒子的混合物的吸收光谱优选完全与对应于要被检测的被分析物的信号(例如鲁米诺、异鲁米诺和/或它们的衍生物之一的信号)的发射波长范围交叠。可以将两种或多于两种(例如，三种)不同颜色的粒子类型混合。

优选地，在彩色粒子的混合物中使用的彩色粒子不包含黑色粒子。

根据本发明的吸收剂粒子是例如黄色粒子和品红色粒子的混合物。

可以选择以混合物的形式提供的粒子，使得所述混合物吸收全部可见光。

碳粒子优选为炭黑粒子。

炭黑是碳的无定形和单质形式。

黄色粒子是例如以包含丁酰胺、2-[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)二氮烯基]-N-(2-甲氧基苯基)-3-氧代-、单(4-磺基苯基)的衍生物和钠盐的组合物的形式供给的。

品红色粒子是例如以包含水、苯磺酸、(5，7，12，14-四氢-2，9-二甲基-7，14-二氧代喹啉并[2，3-b]吖啶基)和钠盐的组合物的形式供给的。

品红色粒子和黄色粒子的混合物例如包含1∶1重量比的黄色和品红色粒子。

因此，出人意料地，根据本发明的吸收剂粒子使得可以部分地或完全地减少来自化学发光化合物的光干涉，而不干扰或很少干扰通过化学发光的要检测的信号，和如果可用，由作为对照在斑点处存在的荧光团发射的荧光。

有利地，根据本发明的吸收剂粒子的存在对于肉眼是可见的(尤其表现为碟形，具有比固体支持体的材料更深或更浅的均匀的亮度)，这因此使得可以对吸收剂粒子在固体支持体的区划的一个或多个斑点的存在下的安放进行对照，并且，当将所述吸收剂粒子以吸收剂组合物的形式添加时，对在所述吸收剂组合物中包含的任何化合物在固体支持体的区划的一个或多个斑点的存在下的安放进行对照。

本领域技术人员可以容易地确定在多重分析方法中在斑点上要用于获得想要的改进的信号检测的吸收剂粒子的最佳量，例如，通过试验所述吸收剂粒子的若干浓度。

在一个优选的实施方案中，吸收剂粒子是碳粒子，尤其是炭黑粒子。

在本发明的上下文中使用的碳粒子优选具有小于50μm，优选小于40μm，小于30μm或小于20μm，更优选小于10μm或小于6μm的直径。根据一个特别的实施方案，所述碳粒子具有小于2μm，优选小于1μm，更优选小于0.5μm的直径。例如，在本发明的上下文中使用的碳粒子具有小于0.45μm的直径。

在本发明的上下文中使用的碳粒子的平均直径优选被包含在0.005μm至50μm，0.005μm至40μm，0.005μm至30μm，0.005μm至20μm，0.005μm至10μm或0.005μm至6μm。根据一个特别的实施方案，所述碳粒子的平均直径被包含在0.005μm至2μm，优选0.01μm至1μm，更优选0.05μm至0.5μm，再更优选0.05μm至0.1μm。碳粒子的平均直径是例如0.05μm或0.07μm。

可以使用本领域技术人员熟知的任何方法获得碳粒子，例如，如在文献US 7,655,209或EP 0,481,034中所述的。

在一个有利的实施方案中，官能团附接到碳粒子的表面。这些官能团例如使得可以获得稳定且均匀的分散，而不使用聚合物或表面活性剂。能够使用的官能团是例如在文献EP 0,481,034中描述的那些。

用于选择还允许在作为对照的一个或多个斑点的存在下检测由荧光团发射的信号的吸收剂粒子的方法

本发明也涉及一种用于选择还允许检测由在固体支持体的一个或多个斑点中存在的荧光团发射的信号的吸收剂粒子的方法，所述方法包括以下步骤：

a)与固体支持体的区划的一个或多个斑点接触地安放包含待测试的吸收剂粒子或待测试的吸收剂粒子的混合物的液相，所述区划的斑点中的至少一个包含荧光团，

b)在包含所述待测试的吸收剂粒子或所述待测试的吸收剂粒子的混合物的所述液相的存在下，检测由所述荧光团发射的信号，以及，

c)选择吸收剂粒子或吸收剂粒子的混合物，在所述吸收剂粒子或吸收剂粒子的混合物的存在下在步骤b)中检测的信号使得可以将包含所述荧光团的一个或多个斑点定域化(localize)。

待测试的或被包含在待测试的混合物中的吸收剂粒子是这样的粒子：其吸收在与人们寻求减少(部分地或全部地)的信号即在光干涉的源头处的信号的发射波长范围部分或完全交叠的波长范围中的光。

对于待测试的吸收剂粒子中的每一种或待测试的吸收剂粒子的混合物中的每一种进行步骤a)。

在步骤a)中，可以将待测试的吸收剂粒子或待测试的吸收剂粒子的混合物添加在若干个区划中，例如，以不同的浓度，以测试所述吸收剂粒子的不同浓度或所述吸收剂粒子的混合物的不同浓度。

对于待测试的吸收剂粒子的每种或待测试的吸收剂粒子的不同混合物的每种，使用不同的区划。

具有吸收剂粒子的基本组分(base)的吸收剂组合物

在一个优选的实施方案中，以吸收剂组合物的形式供给如上在“吸收剂粒子”段落中定义的吸收剂粒子。

本发明因此也涉及吸收剂组合物，其包含如上定义的使得可以改进(并因此确保)在斑点上的多重分析方法的信号的检测的吸收剂粒子。

在此，根据本发明的包含吸收剂粒子的吸收剂组合物称为分散体。

“分散体”是指固体粒子在液体中的混合物，所述固体粒子具有被包含在0.005μm至50μm，0.005μm至40μm，0.005μm至30μm，0.005μm至20μm，0.005μm至10μm，0.005μm至6μm，0.01μm至2μm，优选0.01μm至1μm的平均直径。

根据本发明的吸收剂组合物可以包含1％至80％的吸收剂粒子，优选2％至60％的吸收剂粒子，更优选5％至50％的吸收剂粒子，更优选7％至40％的吸收剂粒子，再更优选10％至30％的吸收剂粒子，百分比由吸收剂组合物总重量中的重量表示。例如，吸收剂组合物可以包含10％至20％的吸收剂粒子，更优选12％至18％的吸收剂粒子，百分比由吸收剂组合物总重量中的重量表示。例如，吸收剂组合物包含15％的吸收剂粒子，百分比由吸收剂组合物总重量中的重量表示。

在一个有利的实施方案中，吸收剂组合物包含吸收剂粒子和至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：载体、粘合剂和添加剂。

在吸收剂组合物中使用的载体可以是溶剂，例如水。

在吸收剂组合物中使用的溶剂可以例如是，甲基乙基酮(MEK)、乙酸酯、二醇醚、醇或它们的组合。

粘合剂尤其使得可以调节吸收剂组合物的粘度。

粘合剂的实例是酚醛树脂和/或共聚物。

添加剂是例如杀生物剂和/或抗泡剂。

一种优选的根据本发明的吸收剂组合物包含以下各项或由以下各项组成：吸收剂粒子、水、任选地钠盐和任选地杀生物剂，所述吸收剂粒子能够与一种或若干种官能团偶联。一种再更优选的根据本发明的吸收剂组合物包含以下各项或由以下各项组成：碳粒子(优选炭黑粒子)、水、任选地钠盐和任选地杀生物剂，所述碳粒子能够偶联到一种或若干种官能团，例如4-羧基苯基-、羟基-和/或4-磺基苯基-基团。

有利地，吸收剂粒子在吸收剂组合物中很少沉降，从而具有随时间保持稳定的粒子的均匀的分散体，而不需混合所述组合物。

吸收剂组合物优选具有比较低的粘度，使得它可以容易地被吸液。

吸收剂组合物优选具有被包含在0.5cP至3cP，更优选1cP至2.5cP的粘度。吸收剂组合物例如具有2.1cP的粘度。

粘度可以经由本领域技术人员熟知的任何适当的方法测量，例如，使用旋转粘度计，例如Brookfield型的。

吸收剂组合物的pH优选被包含在7至12，优选8至10，例如9.7。

表面张力优选被包含在60达因/cm至80达因/cm，优选65达因/cm至75达因/cm，例如70达因/cm。

表面张力可以经由本领域技术人员熟知的任何适当的方法测量，例如，使用Kruss型的张力仪。

在一种有利的实施方案中，吸收剂组合物不包含聚合物或表面活性剂。

吸收剂组合物可以包含以下各项或由以下各项组成：Cabot(美国)的352K产品、400产品、200产品，Solution Dispersions(美国)的5109产品、6152产品、6353产品或它们的组合。

吸收剂组合物也可以包含以下各项或由以下各项组成：以Cabot(美国)的270产品的形式供给的黄色吸收剂粒子和以Cabot(美国)的260M产品的形式供给的品红色吸收剂粒子。

吸收剂组合物可以包含上述特征中的一项、或若干项、或全部。

一种优选的根据本发明的吸收剂组合物具有以下特征中的至少一项，优选以下特征中的至少两项、至少三项或至少四项，例如至少五项、至少六项，或全部：

-它包含直径小于0.5μm，例如小于0.45μm的吸收剂粒子，

-它包含平均直径被包含在0.06μm至0.1μm，例如平均直径为0.070μm的吸收剂粒子，

-它包含在其表面上附接官能团的吸收剂粒子，

-它包含12％至18％的吸收剂粒子，例如15％的吸收剂粒子，百分比由吸收剂组合物总重量中的重量表示。

-它具有被包含在65达因/cm至75达因/cm，例如70达因/cm的表面张力，

-它具有被包含在8至10，例如9.5的pH，和/或

-它具有被包含在1cP至2.5cP的粘度，例如2.1cP的粘度。

根据本发明的吸收剂组合物也可以在使用前被稀释，尤其是在水或任何其他与所用的信号的检测相容并且尤其是与导致发光化合物的产生的酶促反应相容的溶剂(例如在本申请中描述的溶剂)中。例如，根据本发明的吸收剂组合物可以被稀释10至2000倍，优选100至1000倍，例如100倍，200倍，500倍或1000倍。

吸收剂组合物也可以包含以下物质或由以下物质组成：如上所述的黄色粒子和品红色粒子的混合物。

有利地，吸收剂组合物包含吸收剂粒子和至少一种涉及发光化合物尤其是化学发光化合物的产生的化合物。

一种优选的根据本发明的吸收剂组合物因此包含以下各项或由以下各项组成：吸收剂粒子、至少一种涉及化学发光化合物的产生的化合物、水、任选地钠盐和任选地杀生物剂，所述吸收剂粒子可以偶联到一种或若干种官能团。一种再更优选的根据本发明的吸收剂组合物包含以下各项或由以下各项组成：碳粒子(优选炭黑粒子)、至少一种涉及化学发光化合物的产生的化合物、水、任选地钠盐和任选地杀生物剂，所述碳粒子能够偶联到一种或若干种官能团，例如4-羧基苯基-、羟基-和/或4-磺基苯基-基团。

出人意料地，这样的具有吸收剂粒子的基本组分和至少一种涉及化学发光化合物的产生的化合物的组合物是随时间稳定的。

表述“随时间稳定的”意指：在相同的分析方法的实施期间，在D0上使用吸收剂组合物检测的信号与在将所述吸收剂组合物在4℃和/或37℃保存至少一个月、优选在4℃至少3个月、例如在4℃3个月、6个月、一年或两年之后使用所述吸收剂组合物检测的信号基本上是同样的。

表述“基本上是同样的”意指：检测的信号变化不大于40％，优选不大于30％，更优选不大于20％。

因此，吸收剂组合物可以与在分析方法的上下文中使用的、尤其是在一个或多个显影步骤期间使用的一种或若干种组合物和/或一种或若干种化合物混合。

在一种有利的实施方案中，根据本发明的吸收剂组合物还包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物、电子介体和氧化剂。

鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物、过氧物酶、电子介体和氧化剂尤其是如上文定义的。

一种优选的吸收剂组合物包含吸收剂粒子例如碳的粒子、至少一种选自鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物中的化合物、和任选地电子介体。

另一种优选的吸收剂组合物包含吸收剂粒子例如碳的粒子、和至少一种氧化剂如过氧化物。

根据本发明的吸收剂组合物有利地包含至少一种溶剂。

在吸收剂组合物中使用的溶剂优选与导致发光化合物的产生的酶促反应(如过氧物酶与鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物的反应)相容。

一种优选的能够在吸收剂组合物中使用的溶剂是水。

优选的吸收剂组合物的另一个实例包含吸收剂粒子例如碳的粒子，并且不包含鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物、电子介体或氧化剂。例如，这样的吸收剂组合物包含以下各项或由以下各项组成：碳粒子和溶剂例如水。

用于在一个或多个斑点上实施分析方法的试剂盒

本发明也涉及用于实施分析方法(尤其是使用包含至少一个斑点的固体支持体的分析方法)的试剂盒，所述试剂盒包括至少两种组合物：

-第一组合物，所述第一组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：鲁米诺、异鲁米诺、和鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，且任选地包含至少一种电子介体，

-第二组合物，所述第二组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：氧化剂和电子介体，所述第二组合物优选包含至少一种氧化剂，和任选地至少一种电子介体，

其特征在于第一组合物和/或第二组合物包含吸收剂粒子，和/或所述试剂盒包含含有吸收剂粒子的第三组合物。

吸收剂粒子和固体支持体尤其是如上文定义的。

本发明尤其涉及用于实施分析方法(尤其是使用包含至少一个斑点的固体支持体的分析方法)的试剂盒，所述试剂盒包含：

-第一吸收剂组合物，所述第一吸收剂组合物包含吸收剂粒子和至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：鲁米诺、异鲁米诺、和鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，且任选地包含至少一种电子介体，和

-第二组合物，所述第二组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：氧化剂和电子介体，所述第二组合物优选包含至少一种氧化剂，和任选地至少一种电子介体。

本发明尤其涉及用于实施分析方法(尤其是使用包含至少一个斑点的固体支持体的分析方法)的试剂盒，所述试剂盒包含：

-第一组合物，所述第一组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：鲁米诺、异鲁米诺、和鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，且任选地包含至少一种电子介体，和

-第二吸收剂组合物，所述第二吸收剂组合物包含吸收剂粒子和至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：氧化剂和电子介体，所述第二吸收剂组合物优选包含至少一种氧化剂，和任选地至少一种电子介体。

本发明尤其涉及用于实施分析方法(尤其是使用包含至少一个斑点的固体支持体的分析方法)的试剂盒，所述试剂盒包含：

-第一组合物，所述第一组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：鲁米诺、异鲁米诺、和鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，且任选地包含至少一种电子介体，

-第二组合物，所述第二组合物包含至少一种选自由以下各项组成的组的化合物：氧化剂和电子介体，所述第二组合物优选包含至少一种氧化剂，和任选地至少一种电子介体，和

-第三吸收剂组合物，所述第三吸收剂组合物包含吸收剂粒子。分析方法有利地是多重分析方法。

信号的检测的改进

如上定义的吸收剂粒子的用途或如上定义的包含它们的吸收剂组合物的使用时的可以改进(并因此确保)在一个或多个斑点上的分析方法(优选在斑点上的多重分析方法)中的信号的检测，尤其是当在液相的存在下进行信号的检测时。

“改进信号的检测”尤其意指减少背景噪声，且更具体地意指：在吸收剂粒子或包含它们的吸收剂组合物的存在下，相对于在它们不存在的情况下获得的“被检测的信号/背景噪声”比率，改进“被检测的信号/背景噪声”比率。

用于评估“被检测的信号/背景噪声”比率的改进的“被检测的信号”是例如：在待检测的被分析物在试样中的存在下在给定斑点处(即，所述斑点所在的位置上)测量的或在已知量的待分析的被分析物的存在下在给定斑点处(即，所述斑点所在的位置上)测量的信号的强度。

优选地，用于评估“被检测的信号/背景噪声”比率的改进的“被检测的信号”是：在当不存在吸收剂粒子时被分析物以引起光干涉(如光弧和/或孪生斑点和/或光网)的量存在的情况下在给定斑点处(即，所述斑点所在的位置上)测量的信号的强度。

在斑点处测量的信号的强度通常以RLU(相对光单位)表示。

本领域技术人员知道如何基于所用的一种或多种检测标记物在斑点处(即，所述斑点所在的位置上)检测信号，尤其是使用照相机，其有利地位于固体支持体下方。

“背景噪声”是在不包含斑点的固体支持体的区划的背景的区域处测量的光强度。

背景噪声强度通常以RLU(相对光单位)表示。

当“被检测的信号/背景噪声”比率增加(例如通过增加被检测的信号和减少背景噪声，或通过减少被检测的信号并进一步减少背景噪声)时，在“被检测的信号/背景噪声”比率上存在改进。

根据本发明的吸收剂粒子的使用使得：在吸收剂粒子的存在下相比于不存在吸收剂粒子，优选将“被检测的信号/背景噪声”比率增加至少5％，优选至少10％，更优选至少15％，更优选至少20％，再更优选至少25％，例如至少30％，或至少40％。

本发明特别适合用于基于化学发光显影的在一个或多个斑点上的分析方法，尤其是在斑点上的多重分析方法。事实上，对于通过化学发光发射的信号来说，为了允许通过将信号放大检测捕捉配体-被分析物-检测配体相互作用，对于酶促反应来说必须在信号的检测期间持续，并且因此对于酶的底物来说，在检测信号的时候要存在于斑点处的液相中。

在本发明的上下文中，吸收剂粒子，例如以吸收剂组合物的形式供给的吸收剂粒子，必须在检测信号时存在。

可以在加入对于化学发光反应来说必须的化合物中的一种或若干种之前、之时或之后，加入吸收剂粒子。在所有情况下，吸收剂粒子在获得信号的时候必须存在。

对于化学发光反应来说必须的化合物通常是酶(例如，过氧物酶)，酶的底物(例如，鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物)，任选地至少一种其他化合物如氧化剂(例如，过氧化物)和/或电子介体(例如，3-(10’吩噻嗪)丙烷1-磺酸钠)。

用于改进信号的检测的方法

本发明特别涉及使得可以改进(并因此确保)对应于被分析物的存在的信号的检测的分析方法，尤其是多重分析方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：

a)提供固体支持体，所述固体支持体包含至少一个区划，所述区划包含用于检测被分析物的至少一个斑点，

b)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放待分析的试样，

c)在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放被分析物的至少一种检测配体，所述被分析物的检测配体与直接或间接检测标记物偶联，

d)当所述检测标记物是间接检测标记物时，在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放与所述检测配体偶联的所述间接检测标记物的报道物，

e)当在步骤d)中使用的报道物与间接标记物偶联时，在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放与所述报道物偶联的所述间接检测标记物的报道物，

f)在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放吸收剂粒子，所述吸收剂粒子被包含在与所述区划的所述一个或多个斑点接触的液相中，以及

g)在包含所述吸收剂粒子的所述液相的存在下，检测在所述区划的所述一个或多个斑点处对应于被分析物的存在的信号。

根据本发明的方法优选首先包括步骤a)；随后步骤b)和c)，其可以按此顺序完成，或步骤c)在步骤b)之前，或步骤b)和c)同时；随后步骤d)；随后步骤e)和f)，其可以按此顺序完成，或步骤f)在步骤e)之前，或步骤e)和f)同时；随后步骤g)。

在一个优选的实施方案中，步骤f)与步骤e)同时进行。

在步骤f)和步骤g)之间(无论步骤e)在步骤f)之前、之后或同时完成)不进行洗涤步骤，使得在检测信号的时候吸收剂粒子存在。

当步骤c)在步骤b)之前完成时，在步骤c)和b)之间没有洗涤步骤。

表述“在区划的一个或若干个斑点的存在下安放化合物X”尤其意指：将化合物X加入到包含所述一个或多个斑点的区划中，所述区划优选意在分析试样，且所述化合物X优选以包含它的组合物如溶液、分散体或悬浮液的形式被供给。

当在区划的一个或多个斑点的存在下在同一步骤期间和/或当同时进行步骤b)到f)中的至少两个时要安放至少两种化合物时，可以单独地在所述一个或多个斑点的存在下安放所述化合物，即，以单独的组合物的形式(尤其是以单独的溶液、分散体或悬浮液的形式)供给所述化合物；备选地，可以在区划的一个或多个斑点的存在下以一种或若干种混合物的形式安放所述化合物或化合物中的一些。

在至少一个区划的斑点的存在下安放不同的化合物达一定的时间长度，例如1秒至2小时，优选1分钟至1小时，更优选5分钟至50分钟，再更优选10分钟至40分钟。

本领域技术人员知道如何确定对于每个温育步骤来说适当的温度。温育的温度可以例如是4℃，被包含在19℃至24℃、37℃或40℃的温度。

在步骤b)、c)、d)和e)期间施用的不同的组分是本领域技术人员熟知的。它们例如使得可以形成抗原-抗体配合物和标记物-报道物配合物。

方法还包括一个或若干个洗涤步骤，所述洗涤步骤使得可以消除未结合到斑点的的化合物或结合到各种直接或间接结合到斑点的化合物的化合物。

典型地，洗涤步骤由至少一个用于在每个所用的区划中分配(例如，400μl的体积)洗涤和吸出洗涤溶液的循环组成，优选至少两个循环，更优选3至6个循环。

对于每个包含至少一个意在检测被分析物的斑点的固体支持体的在其中分析试样的区划，尤其进行步骤b)至g)。

步骤a)包括提供包含至少一个区划的固体支持体，所述区划包含至少一个用于检测被分析物的斑点，优选至少两个用于检测被分析物的斑点。

步骤a)尤其意指使用所述固体支持体实施分析方法，即使用所述固体支持体。

固体支持体尤其是如在上文在“固体支持体”段落中定义的。

在一种有利的实施方案中，固体支持体包含至少一个区划，所述区划中至少一个斑点包含作为用于一个或多个斑点的对照的荧光团；优选地，固体支持体包含至少一个区划，所述区划中斑点包含作为用于斑点的对照的荧光团。

在步骤b)中，在固体支持体的区划的一个或多个斑点的存在下安放待分析的试样。

待分析的试样和要被检测的一种或多种被分析物尤其是如在上文在“试样”和“被分析物”段落中定义的。

在步骤c)中，在所述区划的所述一个或多个斑点的存在下安放被分析物的至少一种检测配体，所述被分析物的检测配体与直接或间接检测标记物偶联。

被分析物的检测配体尤其是如上文定义的。

在一个优选的实施方案中，被分析物的检测配体与间接检测标记物偶联，所述间接检测标记物优选选自由以下各项组成的组：生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白和中性抗生物素蛋白。

当检测标记物是间接检测标记物时，方法包括步骤d)，该步骤包括以下内容或由以下内容组成：在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放与所述检测配体偶联的间接检测标记物的报道物(也称作第一报道物)，所述报道物随后与直接或间接标记物偶联，优选与间接标记物偶联。

在一个优选的实施方案中，与被分析物的检测配体偶联的间接检测标记物的报道物选自由以下各项组成的组：生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白和中性抗生物素蛋白。

例如，被分析物的检测配体偶联到生物素，且生物素的报道物是偶联到直接或间接检测标记物(优选间接检测标记物)的链霉抗生物素蛋白。

当在步骤d)中使用的报道物(即，第一报道物)与间接标记物偶联时，方法还包括步骤e)，该步骤包括在所述区划的一个或多个斑点的存在下安置与所述报道物偶联的所述间接检测标记物的报道物(即，第二报道物)。

例如，被分析物的检测配体与生物素偶联，且生物素的报道物是与到酶偶联的链霉抗生物素蛋白。那么酶的报道物(即，第二报道物)是所述酶的底物。

在步骤f)中，在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放吸收剂粒子。

吸收剂粒子尤其是如上文在“吸收剂粒子”段落中定义的。

尤其是，吸收剂粒子优选为碳粒子，例如炭黑的粒子，或彩色粒子的混合物，例如黄色彩色粒子和品红色彩色粒子的混合物。

吸收剂粒子可以以如上文在“吸收剂组合物″”段落中定义的吸收剂组合物的形式被供给。

在一种有利的实施方案中，以包含选自由以下各项组成的组的至少一种化合物的吸收剂组合物的形式供给吸收剂粒子：鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物、电子介体和氧化剂。

当吸收剂组合物还包含选自由以下各项组成的组的至少一种化合物时，步骤e)和f)因此同时进行：鲁米诺、异鲁米诺、鲁米诺或异鲁米诺的衍生物、电子介体和氧化剂。

在步骤f)结束时，吸收剂粒子被包含在与所述区划的一个或多个斑点接触的液相中。

在此，“与所述区划的一个或多个斑点接触的液相”意指液体组合物存在于所述区划中，所述组合物例如能够是溶液、分散体或悬浮液。

在步骤f)中的液相可以包含以下物质或由以下物质组成：根据本发明的吸收剂组合物，尤其取决于步骤f)是否在步骤e)之前进行。

在步骤f)中的液相可以包含根据本发明的吸收剂组合物或由根据本发明的吸收剂组合物组成，尤其是取决于步骤f)是否在步骤e)之前进行。当步骤f)与步骤e)同时或在其之后进行时，步骤e)中的液相可以包含吸收剂组合物。

步骤g)包括检测在所述区划的一个或多个斑点处对应于被分析物的存在的信号，所述信号的检测在包含所述吸收剂粒子的液相的存在下完成。

在步骤g)中的液相可以与步骤f)中的液相是同样的，尤其是当步骤f)在步骤e)之后进行时。

在步骤g)中的液相可以与步骤f)中的液相是不同的，尤其是当步骤f)在步骤e)之前进行时。

当吸收剂粒子以吸收剂组合物的形式被供应时，步骤g)中的液相包含所述吸收剂组合物或由所述吸收剂组合物组成。

当在分析方法中使用若干种不同的检测标记物来检测一种或多种被分析物时，步骤g)包括检测与存在的所用的检测标记物同样多的不同的信号。

对应于被分析物的存在的在步骤g)中检测的信号是例如由发光化合物(优选化学发光化合物)发射的信号，和/或由荧光团发射的信号。

在一个优选的实施方案中，对应于被分析物的存在的在步骤g)中检测的信号是由发光化合物(优选化学发光化合物)发射的信号，和任选地由荧光团发射的信号。

在一个更优选的实施方案中，对应于被分析物的存在的在步骤g)中检测的信号不是由荧光团发射的信号。

优选地，对应于被分析物的存在的在步骤g)中检测的信号是由化学发光化合物发射的信号。

因此，步骤g)至少包括检测对应于被分析物的存在的在所述区划的一个或多个斑点处发射的信号，该对应于被分析物的存在的信号优选是由化学发光化合物发射的。

在一个优选的实施方案中，在步骤g)中检测的对应于被分析物的存在的信号因此是由化学发光化合物发射的。在一个优选的实施方案中，步骤g)因此包括，在包含所述吸收剂粒子的液相的存在下，检测通过化学发光产生的在所述区划的一个或多个斑点处的对应于被分析物的存在的信号。

此外，步骤g)可以有利地包括检测在固体支持体的至少一个区划的一个、若干个或一个或多个斑点处作为对照存在的荧光团发射的信号。

本领域即使人员知道如何测量发射的信号，例如，经由发光化合物或经由荧光团，基于所述发光化合物或所述荧光团的属性。

优选在步骤g)中通过固体支持体的底部检测信号。

信号的检测优选包含在一个或多个斑点处发射的信号的强度的测量，所述测量优选通过固体支持体的底部，即在固体支持体的下表面处完成。

尤其使用捕捉固体支持体的底部的图像的照相机来完成信号的检测。测得的信号因此是朝向所述固体支持体的下表面穿过固体支持体的。

照相机可以例如朝向固体支持体的底部定向，或可以使用光学系统(其可以例如包含以下各项或由以下各项组成：一个或若干个镜子、棱镜和/或一个或若干个透镜)捕捉固体支持体的底部的图像。

由荧光团发射的信号的强度的测量需要用对应于荧光团的激发光谱的光照明一个或多个区划，优选固体支持体的底部。

根据本发明的方法因此使得可以改进在一个或多个斑点上的分析方法中对应于被分析物的存在的信号的检测，尤其是当在液相的存在下完成信号检测时。

信号检测的改进包含以下各项或由以下各项组成：减少背景噪声，优选增加“被检测的信号/背景噪声”比率。

“被检测的信号/背景噪声”比率尤其是如上文定义的。

一种优选的使得可以改进在分析方法尤其是多重分析方法中对应于被分析物的存在的信号的检测的方法是如上文定义的包括以下步骤的方法：

a)提供包含至少一个区划的固体支持体，所述区划包含用于检测被分析物的至少一个斑点，所述斑点包含所述被分析物的捕捉配体，和优选地荧光团，

b)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放待分析的试样，

c)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放被分析物的至少一种检测配体，所述被分析物的检测配体与间接检测标记物(优选生物素)偶联，

d)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放与所述检测配体偶联的间接检测标记物的报道物(优选链霉抗生物素蛋白)，

e)当在步骤d)中使用的报道物与过氧物酶偶联时，在所述区划的一个或多个斑点的存在下，安放所述酶的底物，例如鲁米诺、异鲁米诺和/或鲁米诺或异鲁米诺的衍生物，

e1)当在步骤d)中使用的报道物与过氧物酶偶联时，在所述区划的一个或多个斑点的存在下，安放至少一种氧化剂例如过氧化物，和任选地至少一种电子介体例如3-(10’酚噻嗪基)丙烷1-磺酸钠，所述步骤e1)能够在步骤e)之前，步骤e)之后或与步骤e)同时完成，

f)在所述区划的一个或多个斑点的存在下安放吸收剂粒子，优选碳粒子或黄色彩色粒子和品红色彩色粒子的混合物，所述吸收剂粒子被包含在与所述区划的一个或多个斑点接触的液相中，步骤f)可以在步骤e)之前或之后，步骤e1)之前或之后，或与步骤e)和/或步骤e1)同时完成，以及

g)在包含所述吸收剂粒子的液相的存在下，检测对应于在所述区划的一个或多个斑点处被分析物的存在的信号。

可以使用如上定义的试剂盒实施根据本发明的方法。

吸收剂粒子用于改进信号检测的用途

本发明特别涉及吸收剂粒子用于改进(并因此确保)在包含至少一个斑点的固体支持体上的分析方法中(尤其是多重分析方法中)对应于被分析物的存在的信号检测的用途。

固体支持体尤其是如上文在“固体支持体”段落中定义的。

固体支持体尤其包含至少一个区划，所述区划包含用于被分析物的检测的至少一个斑点，优选用于被分析物的检测的至少两个斑点。

吸收剂粒子尤其是如上文在“吸收剂粒子”段落中定义的。尤其是，吸收剂粒子优选为碳粒子，例如炭黑的粒子，或彩色粒子的混合物，例如黄色彩色粒子和品红色彩色粒子的混合物。

本发明尤其涉及如上定义的用途，其特征在于吸收剂粒子优选为碳粒子，优选炭黑的粒子，或彩色粒子的混合物，例如黄色彩色粒子和品红色彩色粒子的混合物。

吸收剂粒子可以以如上文在“吸收剂组合物”段落中定义的吸收剂组合物的形式被供给。

在一个更优选的实施方案中，本发明尤其涉及碳粒子，优选炭黑粒子，或彩色粒子的混合物，优选黄色彩色粒子和品红色彩色粒子的混合物的以下用途：改进在一个或多个斑点上的分析方法中(尤其是在一个或多个斑点上的多重分析方法中)对应于被分析物的存在的信号的检测。

本发明更具体地涉及如上定义的用途，其特征在于，在液相的存在下完成对应于被分析物的存在的信号的检测。

信号的检测优选包括在一个或多个斑点处发射的信号的强度的测量，所述测量优选在固体支持体的下表面处完成。尤其使用捕捉固体支持体的底部的图像的照相机来完成信号的检测。

如上文指出的，照相机可以例如朝向固体支持体的底部定向，或可以使用光学系统(其可以例如包含以下各项或由以下各项组成：一个或若干个镜子、棱镜和/或一个或若干个透镜)捕捉固体支持体的底部的图像。

本发明特别涉及如上所述的方法，其特征在于增加被检测的信号/背景噪声比率。

“被检测的信号/背景噪声”比率尤其是如上文定义的。

本发明优选涉及如上文定义的用途，其特征在于，对应于被分析物的存在的信号是由化学发光化合物和/或荧光团(优选由化学发光化合物)发射的信号。

本发明也涉及如上定义的用途，其中使用如上定义的固体支持体实施分析方法，尤其是包含至少一个其的至少一个斑点包含荧光团作为用于一个或多个斑点的对照的区划的固体支持体，优选包含至少一个其的斑点包含作为用于斑点的对照的荧光团的区划的固体支持体。

本发明也涉及吸收剂粒子用于改进(并因此确保)使用如上定义的试剂盒在如上定义的斑点上的多重分析方法中的信号的检测的用途。

本发明的其他特征和优点将通过以下实施例更好地显现，所述实施例作为说明并且非限制性地被提供。这些实施例和图说明了本发明，而不限制它的范围。

图

图1：微量培养板的孔的图示的横截面。在孔的底部上显示了三个实际的斑点，底部由透明膜组成。向下指的空心箭头显示了实际有用的发射，其朝向照相机。实心箭头显示了在孔中的光射线的路径。这些箭头说明了起源自在液体中光的漫射、在孔壁上、在液体/空气界面处和在弯月面处的反射的光假象(artifact)的存在。

图2：微量培养板的孔的图示的横截面。在孔的底部上显示了三个实际的斑点，底部由透明膜组成。向下指的空心箭头显示了实际有用的发射，其朝向照相机。实心箭头显示了在孔中的光射线的路径和这些射线的强度。黑色圆点显示了吸收剂粒子，其使得可以吸收在液体介质中发射的光，因此降低了在液体介质中光的漫射以及在孔壁处、在空气/液体界面处和在弯月面处的光假象。

图3：具有试样S1的孔的图像，没有加入吸收剂组合物。1：光环。2：光弧。

图4：具有试样S1的孔的图像，具有以1/1000稀释的吸收剂组合物。

图5：具有试样S1的孔的图像，具有以1/500稀释的吸收剂组合物。

图6：具有试样S1的孔的图像，具有以1/200稀释的吸收剂组合物。

图7：具有试样S1的孔的图像，具有以1/100稀释的吸收剂组合物。

图8：具有试样S2的孔的图像，没有加入吸收剂组合物。箭头指示孪生斑点。

图9：具有试样S2的孔的图像，在与图8相同的条件下，但在以1/200稀释的吸收剂组合物的存在下。

图10：基于包含碳粒子的吸收剂组合物的稀释，孔的底部(下方曲线)和参比斑点的信号(上方曲线)的亮度水平的相对于参比条件(没有碳粒子)归一化的强度。

图11：包含碳粒子的吸收剂组合物的稀释对被检测的信号/背景噪声比率的改进。

图12：相对于没有吸收剂溶液的条件的参比斑点的信号的强度的演变，在加入吸收剂粒子的情况下(上方曲线)和加入染料的情况下(下方曲线)，基于存在的液相的光密度。

图13：在吸收剂粒子的存在下通过荧光的斑点检测。

实施例

材料和方法

使用具有96个孔的微量培养板完成多重分析方法，所述孔包含9个斑点/孔(在第1条线上的3个斑点编号1至3，在第2条线上的3个斑点编号4至6，在第3条线上的3个斑点编号7至9)。

1号斑点包含以高浓度存在于使用的参比试样S1中的被分析物AH的专门捕捉配体。

在分析方法期间，在37℃在孔的斑点的存在下安放试样S1达40分钟。在孔的洗涤之后，向孔中加入存在于参比试样S1中并且与生物素偶联的被分析物的或对应于被分析物AH的专门捕捉配体。在37℃温育15分钟之后，洗涤孔，并且向孔中加入与过氧物酶偶联的链霉抗生物素蛋白报道物。在37℃温育15分钟之后，洗涤孔。“ELISTAR ETAC Ultra ELISA(Cyanagen，Italy)”试剂盒用于显影步骤，根据制造商的手册。它由供给两种溶液组成：溶液A包含酶的底物即鲁米诺和电子介体(3-(10’酚噻嗪基)丙烷1-磺酸钠)，且溶液B包含氧化剂(过氧化物溶液)。在获得信号之前，如果可用，向孔中加入包含碳粒子的吸收剂组合物的稀释物。吸收剂组合物可以以与溶液B或溶液A的混合物的方式添加，在两种模式中观察到的结果没有可注意到的差异。在此实施例中使用的吸收剂组合物是Cabot(美国)制备的352K。

使用由CDD照相机通过远心物镜摄取的图像，测量通过由从酶促反应所得的化学发光的产物的化学发光发射的信号。

也在同一图像上测量孔的底部的亮度水平。

为了测量由荧光产生的信号，发射集中在620nm的波长的红色光的照明系统均匀地照亮固体支持体的下表面。排布在照相机的输入处且具有集中在680nm处的带宽的滤镜使得可以切断此红色激发光。它允许由在斑点中存在的荧光团发射的光通过。使用此装置测量由斑点通过荧光发射的信号。

结果

(i)在碳粒子的存在下信号的检测的改进

在试样S1的情况下，对应于被分析物AH的斑点(在斑点网格中的1号斑点)处发射非常强的光。

在参比条件下(参看图3)，在不存在吸收剂组合物的情况下，即在不存在碳粒子的分散体的情况下，人们可以看到在孔的底部的整个周缘上的光环(1)，其由通过充当平凹透镜(planner-concave lens)的液体看到的孔的竖直壁的像导致。该环可以在对应于高度明亮的被分析物的斑点附近显示极大的强度，并且因此具有光弧(2)。因此在孔的整个底部上存在光网。

在悬浮液中的碳粒子的存在下，人们可以看到在孔的周缘上的光环的消失和光网的减弱(参看图4至7)。

在不存在吸收剂组合物的情况下，人们有时看到，从斑点位移，有一个稍小的光斑，其由在背景中在液体的表面上的斑点的反射造成(参看试样S2的图8)。在悬浮液中的碳粒子的存在下，人们可以看到此前观察到的斑点的反射的消失(参看图9)。

在试样S1的情况下，以RLU(相对光单位)数测量了参比斑点(斑点8或斑点Aref)的信号的强度和孔的底部的亮度水平(参看表1)。

在表1中显示的结果来自两个不同的板。第一板对应于1/1000和1/500稀释，且第二对应于1/200和1/100稀释。

表1：参比斑点的信号的强度和孔的底部的亮度水平

人们可以看到，当人们加入更多的碳粒子时，光强度降低。有趣的效果是，孔的底部的亮度水平比参比斑点的水平降低得更快(参看表1和图10)。孔的底部的亮度据认为是不想要的，在人们寻求量化的信号的测量中产生噪声。人们可以因此得出结论，通过加入处于悬浮液中的碳粒子，改进了被检测的信号/背景噪声比率。

表2：基于吸收剂组合物的稀释，被检测的信号/背景噪声比率的改进

表2和图11中所示的结果显示，当人们增加碳粒子的浓度时被检测的信号/背景噪声比率的改进。

(ii)碳粒子对酒石黄获得的性能的比较

在450nm(接近最大化学发光发射)处，研究在含有掺杂有酒石黄的溶液的孔的光密度(OD)和含有掺杂有在悬浮液中的碳粒子的溶液的孔的光密度。发明人实际上显示了，出人意料地，酒石黄也使得可以消除当在液相中获得信号时发生的光干涉的一些或全部。

表3：基于吸收剂粒子组合物的稀释，参比斑点的演变

表4：基于吸收剂酒石黄组合物的稀释，参比斑点的演变

表3和4中所示的结果显示，对于使用250μg/ml的酒石黄来说，获得0.3的OD。用以1/1000稀释的碳粒子的分散体获得等效情况。在参比斑点上，在碳粒子的存在下观察到8％的信号损失，且在酒石黄的存在下观察到12％。对于使用4000μg/ml浓度的酒石黄来说，获得接近3.8的OD。用以1/100稀释的碳粒子的分散体获得等效情况。在参比斑点上，在碳粒子的存在下观察到小于20％的信号损失，且在酒石黄的存在下观察到大于50％。因此，加入在悬浮液中的碳粒子比酒石黄更加有利，因为在相等的液相的光密度时，它较少影响被检测的信号(参看图12)。

(iii)在吸收剂粒子的存在下通过荧光进行的斑点的检测

还验证了，事实上在吸收剂粒子的存在下检测了由在微量培养板的斑点中存在的作为对照的荧光团发射的信号。

如在图13中可见的，在包含Cab-O-Jet 352K产品(1/200稀释)的吸收剂溶液的存在下，通过荧光检测的信号使得可以相对于孔的底部非常清楚地限定斑点的位置。因此，吸收剂的加入没有阻止通过由作为对照存在于斑点中的荧光团的荧光发射的信号的检测。

然而，通过荧光获得的背景噪声在吸收剂粒子的存在下相对于不存在它们的情况下获得的背景噪声翻倍。作为结果，该被探测的信号比噪声比率降低一半。