用于埃博拉和其他传染病的实时诊断测试(RDT)的方法和装置与流程

相关申请的交叉引用本申请要求以下专利申请的权益和优先权：2014年10月8日提交的美国专利申请62/061,671；2014年10月10日提交的美国专利申请62/062,808；2014年11月7日提交的美国专利申请62/077,011；2014年11月7日提交的美国专利申请62/077,016；2014年12月19日提交的美国专利申请62/094,848；2014年12月19日提交的美国专利申请62/094,856，其全部内容出于所有目的，通过引用而全文并入于此。
背景技术：
：埃博拉是一种高度接触传染性疾病，其导致大多数患有该疾病的患者死亡。(术语“埃博拉”通常用来指诱导出血热的埃博拉病毒的所有种和株，包括扎伊尔(zaire)、sudan、taiforest、bundibugyo和reston型。)最初的症状类似于许多病毒性病症的症状，这些其他病毒性病症中的大部分不需要隔离。2014年在西非爆发的埃博拉突显了早期诊断埃博拉受害者的重要性，以便开始对这些受害者的治疗，和以便快速对其进行隔离以防止该疾病的进一步传播。然而，检测和诊断埃博拉的现有方法耗时、昂贵、复杂，且通常需要乡村地区不常获得的实验室设备。序列表本申请包含已经以ascii格式电子提交的序列表，并且通过引用其全文并入本文。在2005年10月7日创建的所述ascii拷贝被命名为3042.601_sl.txt，并且大小为51,058个字节。援引并入本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用而并入本文，其程度犹如特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。技术实现要素：申请人提供了用于鉴定埃博拉病毒和用于鉴定作为埃博拉感染的指标或特征的血液标志物的测定、装置、试剂盒、方法和系统。这些测定和测定方法从小体积样品诸如小体积血液样品提供快速结果。当应用于小体积血液样品诸如手指针刺血液样品(包括但不限于小到250μl或更小的样品)时，这些测定、装置、试剂盒、方法和系统是有效的。这些测定和测定方法是快速的，并且在短时间内提供结果，例如，在从样品分析开始时起的三小时或更短时间内、两小时或更短时间内或者一小时或更短时间内提供结果。在实施方式中，这些测定和测定方法在短时间内提供结果，例如，在从受试者获得样品时起的三小时或更短时间内、或两小时或更短时间内提供结果。在一些实施方式中，这些测定、装置、试剂盒、方法和系统包括用于检测edta抗凝全血中的扎伊尔型埃博拉病毒(ebolazairevirus，2014年在西非爆发中检测到的病毒)的核酸测定。这些测定、装置、试剂盒、方法和系统可在服务点位置使用和执行，所述服务点位置包括乡村地区或者远离医院、诊所或实验室以及在临床实验室或医院内的位置。申请人提供了可完全在活动性感染区域(“热区”)诸如存在患有埃博拉感染的受试者的区域内执行的测定、装置、试剂盒、方法和系统。可以在热区内获得从怀疑患有埃博拉感染的受试者得到的样品并使用自动样品分析装置和系统(例如，样品处理单元(sampleprocessingunit，“spu”))进行分析，使得无需使样品离开热区，从而减少可能的进一步疾病传播。有利的自动样品处理装置或系统(例如，spu)在将样品装载于该装置或系统之上或之中后的分析过程中将样品完全包含在该装置或系统内；将样品包含在该系统内减少或防止了污染的扩散，并且可减少或防止原本可能由于样品分析伴随的动作或事件而发生的疾病传播。自动样品处理装置或系统(例如，spu)可封闭在容器中，或者包裹在鞘套中，以便减少或防止该装置或系统的污染。这样的容器或鞘套可防止在该装置或系统从一个位置移到另一位置的情况下，传染性物质或传染原从一个位置传播到另一位置。申请人提供了利用核酸测定连同针对埃博拉病毒抗体的测定的测定、装置、试剂盒、方法和系统。在实施方式中，申请人提供了这样的测定、装置、试剂盒、方法和系统：其利用i)核酸测定，ii)针对埃博拉病毒抗体的测定，以及ii)电解质测定。在实施方式中，核酸测定可包括等温核酸测定。在实施方式中，等温核酸测定包括以下文献中描述的等温核酸测定：2014年3月15日提交的美国专利申请14/214,850；2014年3月15日提交的国际专利申请pct/us2014/030034；以及2014年9月17日提交的国际专利申请pct/us2014/056151，这些方法统称为“tnaa”方法。在实施方式中，针对埃博拉病毒抗体的测定包括针对埃博拉病毒抗体的igm和igg测定。在实施方式中，电解质测定包括钠测定，或者钾测定，或者钠和钾测定。因此，在实施方式中，申请人提供了这样的测定、装置、试剂盒、方法和系统：其利用i)核酸测定，ii)针对埃博拉病毒抗体的igm和igg测定，以及iii)钠和钾测定。在实施方式中，申请人提供了这样的测定、装置、试剂盒、方法和系统：其利用i)tnaa核酸测定，ii)针对埃博拉病毒抗体的igm和igg测定，以及iii)钠和钾测定。通常对从怀疑患有埃博拉的受试者获得的血液样品(例如，手指针刺血液样品)进行此类测定；然而，在实施方式中，可对从受试者获得的尿液或其他体液样品进行此类测定。这些测定、装置、试剂盒、方法和系统适合于评价具有埃博拉感染的体征和症状的患者，并且适合于电解质平衡管理；对电解质的评价允许医护者快速评估患者的脱水，并且被认为有助于通过加快评估口服或静脉内补液是否合适来保护医护者免于不必要的埃博拉暴露风险(例如，在可能的情况下避免静脉内补液被认为会降低医护者的埃博拉暴露风险)。本文公开的测定、装置、试剂盒、方法和系统可与通过毛细管装置采集的血液样品一起使用，例如，与使用一次性完全伸缩式刺血针获得的样品一起使用。因此，不同于需要接受过进行静脉切开术的培训的人员的现有方法，所述测定、装置、试剂盒、方法和系统不需要针且不需要经过培训的人员。此外，所述系统、装置和试剂盒可在任何地区部署和使用，包括在埃博拉存在或传播的乡村地区部署和使用，以在需求最大的“热区”有效提供当地和实时评估、治疗和检疫。在实施方式中，本文公开的测定、装置、试剂盒、方法和系统通过与自学习流行病学模型和软件系统的实时连接性而促进病例的实时报告和建模；例如，测定可以在支持通过电子链路(例如，卫星链路、蜂窝网络、陆线或其他通信链路)进行远程连接的配置下运行。在实施方式中，所述测定、装置、试剂盒、方法和系统可与用于分诊患者的其他测定联合使用，以便从患有其他疾病的患者中鉴定出患有埃博拉的患者。用于这样的分诊的此类其他测定包括用于检测或测量未知来源的引起其他发热的其他病原体的测定，埃博拉病毒的多种毒株的分子试验，血红蛋白测定，以及针对贫血的铁检验。在实施方式中，针对未知来源的发热的测定可包括但不限于针对拉沙热、疟疾、霍乱、伤寒、马尔堡病、i型、ii型、iii型和iv型登革热、基孔肯雅病(chikungunya)、西尼罗病毒和脑膜炎的测定。患者的分诊被认为能够实现埃博拉患者与其他患者的快速分离，以及降低埃博拉感染此类其他患者的风险。贫血测定可用于帮助患者的分诊(例如，用于确定受试者是否患有钩虫或其他状况，并从而由于该原因而存在死于贫血的风险(例如，在能够得到针对埃博拉感染本身的治疗之前))。因此，在实施方式中，申请人公开了用于检测扎伊尔型埃博拉病毒(在2014年的西非爆发中检测到的病毒)的测定，其包括用于检测全血或血浆试样中(例如，edta抗凝试样中)的扎伊尔型埃博拉病毒的tnaa测定。在实施方式中，此类测定包括用于检测肝素抗凝血浆试样或edta抗凝全血试样中的抗埃博拉抗体的测定。在实施方式中，此类测定包括用于检测和测量肝素抗凝血浆试样中的电解质水平诸如钠和钾水平的测定。因此，申请人公开了以下各项的同时或同期执行：i)扎伊尔型埃博拉病毒的tnaa测定，ii)用于定性检测埃博拉病毒的igm和igg抗体的igm和igg测定，以及iii)来自全血或血浆试样(例如，edta抗凝或肝素抗凝全血或血浆，其可从全血试样中提取)的钠和钾水平的定量测量。可选地，一些实施方式可包括用于检测病毒的抗原elisa测定。在一个实施方式中，tnaa测定可以用于在受试者开始发热后3至10天的窗口内检测病毒。在实施方式中，此类测定中的一个或多个在自动样品分析装置或系统(本文称为“spu”)内执行。在实施方式中，在spu中从全血提取肝素抗凝血浆。在实施方式中，本文提供的样品可含有抗凝剂，诸如肝素或edta。申请人公开了装置，包括用于执行本文公开的测定的自动样品分析装置(例如，spu)。申请人公开了系统，该系统包括筒匣并且包括用于执行本文公开的测定的自动样品分析装置(例如，spu)，该筒匣被配置成与该自动样品分析装置一起使用。如本文公开的系统可包括通信装置，或通信链路，或被配置用于向自动样品分析装置提供信息(例如，方案)或被配置用于传输来自自动样品分析装置的数据或其他信息或全部两者的其他电子连接。筒匣可包括用于在处理或测试样品中使用的试剂，用于在处理或测试样品中使用的一次性用品，或其他材料。例如，筒匣可包括用于在针对病毒核酸(例如，埃博拉rna)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包括用于在针对病毒氨基酸(例如，埃博拉核蛋白或指示埃博拉感染的其他蛋白质和蛋白质材料)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包括用于在针对病毒抗体(例如，埃博拉病毒抗原的抗体)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包括用于在针对电解质的存在(例如，用于检测受试者血液中的钠或钾水平异常)而处理或测试样品中使用的试剂；以及其组合。筒匣可包括用于在处理或测试样品中使用的器皿，例如，试剂器皿、混合器皿、废物器皿或其他器皿。筒匣可包括用于在处理或测试样品中使用的一次性用品。筒匣可包括试管，并且可包括用于在处理或测试样品中使用的其他组件、元件和材料。筒匣可包括至少一个样品。可选地，筒匣包括用于插入可含有一个或多个样品的一个或多个容器的至少一个或多个槽。申请人公开了试剂盒，该试剂盒包含用于执行本文公开的测定的试剂。在实施方式中，试剂盒可包含被配置成与自动样品分析装置一起用于执行本文公开的测定的筒匣。在实施方式中，试剂盒可包含用于执行本文公开的测定的样品采集装置。在实施方式中，含有试剂的试剂盒可包含筒匣，并且在实施方式中，该试剂可携载于该筒匣上。在实施方式中，携载于筒匣上的试剂可包括用于测定的试剂，该测定用于检测核酸(例如，埃博拉病毒核酸)；用于检测蛋白质或蛋白质材料(例如，用于检测埃博拉病毒抗体、用于检测埃博拉病毒抗原或者全部两者的试剂)；用于检测电解质(例如，用于检测钠、钾或其他电解质)；以及其组合。在实施方式中，该试剂盒可包含被配置成与筒匣或与自动样品分析装置或与全部两者一起使用以执行本文公开的测定的样品容器。此类测定可应用于任何受试者或任何血液样品；例如，此类测定可与流行病学风险因素联合而有用地应用于从受影响地区中具有埃博拉病毒感染体征和症状的，或者存在暴露风险或可能已经暴露于扎伊尔型埃博拉病毒(在2014年西非爆发中检测到)的个体获得的样品。在实施方式中，本文公开的测定、装置、试剂盒、方法和系统可以在受试者可能存在感染埃博拉风险的地区中使用，例如，在可能存在患者的地区中使用，以便诊断和治疗埃博拉感染。本文公开的测定、装置、系统、方法和试剂盒提供了许多优势和益处。与当前的扎伊尔型埃博拉tnaa测定以及本文公开的埃博拉抗体和电解质测定相关的主要益处是甚至在乡村和边远地区以及甚至在诊所、医院或实验室环境之外对人类试样执行针对埃博拉病毒的连续测试的能力。如本文公开的针对埃博拉病毒的人类试样测试提供了诊断、临床和公共卫生益处，以及提供了用于进一步研究的更好的工具。真阳性结果为埃博拉病毒感染的诊断提供了确定性的支持。真阳性结果还支持将患者隔离在负压室(如果可以获得)，以及采用实用的病毒性出血热隔离预防措施的决定。此外，确立埃博拉病毒为患者症状的真正原因防止了对其他可能原因的进一步检查，并且允许节省其他医疗保健资源。真阴性结果通过排除诊断和允许追查其他可能的疾病而同时有益于医生和患者。测定还有益于公共卫生。如果将感染埃博拉病毒的人与其他人立即隔离并采取适当的预防措施，则这样可以防止其他人患病。通过进行该测试，减少了该病毒传播给其他人的机会。此外，使用该测试可帮助医疗保健提供者更多地了解埃博拉病毒并阻止其传播。提供本
发明内容，从而以简化形式介绍下文具体实施方式中进一步描述的一系列概念。本
发明内容并不旨在确定要求保护的主题的关键特征或基本特征，也不旨在用于限定要求保护的主题的范围。附图说明图1提供了如本文所述的用于检测埃博拉病毒和埃博拉相关标志物的系统的示意图。图1描绘了本文公开的装置和系统的分析前(样品处理，由本文所述的样品装置和系统(称为“spu”，且受本文称为“las”的实验室自动化系统控制)执行)、分析(报告生成，由las执行)和分析后(报告传输，由las执行)部分，以及本文公开的方法的分析前、分析和分析后步骤。图2a提供了tnaa核酸纯化步骤的示意描述。在实施方式中，这样的步骤在自动样品分析装置或系统(例如，spu)中执行，并且可以在现场执行(例如，在乡村或其他地点执行)，而不必在实验室、诊所或医院环境中执行。图2b示出了如本文所述的spu的一个实施方式和筒匣的一个实施方式的简化描绘。图3图示了进行的实验，其示出了当应用于扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白rna时的tnaa核酸测定的检测限(lod)。如图所示，编码扎伊尔型埃博拉核蛋白的合成rna靶标的滴定显示出lod低至10个拷贝/ul。y轴示出基于在tnaa扩增反应(即，在tnaa核酸测定中进行的扩增反应)期间实时记录的荧光信号的检测时间。评估阳性反应的截断值为45.6分钟。图4图示了进行的实验，其示出了当应用于扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和潜在交叉反应物时的tnaa核酸测定的交叉反应性的量。此处示出了th-ezn反应与其他病原体的交叉反应性。没有发现假阳性反应。阳性对照标记为“扎伊尔型埃博拉100/cp/ul”。非模板对照标记为“ntc”。y轴示出基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间。评估阳性反应的截断值为45.6分钟。图5：该图图示了tnaa核酸测定的特异性。th-ezn反应的特异性通过向样品中加入列出的病原体以及阳性对照合成模板来测试。没有发现假阴性反应。扎伊尔型埃博拉病毒rna用作阳性对照。非模板对照标记为“ntc”。y轴示出基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间。评估阳性反应的截断值为45.6分钟。图6：以两种方式测试th-ezn反应中干扰物质的影响。首先，向样品中加入干扰物质以及阳性对照合成模板，以观察该物质是否干扰反应(“抑制真阳性”)。第二，向没有任何模板的样品(ntc)中加入干扰物质，以评估是否发生非特异性反应(“造成假阳性”)。在两个水平下测试每一种物质。图7a示出了对掺加的血浆样品测试的使用抗埃博拉igg抗体的测定的结果。图7a中所示的数据显示了埃博拉igg测定的性能。图7a提供了将内部(阴性)edta抗凝血浆样品与掺加的样品进行比较的结果。所有样品均掺加了人抗zebovigg至1μg/ml的标称浓度。图7b比较了来自阴性和掺加的样品的测定结果；该图示出了来自采用内部(阴性)edta抗凝血浆样品(正方形)和掺加的样品运行的测定的信号。所有样品均掺加了人抗zebovigg。图7c提供了总结来自埃博拉igg测定的交叉反应性数据的表格。图8a显示了对掺加的血浆样品测试的使用抗埃博拉抗体的测定的结果。图8a提供了将内部(阴性)edta抗凝血浆样品与掺加的弱阳性样品比较的结果。所有样品均掺加了人抗zebovigm至0.3μg/ml的标称浓度。图8b比较了来自阴性和掺加的样品的测定结果；该图示出了来自采用内部(阴性)edta抗凝血浆样品(正方形)和掺加的样品运行的测定的信号。所有样品均掺加了人抗zebovigm。图9a示出了来自采用重组zebovgp抗原掺加的合并的正常血清校准物的测定的剂量响应结果。图9b提供了总结来自zebovgp抗原elisa测定的交叉反应性数据的表格。具体实施方式可以使用本文公开的测定、装置、系统、试剂盒和方法或与其一起使用的试剂、测定、方法、试剂盒、装置和系统的实例的描述和公开内容例如可参见：美国专利8,088,593；美国专利8,380,541；美国专利8,435,738；美国专利8,475,739；美国专利8,840,838；2013年2月18日提交的美国专利申请13/769,820；2014年2月18日提交的美国专利申请14/183,503；2014年3月15日提交的美国专利申请14/214,850；2014年3月15日提交的国际专利申请pct/us2014/030034；2014年9月17日提交的国际专利申请pct/us2014/056151；2013年2月18日提交的美国专利申请13/769,798；2013年2月18日提交的美国专利申请13/769,779；2011年9月26日提交的美国专利申请13/244,947；2012年9月25日提交的pct/us2012/57155；2011年9月26日提交的美国专利申请13/244,946；2011年9月26日提交的美国专利申请13/244,949；以及2013年7月18日提交的美国申请序列号13/945,202，上述专利和专利申请的公开内容均特此通过引用而全文并入于此。应当理解，前文的概括描述和以下的详细描述都仅仅是示例性的和解释性的，并且不对所要求保护的本发明构成限制。可以注意到，如本说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个”、“一种”和“该”等包括复数指代对象，除非上下文另有明确规定。因此，举例而言，提到“一种材料”可以包括多种材料的混合物，提到“一种化合物”可以包括多种化合物，等等。本文引用的参考文献通过特此引用而全文并入于此，除非它们达到与本说明书中明确阐述的教导相冲突的程度。本文使用的缩略语通常具有其惯用含义。如本文所使用的一些缩略语包括：核糖核酸(rna)；脱氧核糖核酸(dna)；检测限(lod)；样品处理单元(spu)；实验室自动化系统(las)；临床实验室改进修正案(clia)；聚合酶链反应(pcr)；逆转录酶pcr(rt-pcr)；定量rt-pcr(q-rt-pcr)；个人防护装备(ppe)；实时诊断(rdt)；碱性磷酸酶(alp)；乙二胺四乙酸(edta)；埃博拉病毒，扎伊尔株(zebov)；四苯基硼酸盐(tpb)；四苯基硼酸钠(natpb)；核酸测定(naa)；等温核酸测定(tnaa，或tnaa测定，或tnaa核酸测定)；埃博拉病毒糖蛋白(gp)；扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白(th-ezn)；扎伊尔型埃博拉病毒糖蛋白(th-ezg)；rna掺加对照(th-rna-sic)测定；以及人着丝粒重复(th-hcr)测定。在本说明书中以及在随后的权利要求书中，可能会提到若干术语，这些术语应被定义为具有以下含义：“可选的”或“可选地”意指随后描述的事件可能发生或者可能不发生，从而该描述包括发生该事件的情况和不发生该事件的情况。例如，如果装置可选地包含针对样品采集单元的特征，这意味着该样品采集单元可能存在或者可能不存在，并且因此，该描述同时包括其中装置具备该样品采集单元的结构和其中不存在该样品采集单元的结构。本文所使用的术语“基本上的”意指多于最小的或不显著的量；并且“基本上地”意指多于最小地或不显著地。因此，举例而言，本文所使用的短语“基本上不同的”表示两个数值之间足够高的差异程度，以至于本领域技术人员将会认为这两个值之间的差异在由所述值所测量的特性的背景内具有统计显著性。因此，作为基准值或比较值的函数，两个基本上不同于彼此的值之间的差异通常大于约10％，并且可大于约20％，优选大于约30％，优选大于约40％，优选大于约50％。术语“核酸”是指例如构成脱氧核糖核酸(dna)大分子和核糖核酸(rna)大分子的核苷酸和核苷。核酸可以通过附接至糖(例如，脱氧核糖或核糖)的碱基来鉴别；如本文所使用，以下这些碱基的缩写用于在序列表中表示核酸，以鉴别和描述核酸的结构(可以使用大写或小写)。表1a碱基(核酸中)字母代码腺嘌呤a胸腺嘧啶t鸟嘌呤g胞嘧啶c尿嘧啶u术语“肽”、“多肽”、“蛋白质材料”和“蛋白质”可互换使用以指代由肽键连接的氨基酸组成的分子。单个氨基酸可被称为多肽或蛋白质的“残基”。本文公开的多肽的氨基酸序列可通过以一串字母显示的seqidno:进行鉴定，其中所述字母具有以下含义：表1b本文所使用的“样品”可以是但不限于血液样品或血液样品的一部分，可以是任何合适的尺寸或体积，并且优选地是小尺寸或体积。样品例如可以是血液样品(例如，从手指针刺或从静脉穿刺获得的样品，或者动脉血液样品)、尿样品、活检样品、组织切片、粪便样品或其他临床样品；水样品、土壤样品、食物样品、空气样品；或其他样品。血液样品可例如包括全血、血浆或血清。在本文公开的测定和方法的一些实施方式中，可以使用小体积血液样品或者不超过血液样品的小体积部分来进行测量，其中小体积包括不超过约5ml；或者包括不超过约3ml；或者包括不超过约2ml；或者包括不超过约1ml；或者包括不超过约500μl；或者包括不超过约250μl；或者包括不超过约100μl；或者包括不超过约75μl；或者包括不超过约50μl；或者包括不超过约35μl；或者包括不超过约25μl；或者包括不超过约20μl；或者包括不超过约15μl；或者包括不超过约10μl；或者包括不超过约8μl；或者包括不超过约6μl；或者包括不超过约5μl；或者包括不超过约4μl；或者包括不超过约3μl；或者包括不超过约2μl；或者包括不超过约1μl；或者包括不超过约0.8μl；或者包括不超过约0.5μl；或者包括不超过约0.3μl；或者包括不超过约0.2μl；或者包括不超过约0.1μl；或者包括不超过约0.05μl；或者包括不超过约0.01μl。如本文所使用的，“手指针刺”或“手指针刺样品”是通过在通常但不一定在手指(例如，可以在任何皮肤表面上做这样的穿刺，包括脚趾、足跟、手臂、腿或其他身体部位)上的皮肤中的小穿刺而获得的血液样品。可以例如通过刺血针、针、尖锐探针或任何其他合适的器械或器具做手指针刺的穿刺。本文所使用的术语“服务点位置”可以包括受试者可在其中接受服务(例如，检测、监测、治疗、诊断、指导、样品采集、id验证、医疗服务、非医疗服务等)的位置，并且可以包括但不限于受试者的住所、受试者的工作场所、医疗保健提供者(例如，医生)的位置、医院、急诊室、手术室、诊所、医疗保健专业人员的办公室、实验室、零售商[例如药房(例如，零售药房、临床药房、医院药房)、药店、超市、杂货店等]、交通工具(例如，轿车、舟船、卡车、公共汽车、飞机、摩托车、救护车、移动单元、消防车/救火车、应急车辆、执法车辆、警车或者被配置用于将受试者从一个点运送到另一点的其他载具等)、巡回医疗保健单元、移动单元、学校、日托中心、安检地点、作战地点、医疗辅助生活住所、政府机关、办公建筑、帐篷、体液样品采集地点(例如，血液采集中心)、受试者可能希望进入的地点的入口处或其附近的场所、受试者可能希望访问的装置处或其附近的场所(例如，计算机的位置——如果受试者希望访问计算机)、样品处理装置接收样品的位置，或者本文其他各处所描述的任何其他服务点位置。核酸扩增方法tnaa核酸扩增方法包括等温方法，其提供从临床样品中快速定性检测和鉴定病原体。在实施方式中，在等温扩增之前可能包括预扩增步骤；这样的预扩增步骤可以增加总体tnaa方法的总体灵敏度。例如，为了进一步增强tnaa测定的灵敏度，可以经由spu上的rt-pcr来执行预扩增步骤。pcr引物被设计为扩增用于特异性检测的后续等温扩增反应的靶基因。rt-pcr反应通过热循环进行，并且该反应的最终产物用于后续的等温扩增和后续进行的特异性检测。因此，在利用热循环核酸预扩增和等温核酸扩增的实施方式中，步骤可例如包括提取的rna样品通过rt-pcr的预扩增，导致原始的提取样品中的拷贝数大大增加。所得到的预扩增产物形成用于tnaa反应的起始样品。通过tnaa(即，没有进一步热循环)对预扩增产物的后续处理提供了靶分子的进一步的扩增以及检测。在提交于2013年3月15日的美国专利申请61/800,606中论述了用于核酸扩增而不需要热循环的方法，其全部内容通过引用而并入于此。这样的方法可以用于在短时间内检测小体积样品中疾病诸如呼吸疾病的核酸标志物。下文中论述了这样的方法，并且将在短时间内用这样的方法从小样品中获得的结果的实例呈现在本文公开的图和实施例中。在下文中，这样的方法被称为“非循环扩增方法”。可以将核酸扩增的非循环扩增方法应用于双链dna。然而，靶核酸分子不必局限于双链dna靶标；例如，在本文描述的非循环扩增方法中使用的双链dna可以从病毒rna或mrna或者其他单链rna靶标来源通过逆转录酶而制备。在进一步的实例中，在本文描述的非循环扩增方法中使用的双链dna可以通过dna聚合酶从单链dna靶标制备。这样的方法可以在应用下文所论述的非循环扩增方法之前作为初始步骤应用。双链dna靶标的扩增，例如，开始于待扩增的一级双链dna(下文中术语为“一级核酸”)。一级核酸包含被称为模板区域的靶区；该模板区域具有模板序列。这样的双链模板区域包含第一dna链和互补的第二dna链，并且包括彼此互补的在一个链中的5’末端核苷酸和在另一个链中的3’末端核苷酸。提供了第一引物和第二引物，其各自具有模板结合区和尾区；引物模板结合区与靶模板区域互补。引物的尾区可包含3个部分：a)引物的5’末端核苷酸，b)最内核苷酸，其中该最内核苷酸在5’末端核苷酸的下游，以及c)5’末端核苷酸与最内核苷酸之间的中间部分，该中间部分包含一个或多个核苷酸。此外，当适当地对齐时，两个引物尾区的至少一些部分可以彼此互补。应当注意，虽然第二引物的尾区可含有与第一引物的尾区的核苷酸序列互补的核苷酸序列，但通过第一引物与第二引物退火而形成的产物对于本文提供的方法或组合物来说是不期望的或无用的。因此，在一些实施方式中，可以采取步骤来最小化第一引物-第二引物退火产物的形成。这样的步骤可包括，例如，在开始本文提供的方法之前，不在引物可退火持续延长的时间段的条件下对第一引物和第二引物进行预温育。可在使得第一引物的第一拷贝的模板结合区与核酸模板的第一链退火的条件下，用聚合酶和第一引物的第一拷贝处理一级核酸。在这些条件下，形成第一引物的第一拷贝的延伸产物。可具有链置换活性的聚合酶可催化第一引物的第一拷贝的延伸产物的形成。第一引物的第一拷贝可与合成的延伸产物共价连接，使得第一引物的第一拷贝(与核酸模板的第一链互补)变为本文描述为“第一引物的第一拷贝的延伸产物”的分子的一部分。第一引物的第一拷贝的模板结合区而非尾区与核酸模板的第一链退火。适合基于聚合酶的核酸合成的条件的实例是本领域已知的并提供于例如，molecularcloning:alaboratorymanual,m.r.greenandj.sambrook,coldspringharborlaboratorypress(2012)中，该文献通过引用全文并入本文。可在使得第二引物的模板结合区与第一引物的第一拷贝的延伸产物退火的条件下，用第二引物和聚合酶(其可具有链置换活性)处理第一引物的第一拷贝的延伸产物。以这种方式，可以形成第二引物的延伸产物。在合成第二引物的延伸产物的过程中，聚合酶可从第一引物的第一拷贝的延伸产物置换核酸模板的第一链。第二引物可与合成的延伸产物共价连接，使得第二引物变为本文描述为“第二引物的延伸产物”的分子的一部分。第二引物的延伸产物与第一引物的第一拷贝的延伸产物互补。当第二引物与第一引物的第一拷贝的延伸产物退火时，第二引物的模板结合区而非尾区可以与第一引物的第一拷贝的延伸产物退火。可以用聚合酶(其可具有链置换活性)和第一引物的第二拷贝处理第二引物的延伸产物，以便形成第一引物的第二拷贝的延伸产物。在生成第一引物的第二拷贝的延伸产物的过程中，第一引物的第二拷贝可与合成的延伸产物共价连接，使得第一引物的第二拷贝变为本文描述为“第一引物的第二拷贝的延伸产物”的分子的一部分。第一引物的第二拷贝的延伸产物与第二引物的延伸产物互补。第一引物的第二拷贝的延伸产物的生成可导致生成包含第一引物的第二拷贝的延伸产物和第二引物的延伸产物的分子，该分子在本文中可被称为“二级核酸”。二级核酸可包含第二引物的延伸产物的3’末端区(及其互补序列)并且可包含第一引物的第二拷贝的延伸产物的3’末端区(及其互补序列)。二级核酸分子包含与尾序列相邻的模板区域的序列。在实施方式中，产生双链核酸，其中互补模板和尾区序列排成一行。在实践中，通过任何凭此可以生成具有二级核酸的通用结构的核酸的过程，包括通过本文论述的非循环扩增方法的实践，产生二级核酸的多个拷贝(例如，两个或更多个)。因此，可以提供二级核酸的成对的拷贝。例如，通过重复前述的步骤和方法，然后可以生成进一步的数目的拷贝。例如，如上文描述的用于从一级核酸生成二级核酸的全过程可以重复两次，以便生成两对二级核酸拷贝；可以执行进一步的重复以进一步地扩增拷贝数，例如，指数扩增拷贝数(例如，二次幂)。此外，因为二级核酸分子包含与尾序列相邻的模板区域的序列，可产生部分双链的核酸，其中尾区序列杂交并排成一行。因为这些尾区序列附接至单链模板区，所以产生具有通过杂交的尾区序列结合在一起的两个核酸链的交叉结构。可以通过聚合酶延伸这些交叉结构以形成两个组分链的延伸产物。这些延伸产物可以称为“多联体链”。两个多联体链可以退火在一起，并且可以共同地称为多联体；这样的多联体可以包含核酸模板的两个或更多个拷贝。在一些实施方式中，可以形成甚至更长的多联体。例如，多联体可以退火在一起；或者两个多联体分子可以形成交叉结构，该交叉结构类似于那些由被称为多联体链的较短分子所形成的，如上文论述的，随后是包含核酸模板的四个拷贝的更大的多联体分子。在另一实例中，二级核酸和多联体可以形成交叉结构，随后是包含核酸模板的三个拷贝的更大的多联体分子。在一些实施方式中，可同时生成多个不同长度的多个不同的多联体。因此，根据这样的方法生成的多联体可以具有任何长度的核苷酸。在一些实施方式中，本文生成的多联体分子可以是至少30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10,000、15,000、20,000或25,000个核苷酸的长度。根据这样的方法生成的多联体可以包含核酸模板的任何数目的拷贝。在一些实施方式中，本文生成的多联体分子可含有核酸模板的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100个拷贝。在提交于2013年3月15日的美国专利申请61/800,606中提供了进一步的实例和这些以及其他实例的更多的细节。反应的检测可以用多个不同的方式监控本文提供的方法的进程。在一个实施方式中，可以测定反应的核酸扩增产物(例如，产物的水平或其生成速率)。在另一实施方式中，可以测定反应的聚合酶沿着核酸模板的活性(例如，聚合酶沿着模板链的移动)。因此，在一些实施方式中，由于来自方法的产物的积累(其可以是在该方法的步骤的过程中或完成之后)，或者由于在方法的步骤过程中发生的可检测的事件，可以观察到本文提供的方法的事件。可测定扩增的核酸的存在，例如，通过检测反应产物(扩增的核酸或反应副产物)或通过检测与反应进程相关联的探针。在一些实施方式中，反应产物可通过将产物用染料染色来鉴定。在一些实施方式中，染料可在与核酸结合时比在不与核酸结合时具有更大的荧光。在一些实施方式中，染料可嵌入双链核酸或者它可以与核酸的外部区结合。可与本文提供的方法和组合物一起使用的核酸染料包括例如花青染料、染料、gold、greeni、greenii、溴化乙锭、二氢乙锭、blueviewtm、染料、染料、染料、yoyo染料、染料、染料、染料、染料、染料、碘化丙锭、碘化己锭(hexidiumiodide)、亚甲基蓝、dapi、吖啶橙、奎纳克林、吖啶二聚体、9-氨基-6-氯-2-甲氧基吖啶、双苯甲亚胺染料、hoechst染料、7-氨基放线菌素d、放线菌素d、羟基司替巴脒(hydroxystilbamidine)、派洛宁y、diamondtm染料、gelredtm、gelgreentm和lds751。在一些实施方式中，可通过分析扩增反应的浊度来鉴定反应产物，例如，在增加的浊度与反应产物和反应副产物(例如，与镁络合的焦磷酸盐)的形成相关的情况下。在一些实施方式中，可通过经由凝胶电泳分离根据本文方法进行的反应并随后用核酸染料对凝胶进行染色来鉴定反应产物。该染料可以是本文公开的或本领域以其他方式已知的任何核酸染料。在一些实施方式中，本领域已知的用于检测核酸的任何方法或组合物或与生成核酸相关的过程可与本文提供的方法和组合物一起使用。在一些实施方式中，含有与核酸模板链(或具有相似或相同的序列的链)的一部分互补的核苷酸序列且含有荧光报告分子(荧光团)和猝灭剂中的一种或两种的核酸探针包含在本文提供的反应中。在实例中，核酸探针可含有在其5’或3’末端的荧光报告分子，以及在另一末端的猝灭剂。在另一实例中，核酸探针可在其5’或3’末端含有荧光报告分子，并且它可与含有猝灭剂的核酸引物退火。含有猝灭剂的核酸引物可在引物的某位置上含有猝灭剂，使得当核酸探针与引物退火时，荧光报告分子被猝灭。在含有荧光报告分子和猝灭剂对的探针中，可选择该荧光报告分子和猝灭剂，使得猝灭剂可有效地将报告分子猝灭。在一些实施方式中，当荧光报告分子的发射最大值与猝灭剂的吸收最大值相似时，荧光报告分子与猝灭剂配对。可用作荧光报告分子的荧光团包括例如calfluorgold、calfluororange、quasar570、calfluorred590、calfluorred610、calfluorred610、calfluorred635、quasar670(biosearchtechnologies)、vic、ned(lifetechnologies)、cy3、cy5、cy5.5(gehealthcarelifesciences)、oyster556、oyster645(integrateddnatechnologies)、lc红610、lc红610、lc红640、lc红670、lc红705(rocheappliesscience)、德克萨斯红、fam、tet、hex、joe、tmr以及rox。可以使用的猝灭剂包括例如ddq-i、ddq-ii(eurogentec)、eclipse(epochbiosciences)、iowablackfq、iowablackrq(integrateddnatechnologies)、bhq-1、bhq-2、bhq-3(biosearchtechnologies)、qsy-7、qsy-21(molecularprobes)以及dabcyl。在一些实施方式中，可在含有光源和光学传感器的设备中监测本文提供的方法。在一些情况下，可将反应定位于来自光源的光路上，并且可测量由样品吸收(例如，在混浊的反应的情况下)、由样品散射(例如，在混浊的反应的情况下)或由样品发射(例如，在含有荧光分子的反应的情况下)的光。在一些实施方式中，本文提供的方法可在如在2013年2月18日提交的美国专利申请序列号13/769,779中公开的装置或其中的模块中进行或监测，该专利申请通过引用全文并入本文。系统和装置在实施方式中，本文提供的系统和装置可以部署在飞机或机场中，以便针对本文所述的一种或多种病原体、症状或状况对旅行者进行测试。在实施方式中，本文提供的系统和装置可以部署在乡村地区，或者部署在相对远离传统实验室的地点(例如，距离传统实验室至少10、20、50、100、200或500英里)。在实施方式中，本文提供的系统和装置可具有音频输入和输出以及视觉输入和输出中之一或全部两者。具有音频功能和视觉功能中之一或全部两者的本文提供的系统和装置可以例如允许受试者通过本文提供的系统或装置来参加与位于远离该受试者的地点的医疗保健专业人员的远程医疗会话。在实施方式中，可以通过本文提供的系统或装置向受试者远程提供医疗保健专业人员，其中所述医疗保健专业人员与该寻求医疗保健咨询的受试者具有相同的性别。例如，女性受试者可能想要看女性医生，但是在该女性受试者的地点附近可能没有女性医生。通过具有音频输入和输出以及视觉输入和输出中之一或全部两者的本文提供的系统或装置，该女性受试者可以咨询位于远离该女性受试者的地点的女性医生。本文公开的测定和方法可在用于处理样品的装置上或系统上进行。本文公开的测定和方法可容易地并入并使用在自动化测定装置和自动化测定系统中。例如，如本文公开的系统可包含用于传输或接收基于待检测分析物(例如，埃博拉病毒诸如扎伊尔型埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)或基于其他待通过所述装置或系统检测的分析物的方案的通信组件。在实施方式中，测定方案可根据由装置实施的多个测定的最优时序安排而改变，或者可根据先前从来自受试者的样品获得的结果或可根据先前从来自受试者的不同样品获得的结果而改变。在实施方式中，通信组件可包含用于将信息从所述装置通信至计算机的信道，其中所述信道选自计算机网络、电话网络、金属通信链路、光学通信链路和无线通信链路。在实施方式中，本文公开的系统可将信号传输至中央位置或传输至最终用户，并且可包含用于传输此类信号的通信组件。如本文公开的系统可被配置用于按照需要或定期更新方案。因此，申请人公开了被配置用于根据本文公开的方法测量血液样品中的分析物如埃博拉病毒的装置。被配置用于根据本文公开的方法测量血液样品中的分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的装置可被配置用于检测或测量来自血液样品的分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的量，所述血液样品包含不多于约1000μl的血液，或者不多于约500μl的血液、不多于约250μl的血液，或者不多于约150μl的血液，或者不多于约100μl的血液，或者不多于约50μl的血液，或者在实施方式中，其中所述血液样品包含不多于约25μl的血液，或者其中所述血液样品包含不多于约10μl的血液，或者其中所述血液样品包含少于约10μl的血液。这样的装置可被配置用于在少于约三小时、少于约两小时或少于约一小时内，或者在实施方式中，在少于约40分钟或在少于约30分钟内检测或测量血液样品中的分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)。本文公开的装置可被配置为执行用于检测或测量分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的测定，以及还被配置为执行用于测量血液样品中的另一分析物的测定。本文公开的装置可被配置为执行用于检测或测量分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的测定，以及还被配置为执行包括测量血液样品中的血细胞的形态特征的测定。本文公开的装置可被配置为执行用于检测或测量分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的测定，以及还被配置为执行包括测量另一血液分析物(例如，维生素、激素、药物或药物的代谢物，或者其他分析物)的测定。这样的装置可被配置为其中由所述装置执行的测定或测定的执行顺序可以通过与另一装置通信而改变。申请人还公开了包括如本文所公开的装置的系统。在实施方式中，该系统包括这样的装置：该装置被配置为执行用于检测或测量分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的测定，以及还被配置为执行用于测量血液样品中的另一分析物的测定。在实施方式中，该系统包括这样的装置：该装置被配置为执行用于检测或测量分析物(例如，埃博拉病毒、抗埃博拉抗体或电解质)的测定，以及还被配置为执行用于测量血液样品中的血细胞的形态特征的测定。在这样的系统的实施方式中，由所述装置执行的测定或测定的执行顺序可以通过与另一装置通信而改变。本文公开的方法和组合物提供了仅需要少量样品，诸如仅少量血液的快速测定。本文公开的装置和系统被配置用于执行仅需要少量样品，诸如仅少量血液的此类快速测定。因此，所述方法、组合物、装置和系统提供了仅需要小生物样品的快速测试，并因此提供了优于其他方法、组合物、测定、装置和系统的优势。本文公开的测定和方法可在用于处理样品的装置或系统上执行。本文公开的测定和方法可容易地并入和使用在用于处理样品的装置或用于处理样品的系统中，该装置或系统可以是自动化测定装置或者可以是自动化测定系统。这样的装置以及这样的系统可用于实践本文公开的方法。例如，装置可用于接收样品。装置可用于制备或用于处理样品。装置可用于对样品进行测定。装置可用于从样品获得数据。装置可用于传送从样品中获得的数据。装置可用于处理或测定样品之后处置样品。装置可以是系统的一部分，该系统的组件可以是自动测定装置。装置可以是自动测定装置。自动测定装置可被配置用于促进样品的采集、制备用于临床检验的样品，或实现与一种或多种试剂的化学反应或其他化学或物理过程，如本文所公开的。自动测定装置可被配置用于从样品获得数据。自动测定装置可被配置用于传送从样品中获得的数据。自动测定装置可被配置用于分析来自样品的数据。自动测定装置可被配置用于与另一装置或实验室或附属于实验室的个体通信，以分析从样品中获得的数据。自动测定装置可被配置成放置在受试者体内或受试者身上。自动测定装置可被配置用于直接或间接地接纳来自受试者的样品。样品可以是，例如，血液样品(例如，由手指针刺或由静脉穿刺获得的样品，或动脉血样品)、尿液样品、活检样品、组织切片、粪便样品或其他生物样品；水样品、土壤样品、食物样品、空气样品；或其他样品。血液样品可以包括，例如，全血、血浆或血清。自动测定装置可通过装置的外壳接收来自受试者的样品。样品采集可发生在样品采集地点或其他地方。可在样品采集地点向装置提供样品。在一些实施方式中，自动测定装置可被配置用于接纳或容纳筒匣。在一些实施方式中，自动测定装置可包含筒匣。该筒匣可从自动测定装置移除。在一些实施方式中，可向自动测定装置的筒匣提供样品。或者，可向自动测定装置的另一部分提供样品。筒匣和/或装置可以包含可被配置用于接纳样品的样品采集单元。筒匣可包含样品，并可包含用于在处理或测试样品中使用的试剂、用于在处理或测试样品中使用的一次性用品或其他材料。将筒匣放置在自动测定装置上或将筒匣插入自动测定装置之后，筒匣的一个或多个组件可与自动测定装置的其他组件流体连通。例如，如果样品在筒匣采集，则样品可转移至自动测定装置的其他部分。类似地，如果在筒匣上提供了一种或多种试剂，则该试剂可转移至自动测定装置的其他部分，或者可以将自动测定装置的其他组件带至该试剂。在一些实施方式中，筒匣的试剂或组件可保持在筒匣上。在一些实施方式中，不包含需要装管或需要维护(例如，人工或自动维护)的流体元件。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的核酸靶标来处理或测试样品的核酸测定中使用的试剂，并且还可以包含用于处理或测试样品或其他材料的一次性用品。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的核酸靶标来处理或测试样品的核酸测定中使用的所有试剂，并且还可以包含处理或测试样品所需的所有一次性用品。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的蛋白质、肽或其他蛋白质材料来处理或测试样品的氨基酸测定(例如，elisa)中使用的试剂，并且还可以包含用于处理或测试样品或其他材料的一次性用品。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的靶标材料(例如，维生素、激素、代谢物和其他分子)来处理或测试样品的普通化学测定中使用的试剂。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的靶标材料来处理或测试样品的基于受体的测定中使用的试剂，所述靶标物质与基于受体的测定中所使用的受体特异性结合。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过检测或量化样品中的电解质来处理或测试样品的进一步测定中使用的试剂。在实施方式中，筒匣可以包含用于在通过利用细胞计量术检测或量化样品中的细胞来处理或测试样品的进一步测定中使用的试剂。因此，在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行核酸测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类核酸测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行氨基酸测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类氨基酸测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行普通化学测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类普通化学测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行电解质测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类电解质测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行基于受体的测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类基于受体的测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含在自动样品分析装置或系统中执行细胞计数测定所必需的所有试剂；并且在实施方式中，该筒匣还可以携载样品，还可以携载移液管、混合器皿、试管、废物容器或用于执行此类细胞计数测定的其他器具和工具。在实施方式中，筒匣可以包含用于核酸测定、氨基酸测定、普通化学测定、电解质测定和基于受体的测定中的任何两种或更多种的试剂、工具、器具或样品或者其组合。例如，筒匣可包含用于在针对病毒核酸(例如，埃博拉rna)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包含用于在针对病毒氨基酸(例如，埃博拉核蛋白或指示埃博拉感染的其他蛋白质和蛋白质材料)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包含用于在针对病毒抗体(例如，埃博拉病毒抗原的抗体)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；可包含用于在针对电解质(例如，用于检测受试者血液中的钠或钾水平异常)的存在而处理或测试样品中使用的试剂；以及其组合。筒匣可包含用于在处理或测试样品中使用的器皿，例如，试剂器皿、混合器皿、废物器皿或其他器皿。筒匣可包含用于在处理或测试样品中使用的一次性用品。筒匣可包含试管，并且可包含用于在处理或测试样品中使用的其他组件、元件和材料。筒匣可包括至少一种样品。可选地，该筒匣包含用于插入可含有一种或多种样品的一个或多个容器的至少一个或多个槽。在实施方式中，样品可以是血液样品诸如小体积血液样品，例如，手指针刺血液样品。该血液样品可以是全血；血浆；血清；经肝素处理的全血；经乙二胺四乙酸(edta)处理的全血；经离心的血液；经过滤的血液；或者其他形式的血液样品。样品或试剂可转移至装置，诸如自动测定装置。样品或试剂可在装置内转移。样品或试剂的这种转移可在不提供从筒匣到装置的连续流体途径的情况下完成。样品或试剂的这种转移可在不提供装置内的连续流体途径的情况下完成。在实施方式中，样品或试剂的这种转移可以通过样品处理系统(例如，移液管)来完成；例如，样品、试剂或其等分试样可被吸入顶端开放的转移组件，诸如移液管尖端，该转移组件可以可操作地连接到样品处理系统，该样品处理系统将该尖端以及包含在该尖端内的样品、试剂或其等分试样一起转移至自动测定装置之上或之内的位置。样品、试剂或其等分试样可放置在自动测定装置之上或之内的位置。样品和试剂或多种试剂可使用样品处理系统以相似的方式进行混合。筒匣的一个或多个组件可以按自动化方式转移至自动测定装置的其他部分，并且反之亦然。装置，诸如自动测定装置，可具有流体处理系统。流体处理系统可进行或可帮助进行运输、稀释、提取、等分、混合以及对于流体如样品的其他操作。在一些实施方式中，流体处理系统可包含在装置外壳内。流体处理系统可允许流体的采集、递送、处理和/或运输，干燥试剂的溶解，液体和/或干燥试剂与液体的混合，以及非流体组分、样品或材料的采集、递送、处理和/或运输。该流体可以是样品、试剂、稀释液、洗液、染料或者可被装置使用的任何其他流体，并且可以包括但不限于均匀流体、不同的液体、乳液、悬浮液和其他流体。流体处理系统(包括但不限于移液管)还可用于在装置周围运输容器(其中含有或不含有流体)。流体处理系统可分配或抽吸流体。样品可包含漂浮在流体内的一个或多个微粒或固体物质。在实施方式中，流体处理系统可包含移液管、移液管尖端、注射器、毛细管或其他组件。流体处理系统可具有含内表面和外表面以及开放端的部分。流体处理系统可包括移液管(其可包含移液管主体和移液管的管嘴)并且可包括移液管尖端。移液管尖端可以从或不可以从移液管管嘴上拆除。在实施方式中，流体处理系统可使用与移液管尖端配对的移液管；移液管尖端可以是一次性的。尖端在与移液管配对时，可形成流体密封。移液管尖端可使用一次、两次或更多次。在实施方式中，流体处理系统可使用具有或不具有移液管尖端的移液管或相似器件来抽吸、分配、混合、运输或以其他方式处理流体。需要时，可从流体处理系统分配流体。在从例如移液管尖端的孔口中分配之前，流体可包含在移液管尖端内。在实施方式或情况中，在使用期间，可分配全部流体；在其他实施方式或情况中，在使用期间，可分配尖端内流体的一部分。移液管可选择性地抽吸流体。移液管可抽吸所选量的流体。移液管可以能够致动搅拌机构以混合尖端内或器皿内的流体。移液管可合并尖端或器皿，从而产生连续的流动回路以用于包括非液体形式的材料或试剂的混合。移液管尖端还可通过多个流体的同时或顺序计量递送来促进混合，诸如在两段式底物反应中。流体处理系统可包括一个或多个流体隔离的或液压独立的单元。例如，流体处理系统可包含一个、两个或更多个移液管尖端。移液管尖端可被配置用于接纳并限制流体。尖端可以是彼此流体隔离或彼此液压独立的。包含在每个尖端内的流体可以与其他尖端内的流体以及与装置内的其他流体为流体隔离或液压独立的。流体隔离或液压独立的单元可以是相对于装置的其他部分和/或彼此可移动的。流体隔离或液压独立的单元可以是单独可移动的。流体处理系统可以包含一个或多个基部或支持体。基部或支持体可支持一个或多个移液管或移液管单元。基部或支持体可将流体处理系统的一个或多个移液管彼此连接。自动测定装置可被配置用于对从受试者获得的样品执行处理步骤或操作。样品处理可包括样品制备，包括，例如，样品稀释、将样品分为等分试样、提取、与试剂接触、过滤、分离、离心或其他的预备或处理操作或步骤。自动测定装置可被配置用于对样品执行一个或多个样品制备操作或步骤。可选地，样品可制备用于化学反应和/或物理处理步骤。样品制备操作或步骤可包括以下的一个或多个：离心、分离、过滤、稀释、富集、纯化、沉淀、温育、移液、运输、色谱分析、细胞裂解、细胞计数、粉碎、研磨、活化、超声处理、微柱处理、用磁珠处理、用纳米颗粒处理或其他样品制备操作或步骤。例如，样品制备可包括将血液分离为血清和/或微粒部分或者将任何其他样品分离为各个组分的一个或多个步骤。样品制备可包括稀释和/或浓缩样品如血液样品或其他生物样品的一个或多个步骤。样品制备可包括向样品中加入抗凝剂或其他成分。样品制备还可包括样品的纯化。在实施方式中，所有的样品处理、制备或测定操作或步骤均由单一装置执行。在实施方式中，所有的样品处理、制备或测定操作或步骤均在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，大多数的样品处理、制备或测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，许多的样品处理、制备或测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，样品处理、制备或测定操作或步骤可由不止一个装置执行。自动测定装置可被配置用于对样品运行一个或多个测定，并从该样品获得数据。测定可包括一种或多种物理或化学处理，并可包括运行一个或多个化学或物理反应。自动测定装置可被配置用于对体液的小样品执行一个、两个或更多个测定。可在具有一定体积的样品上进行一个或多个化学反应，如本文其他各处所述。例如，可在具有小于飞升(femtoliter)体积的丸剂中进行一个或多个化学反应。在实例中，样品采集单元被配置用于接收相当于单滴或更少的血液或间质液体积的体液样品。在实施方式中，样品的体积可以是小体积，其中小体积可以是小于约1000μl、或小于约500μl、或小于约250μl、或小于约150μl、或小于约100μl、或小于约75μl、或小于约50μl、或小于约40μl、或小于约20μl、或小于约10μl的体积或其他的小体积。在实施方式中，对单一样品执行全部的样品测定操作或步骤。在实施方式中，所有的样品测定操作或步骤均由单一装置执行。在实施方式中，所有的样品测定操作或步骤均在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，大多数的样品测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，许多的样品测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，样品处理、制备或测定操作或步骤可由不止一个装置执行。自动测定装置可被配置用于对样品进行多个测定。在实施方式中，自动测定装置可被配置用于对单一样品进行多个测定。在实施方式中，自动测定装置可被配置用于对单一样品进行多个测定，其中该样品是小样品。例如，小样品可以具有为小于约1000μl、或小于约500μl、或小于约250μl、或小于约150μl、或小于约100μl、或小于约75μl、或小于约50μl、或小于约40μl、或小于约20μl、或小于约10μl小体积或其他小体积的样品体积。自动测定装置可以能够对单一样品进行多重测定。多个测定可同时运行；可按顺序运行；或者一些测定可同时运行而其他测定按顺序运行。一个或多个对照测定和/或校准物(例如，包括具有用于测定/测试的校准物的对照的配置)也可并入装置中；对照测定和对校准物的测定可与对样品进行的测定同时进行，或可在对样品进行的测定之前或之后进行，或以其任何组合方式进行。在实施方式中，所有的样品测定操作或步骤均由单一装置执行。在实施方式中，全部多个样品测定操作或步骤均在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，多个测定中的大多数的样品测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，多个测定中的许多的样品测定操作或步骤由单一装置执行，并且可在单一装置的外壳内执行。在实施方式中，样品处理、制备或测定操作或步骤可由不止一个装置执行。在实施方式中，全部多个测定可在短的时间段内进行。在实施方式中，这样的短的时间段包括少于约三小时、或少于约两小时、或少于约一小时、或少于约40分钟、或少于约30分钟、或少于约25分钟、或少于约20分钟、或少于约15分钟、或少于约10分钟、或少于约5分钟、或少于约4分钟、或少于约3分钟、或少于约2分钟、或少于约1分钟或其他短的时间段。自动测定装置可执行核酸测定，包括等温核酸测定(例如，用于检测和测量样品中包括dna和rna靶标在内的核酸靶标的测定)。在实施方式中，自动测定装置可执行如2014年2月18日提交的美国专利申请14/183,503；2014年3月15日提交的美国专利申请14/214,850；2014年3月15日提交的国际专利申请pct/us2014/030034；以及2014年9月17日提交的国际专利申请pct/us2014/056151中所公开的核酸测定。自动测定装置可执行抗体测定，包括酶联免疫吸附测定(elisa)以及用于检测和测量样品中的蛋白质(包括抗体)、肽和小分子的量的其他测定。自动测定装置可执行普通化学测定，包括电解质测定(例如，用于检测和测量样品中的电解质如钠和钾的量的测定)。自动测定装置可被配置用于检测与样品相关的一种或多种信号。自动测定装置可被配置用于鉴定样品的一个或多个特性。例如，自动测定装置可被配置用于检测样品中一种分析物或多种分析物或疾病状况的存在或浓度(例如，在体液、分泌物、组织或其他样品中或通过体液、分泌物、组织或其他样品)。或者，自动测定装置可被配置用于检测一种或多种可被分析以检测样品中一种或多种分析物(其可以指示疾病状况)或疾病状况的存在或浓度的信号。信号可在装置上或另一位置进行分析。运行临床检验可以包括或可以不包括对采集的数据的任何分析或比较。可在有或没有样品的情况下进行化学反应或其他处理步骤。可由装置制备或运行的步骤、测试或测定的实例可包括但不限于，免疫测定、核酸测定、基于受体的测定、细胞计数测定、比色测定、酶测定、电泳测定、电化学测定、光谱测定、色谱测定、显微测定、地形测定(topographicassay)、量热测定、浊度测定、凝集测定、放射性同位素测定、粘度测定、凝聚测定、凝固时间测定、蛋白质合成测定、组织学测定、培养测定、摩尔渗透压浓度测定和/或其他类型的测定，离心、分离、过滤、稀释、富集、纯化、沉淀、粉碎、温育、移液、运输、细胞裂解或其他样品制备操作或步骤或其组合。可由装置制备或运行的步骤、测试或测定可包括成像，包括显微镜检查、细胞计数以及制备或使用图像的其他技术。可由装置制备或运行的步骤、测试或测定可进一步包括对样品的组织学、形态学、运动学、动力学和/或状态的评估，该评估可包括对细胞的这种评估。装置可以能够在短的时间量内进行所有的机载步骤(例如，由单一装置执行的步骤或操作)。装置可以能够在短的时间量内对单一样品进行所有的机载步骤。例如，从受试者样品采集到传输数据和/或分析可能花费约3小时或更少、2小时或更少、1小时或更少、50分钟或更少、45分钟或更少、40分钟或更少、30分钟或更少、20分钟或更少、15分钟或更少、10分钟或更少、5分钟或更少、4分钟或更少、3分钟或更少、2分钟或更少、或1分钟或更少的时间。从将样品接纳在装置内到传输数据和/或关于这样的样品的装置分析的时间量可能依赖于对样品执行的步骤、测试或测定的类型或数目。从将样品接纳在装置内到传输数据和/或关于这样的样品的装置分析的时间量可能花费约3小时或更少、2小时或更少、1小时或更少、50分钟或更少、45分钟或更少、40分钟或更少、30分钟或更少、20分钟或更少、15分钟或更少、10分钟或更少、5分钟或更少、4分钟或更少、3分钟或更少、2分钟或更少或1分钟或更少的时间。装置可被配置用于准备样品以供处置，或被配置用于在样品的处理或测定后处置样品，诸如生物样品。在实施方式中，自动测定装置可被配置用于传送从样品获得的数据。在实施方式中，自动测定装置可被配置用于通过网络进行通信。自动测定装置可包括可与网络接合的通信模块。自动测定装置可经由有线连接或无线地连接至网络。该网络可以是局域网(lan)或广域网(wan)诸如因特网。在一些实施方式中，该网络可以是个人局域网。该网络可包括云。自动测定装置可连接至网络而无需中间装置，或者可能需要中间装置将自动测定装置连接至网络。自动测定装置可以通过网络与另一装置通信，该另一装置可以是任何类型的联网装置，包括但不限于个人计算机、服务器计算机或膝上型计算机；个人数字助理(pda)，诸如windowsce装置；电话，诸如蜂窝电话、智能电话(例如，iphone、android、blackberry等)或位置感知的便携式电话(例如gps)；漫游装置，诸如联网的漫游装置；无线装置，诸如无线电子邮件装置或能够与计算机网络无线通信的其他装置；或者可以通过网络而可能通信并处理电子交易的任何其他类型的网络装置。这样的通信可包括向云计算基础设施或可被其他装置访问的任何其他类型的数据存储基础设施提供数据。自动测定装置可以向例如医疗保健专业人员、医疗保健专业场所诸如实验室或其附属机构提供关于样品的数据。实验室、医疗保健专业人员或受试者中的一个或多个可具有能够接收或访问由自动测定装置提供的数据的网络装置。自动测定装置可被配置用于向数据库提供关于样品的数据。自动测定装置可被配置用于向电子病历系统、向实验室信息系统、向实验室自动化系统或其他系统或软件提供关于样品的数据。自动测定装置可以按报告的形式提供数据。实验室、装置或其他实体或软件可对关于样品的数据进行实时分析。软件系统可进行化学分析和/或病理分析，或者这些可分布在实验室、临床以及专业或专家人员的组合中。分析可包括样品的定性和/或定量评价。数据分析可包括随后的样品的定性和/或定量评价。可选地，可以基于原始数据、经预处理的数据或经分析的数据而生成报告。可以制作这样的报告以便保持从样品获得的数据的机密性、关于从中获得样品的受试者的身份和其他信息、数据的分析以及其他机密信息。报告和/或数据可以传输至医疗保健专业人员。可以向数据库、电子病历系统、向实验室信息系统(lis)、向实验室自动化系统(las)或其他系统或软件提供由自动测定装置获得的数据或对这样的数据的分析或报告。在一个实施方式中，从毛细血管血液样品进行核酸扩增(naa)。核酸扩增可以是定性或定量的。在一个实施方式中，处理用于naa的样品部分以移除成形组分并仅留下血浆。可选地，处理用于naa的样品部分以移除成形组分并仅留下血清。可选地，用于naa的样品部分包括采用至少一种预处理进行处理的毛细血管血，所述预处理诸如但不限于至少一种与naa技术相容的抗凝剂。在一个非限制性实例中，样品的采集可以凭借样品采集装置，诸如但不限于2014年3月17日提交的pct专利申请序列号pct/us14/30792和2013年12月5日提交的pct专利申请序列号pct/us13/00268中描述的那些装置，上述两个申请均出于所有目的而通过引用全文并入本文。在另一非限制性实例中，该过程可涉及装运和/或采集毛细血管血的手指针刺样品和/或其他生物样品以供分析，其中这样的分析可包括但不限于从相同的原始样品的核酸扩增、一个或多个电解质测量以及组合抗体测量。此外，一些实施方式可包括全都针对从受试者一次采集的同一样品的全血细胞计数(cbc)和细胞计数以供感染分诊和管理。在一个非限制性实例中，该过程可涉及对样品使用基于苯酚的灭活材料以使病毒如埃博拉病毒(例如，扎伊尔型埃博拉病毒)灭活，其中这样的灭活材料可以是但不限于一个或多个样品采集小瓶、样品采集回路等之中的trizol(invitrogen)(按重量计包含30-60％苯酚、15-40％异硫氰酸胍和7-13％硫氰酸铵)或其他灭活剂，以便为了运输或在仪器使用之前完全灭活样品。可选地，一些实施方式可以使用一种或多种rneasy(qiagen)和/或tripure(roche)试剂。在一个非限制性实例中，样品灭活通过使用一步样品均匀化/裂解程序来实现，其中所述tripure分离试剂破坏细胞并使内源性核酸酶变性，其中还可以与tripure试剂一起或在tripure试剂之后加入氯仿。其他的可选病毒灭活技术可包括使用：漂白剂诸如但不限于1:10漂白溶液、5％来苏尔/酚类化合物、微化学/季铵、焚化/高压釜和或对于脱水和uv不稳定的病毒。在针对分析物水平处理样品之后，可以将这些灭活技术中的一些技术应用于该样品。可选地，一些灭活技术可应用于该样品的某些部分，诸如不会进行分析的成形血液组分的团块。一些实施方式可具有在所述装置中进行灭活的spu，其中所述用户将具有活性样品的样品容器装载到筒匣中并将该筒匣插入spu中。在这样的实施方式中，spu将在由spu执行的可编程方案所确定的一个或多个时间自动地处理对全部或部分样品的灭活。一些实施方式可在筒匣c中包含灭活材料。可选地，一些实施方式可在spu搭载的且不是筒匣c的一部分的储器中包含灭活材料。可选地，一些实施方式可允许将两个筒匣插入spu中，其中在一个非限制性实例中，一个筒匣具有试剂而另一筒匣具有一种或多种灭活材料。或者，该过程可通过在装置中的裂解和提取步骤(或全部两者)使样品灭活。可选地，一些实施方式可使用活化样品，只要在剧烈运动之前加上帽或盖子。可选地，进一步的实施方式可在将采集小瓶插入该装置之前对采集小瓶进行离心，或者可选地，在该装置内进行离心。可选地，可在插入该装置之前，或可选地在该装置内对样品使用其他成形组分分离技术。可选地，一些实施方式可在该装置周围使用另外的密闭罩以使该装置外的污染风险最小化。自动样品分析装置可具有外壳；这样的外壳可充当密闭罩。在实施方式中，自动样品分析装置可放置在外罩如密闭罩内。置于该外罩内的自动样品分析装置可具有外壳，并且在这样的实施方式中，该外壳因此将被封闭在该外罩内。外壳可包括一个或多个空气过滤器，例如，适合于阻挡污染物和微生物流动的高效空气微粒(hepa)过滤器。密闭罩可包括一个或多个空气过滤器，例如，适合于阻挡污染物和微生物流动的hepa过滤器。在实施方式中，空气过滤器可在外部空气流动至或进入到密闭罩的内部时或在全部两种情况下过滤外部空气，以有效地减少或防止灰尘或其他污染进入spu，从而减少或防止对spu操作的干扰，以及减少或防止对spu的损坏。在实施方式中，空气过滤器可在空气向外流动或在空气离开密闭罩的内部时或在全部两种情况下过滤空气，以有效地减少或防止污染(无论是微滴、微粒物质或其他污染物)离开spu，从而有效地减少或防止有害物质被运输或传播出spu。在实施方式中，适合于在密闭罩中使用的空气过滤器能够滤除进入过滤器的空气中的绝大多数颗粒(即，阻止颗粒穿过过滤器)。例如，合适的空气过滤器可以滤除进入过滤器的空气中的0.3微米(0.3μm)直径颗粒的超过约98％。在实施方式中，合适的空气过滤器可以滤除进入过滤器的空气中的0.3μm直径颗粒的超过约99％；或者滤除进入过滤器的空气中的0.3μm直径颗粒的超过约99.5％、或超过约99.7％、或超过约99.8％、或超过约99.9％、或超过约99.95％、或超过约99.995％、或超过约99.9995％、或超过约99.99995％、或超过约99.999995％或更多。在一个非限制性实例中，对来自稀释液或预扩增热循环的毛细血管样品执行灵敏(低检测限[lod])naa，以提高灵敏度(特别是关于等温测定)。此外，一些实施方式可使用来自毛细血管样品的等温测定来生成实时数据(对于阳性患者，<1小时且通常<30分钟)以供实时分诊，并能够影响对测试为阳性的受试者的检疫。可选地，一些实施方式可使用具有成形组分分离能力的样品采集装置以获得血浆或除此之外分离出细胞，诸如但不限于2014年3月15日提交的pct专利申请序列号pct/us14/30070中描述的样品采集装置，该申请出于所有目的而通过引用全文并入本文。可选地，该系统可提供来自在通过采集回路采集之后立即作为全血装运的或装运并分离成血浆的手指针刺样品的运行的测试的任何组合。该系统的实施方式可提供将该系统本身放在热区而非参考实验室的能力，以促进当场检疫而无需等待时间来进行测试的快递运送，并因此便于遏制疫情，其中不将活性样品运输到热区之外。此外，一些实施方式可使用具有样品处理装置的定制卡车，并在所述定制卡车上可选地具有以下各项中的一项或多项：内置电源/发电机、冰箱、包括卫星连接性在内的连接性和/或对于在灾区驾驶/定位的安全性。这些货车或类似的载具可分布并建立分散的地点，在所述地点周围进行实时检疫以遏制疫情。可选地，一些实施方式可以使用分散到分布的地点的、用于埃博拉检测的卡车或移动单元，所述卡车或移动单元具有用于实时分诊和检疫的内置电源和卫星连接性，并具有密闭外壳结构——在其周围搭建有床铺。在实施方式中，spu可以是用于执行如本文所述的分析前功能(例如，样品稀释、样品等分、样品制备和其他功能中的一种或多种)的模块化装置。spu可被设计用于自动地重复在相关的传统、手动或部分手动的测定方案中使用的处理系统。在实施方式中，可将spu封闭在绝热且不透光的薄金属外罩中。在实施方式中，spu可在一些实施方式中具有以下组件中的一些组件，并且在一些实施方式中具有以下组件中的所有组件，所述组件为：液体处理模块、离心模块、超声发生器模块、磁体工具、一个或多个检测器(其可以包括光度计模块、荧光计模块、荧光计/浊度计模块、分光光度计模块和显微镜模块)；在实施方式中，spu将会包括所有此类检测器)、热控制系统以及机器视觉系统。在实施方式中，spu可由任何合适的组件制成，包括购买的组件、加工部件和模制部件。在实施方式中，此类加工部件可由铝、不锈钢或其他金属制成。样品、消耗品、试剂、试剂器皿和其他物项可经由筒匣提供给spu。例如，样品和进一步处理及反应的产物可包含在一次性试剂托盘或筒匣内的消耗品中。所有的消耗品是分立的，使得用于每个测定的试剂和反应分别存在和发生于物理上分离的位置上以防止交叉反应性。所述消耗品含有所有的液体或试剂，使得样品或试剂从不与spu直接相互作用。用于处理的所有消耗品均包含在筒匣中(且不内建于spu中)，并且可在处理完成时放回到筒匣中以便处置。可用于naa测定的消耗品包括但不限于以下各项：圆形器皿(例如，用于储存试剂、稀释液、混合和反应的60μl容量的聚丙烯器皿)；洗涤器皿(例如，用于储存洗涤缓冲液的200μl容量的聚丙烯器皿)；离心器皿(例如，在一个实施方式中，用于离心血液并高效移除上清液的窄直径的100μl容量的聚苯乙烯器皿；或者在另一实施方式中，用于离心样品并高效混合和转移小体积的120μl容量的聚丙烯器皿)；微型尖端(例如，用于输送流体的10μl容量的聚丙烯尖端；可以包括用于防止交叉污染的硅胶过滤器)；大尖端(例如，用于输送流体的40μl容量的聚丙烯尖端；具有用于防止交叉污染的硅胶过滤器)；动态稀释尖端(例如，用于输送溶液的10μl容量的涂层聚苯乙烯尖端；具有用于防止交叉污染的硅胶过滤器)；naa器皿(例如，充当用于扩增反应的反应器皿的60μl容量的聚丙烯器皿)。在实施方式中，来自生成于这些器皿中的产物的最终荧光信号可由naa器皿检测。其他消耗品可包括，例如，naa托盘(例如，容纳多个naa器皿诸如8个naa器皿的托盘)；这样的托盘可被设计成能够由流体处理模块拾取以在spu的筒匣与naa模块之间运输器皿。其他消耗品可包括，例如，超声发生器器皿(例如，可用来在超声处理期间容纳样品的350μl聚苯乙烯器皿)。其他消耗品可包括，例如，磁体工具套筒(例如，用来从消耗品或样品或者其他材料或物体分离磁体以防止污染的一次性聚丙烯套筒)。筒匣可容纳以上所列的全部消耗品或其中一部分消耗品。筒匣可容纳样品以及以上所列的全部消耗品或其中一部分消耗品。筒匣可包括封盖以将全部消耗品保持到位并防止用户相互作用。在实施方式中，筒匣可提供有封闭的封盖，在其下方可根据需要携载naa测定所需的全部消耗品。可以预填充执行naa测定所需的试剂和缓冲液并将其密封在器皿中(例如，在圆形器皿和洗涤器皿中)。类似地，可以将用于另一类型的测定诸如细胞计量术、elisa、普通化学或其他测定的消耗品和试剂提供于筒匣中。类似地，可以将用于其他类型的测定诸如细胞计量术、elisa、普通化学和其他测定的消耗品和试剂与用于naa的那些消耗品和试剂或与用于其他测定的那些消耗品和试剂一起包含在相同的筒匣中。因此，在实施方式中，可采用专用于单一类型的测定或专用于两种类型的测定(例如，naa、细胞计量术、elisa和普通化学中的两种)的筒匣来包含用于其他类型的测定诸如细胞计量术和其他普通化学测定的消耗品和试剂。在实施方式中，可采用专用于三种类型的测定(例如，naa、细胞计量术、elisa和普通化学中的三种)的筒匣来包含用于其他类型的测定诸如细胞计量术和其他普通化学测定的消耗品和试剂，或者可以包含用于全部三种类型的测定的消耗品。可以提供预填充有用于测定的主混合物的naa器皿，并且该naa器皿可包括位于naa器皿顶部上的保护蜡层以容纳主混合物。在实施方式中，实验室自动化系统(laboratoryautomationsystem，las)可包括至少一个服务器，该服务器被配置用于与一个或多个spu通信并对其加以控制。例如，与一个或多个spu的通信和对其的控制可使用加密的、基于证书的安全系统来完成。las可提供多种功能，包括基于要对样品运行的所需测试而向spu传送测试方案，以及保持对spu的监督。在处理过程中，spu和las可进行通信以基于las中追踪的批次信息来验证消耗品的质量和完整性，执行样品处理步骤以及监测和监督样品处理的质量，以及执行其他功能和操作。在控制spu中的样品处理之后，可以将来自样品的信号组传送至las，在las处可对原始数据进行分析，生成用于实验室信息系统的相关报告事项，以及执行分析后处理步骤。在实施方式中，las可由临床实验室改进法案(clia)认证的实验室来监督；这样的监督可以提供对spu的监督和远程控制。例如，可以将含有患者样品的消耗品(例如，用于血液样品的theranosnanotainertm管)放置在筒匣中，并且可以将其插入spu中。spu可以扫描筒匣上的条形码，并可将条形码值传送至las。las可安全地对条形码值进行解码，并且可将样品处理方案传送至spu中的处理器。处理器可进一步将从las接收的任务分配至spu中的各个模块。spu可以将信息反馈给las，以监测spu及其性能。在实施方式中，spu可以不断地将信息反馈给las，以确保对spu及其性能的持续监测。在实施方式中，样本处理的最终步骤可以包括信号生成(例如，用于naa测定的荧光，用于elisa测定的化学发光，用于电解质测定的透射光强度谱)和通过检测器进行的信号检测。这样的数据可以传输至las，该las可以对这些原始数据进行分析并产生临床相关分析物报告事项。在实施方式中，对这些原始数据进行的这种分析以及通过这种分析产生的此类临床相关分析物报告事项可以提供给clia实验室工作人员并可用于供所述工作人员进行监督和进一步分析(如适用)。在实施方式中，spu可在las的控制下操作。例如，spu可经由安全因特网或其他数据网络连接，例如，经由铱星(iridiumsatellite)技术和服务而与las连接。spu和las可经由彼此双向通信而连接。例如，las可向spu的处理器发送各种命令和方案以供spu执行。类似地，spu可以向las发送由spu获得的信息，例如从采用样品的分析前步骤获得的数据或从spu内的传感器获得的信息(例如信号、图像、温度信息)。由spu向las发送的信息可响应于从las到spu的特定信息请求，或者其可以是标准化方案的一部分。例如，在spu中完成分析前处理时，las可进行分析和分析后处理。虽然spu可位于可能与las物理分离的现场位置，但是在实施方式中，完全控制和监督可以从中心las扩展到远程spu，以确保所报告的测试的clia监督和认证。spu可以充当clia认证实验室的一部分，并且由las中分析的数据生成的和从spu上处理的样品获得的实验室结果可以得到clia认证。在实施方式中，可以在spu之中或之上提供触摸屏，以便操作该装置。这样的触摸屏可以例如通过确保技术人员在处理样品之前遵循所有适当的步骤，以及双向通信，来允许详细的、面向用户的指令、监督。在实施方式中，位于远程位置的spu的操作可以由静脉采血医师或经过spu操作训练，例如经过现场位置spu操作训练的其他适当授权的技术人员来进行。在实施方式中，las可允许在无需操作者干预的情况下进行临床实验室的操作。例如，这样的无需操作者干预的操作可以包括通过直接las接合、试样处理、试样和相关信号输运、结果评价、重复测试、反射测试和质量评估以及结果报告中的一个或多个来控制spu。在实施方式中，可以使用安全通信基础设施来允许通过las的认证分析和测试的clia合规性，以在clia认证的实验室中确定受试者(例如，在人类受试者)体内存在或不存在各种物质，同时通过现场的spu来使现场样品处理自动化，以便使分析前误差和变异性最小化。实施例1通过自动样品分析装置spu对本实施例中所分析的样品进行分析。本实施例中阐述的方法可应用于具有如本文公开的能力的其他自动样品分析装置。自动样品处理装置或系统诸如spu可包括流体处理和流体运输能力，包括样品器皿、混合器皿以及用于容纳和处理样品的其他容器；可包括离心机、与离心机一起使用的器皿，以及与离心机一起使用的其他元件或组件；可包括超声发生器、与超声发生器一起使用的器皿，以及与超声发生器一起使用的其他元件或组件；可包括用于例如样品组分的磁性分离的磁体和磁性组件；可包括光学检测器、电子检测器；可包括光源、滤光器、反射镜、棱镜，以及其他光学元件和组件；并且可包括其他组件和能力。样品可经由筒匣提供至自动样品处理装置或系统，诸如spu(例如，装载于其中)。与自动样品处理装置或系统诸如spu一起使用的筒匣可包括用于样品分析的试剂、用于分析样品的器皿，以及用于分析样品的其他组件、工具、装置或消耗品。因此，筒匣可以携载样品，并且可以用于向自动样品处理装置或系统诸如spu提供样品。筒匣可以携载用于分析样品的试剂和其他材料。在实施方式中，筒匣可以携载样品，并且可连同该样品携载用于通过自动样品处理装置或系统诸如spu分析该样品的试剂和其他材料。在该实施例中，针对埃博拉病毒标志物，并且针对指示埃博拉感染的电解质水平对小体积血液样品进行测试。用于tnaa测定的样品：通过手指针刺采集的乙二胺四乙酸(edta)-抗凝全血。用于elisa测定的样品：通过手指针刺以全血采集的肝素抗凝血浆(在spu中处理成血浆)。edta抗凝全血也可用于elisa测定。用于电解质测定的样品：通过手指针刺以全血采集的肝素抗凝血浆(在spu中处理成血浆)。测量项：来自扎伊尔型埃博拉病毒(ebolazairevirus)的基因组的特定核酸序列、埃博拉病毒的igm和igg抗体，以及钠和钾水平。样品处理的最终步骤是信号生成(对于tnaa测定，信号生成为荧光，在elisa测定的情况下信号生成为化学发光，而对于电解质测定，信号生成为透射光强度谱)。医疗保健提供者首次可以能够在无需将样品运输至临床实验室用于测试的情况下，在患者表现出埃博拉感染的体征和症状的现场进行用于快速检测埃博拉病毒的分子测定，同时进行针对埃博拉病毒抗体的测定，连同钠测定和钾测定所必需的化学测定以便管理电解质失衡。另外，可以能够用单次使用的可完全伸缩的刺血针通过毛细管装置采集样品，而无需针和进行静脉切开术所需的训练有素人员。此外，可以将系统部署至热区或处理单元中，其中可通过快速测试运行时间来帮助实时评估和检疫。通过与自学习流行病学模型/软件系统的实时连接性，系统进一步有助于病例的实时报告和建模，因为该测定在如本文提供的用于毛细血管样品的系统上进行，该系统被配置成支持通过卫星进行远程连接(以至于不需要存在蜂窝网络)并且分配至患者进行治疗且将被理想地测试和/或检疫的地点。在实施方式中，还可以进行用于同时测量导致未知原因的其他发热的病原体的其他测定，以及针对埃博拉病毒的其他毒株的分子试验，和针对贫血的血红蛋白和铁检验。未知原因的发热将会针对这些状况：拉沙热、疟疾和霍乱(最终还有伤寒、马尔堡病、i型、ii型、iii型和iv型登革热、基孔肯雅病、西尼罗病毒和脑膜炎)，目标是通过包含与发烧样症状相关的测试使得患者可能不那么害怕让自己进行测试而允许筛查过程的参与度更高。包含贫血测试，以便更好地对治疗单元中的患者进行分诊，从而关注于那些感染者常患有钩虫或其他状况并在能够得到针对感染本身的治疗之前死于贫血的这一事实。本方法、装置、系统和试剂盒提供了原本对于检测传染病不可获得的优点，并且提供了用于治疗和预防传染病传播的改进方法。例如，如本文公开的实时诊断(rdt)允许在每个治疗单元的入口处对患者进行分诊。这使得能够将患有埃博拉的那些患者与患有更加典型的热带感染诸如疟疾、伤寒和志贺氏菌感染的其他患者快速分离。这降低了这些其他患者在治疗单元的疑似侧(suspectside)暴露于埃博拉感染的非常大的风险。另外，在没有适当的个人防护装备(ppe)的情况下，医疗保健工作者在毫不怀疑地接触埃博拉患者时经常会被感染。此外，这些新爆发疫情中的埃博拉患者经常在公共等待区与寻求医护的其他人一起等待，并与医院的其他非埃博拉患者一起被安置在病房中。这种做法导致许多其他人对感染的本可避免的暴露。通过如本文公开的针对埃博拉的快速诊断测试的可用性，这些可预防的感染可以得到大幅减少。本文公开的方法、装置、系统和试剂盒提供了在任何给定的时间点、在给定的地理区域内评估埃博拉感染的真实分布和患病率的手段，从而允许对临床和后勤支援进行规划。关于感染传播的更好数据将使得能够增强传播速率的预测，并且使得能够聚焦在最有效的区域中进行意识培训。图1提供了如本文公开的示例性系统的示意图。用于在短时间内进行小体积血液样品的分析的系统可包括分析前部分(由受控于las的spu进行的样品处理)、分析部分(由las进行的报告生成)和分析后部分(由las进行的报告传输)。如本文所述的示例性系统包括在临床实验室改进修正案(clia)认证实验室的监督下操作的以下组件：样品处理单元(“spu”)，其被设计用于部署到将会存在怀疑埃博拉病毒感染的患者进行诊断和治疗的地点(“现场地点”)；以及中心实验室自动化系统(“las”)，其由clia认证的实验室监督，运行如本文公开的测定。可选地，应当理解，其他实施方式可以使用由除clia之外的授权机构认证的一个或多个其他实验室。现场地点可以是用于针对埃博拉病毒对受试者进行诊断和治疗的现场位置。由于采集、处理和处置潜在的传染性埃博拉样品，因此这样的地点被认为是“热”点。因此，采集和处理这些试样的那些个体必须遵守处理假定为埃博拉病毒阳性样品的适用安全规程。spu可在该环境下使用，并相应地可被假定为是受到污染的。使用该spu的个体必须使用现场地点所要求的合适的ppe。在实施方式中，spu可被容纳在防护容器或鞘套内，或者被包裹在塑料或其他材料中，以便减少或防止其污染，或者以便减少或防止其外表面的污染。在实施方式中，tnaa和elisa测定的主要应用分别是在有症状或存在埃博拉病毒感染风险的患者中(i)检测埃博拉病毒rna的存在，和(ii)检测埃博拉igm和igg。电解质测定的主要应用是准确且精确地量化表现出与埃博拉病毒感染一致的体征和症状的患者中钠和钾的浓度。用于本文公开的扎伊尔型埃博拉测定的样品类型为通过手指针刺采集的edta抗凝全血。用于elisa测定和电解质测定的样品类型为通过手指针刺以全血采集的肝素抗凝血浆(在spu中处理成血浆)。edta抗凝和肝素抗凝(如适用)的全血样品在现场地点采集并引入到一次性筒匣中，并馈送至spu，在该spu中样品经历处理和反应步骤，并最终被引入到检测器以产生一组信号。可以将这些信号组传送至las，在该las中处理并分析原始数据并且提供监督，并且生成相关的报告事项(例如，其可包括原始数据、经分析的数据和数据图)。图1示出了该系统的工作流程的示意图。由编号1到4的方框图示的步骤表示分析前步骤。分析前步骤包括样品采集、样品处理、试剂添加、信号生成和传输。由编号5到8的方框图示的步骤表示分析步骤。分析步骤包括对从样品采集地点处的装置接收的数据的分析、监督——包括对照、校准、重复、异常值、装置和样品识别以及质量信息的分析，以及报告事项的生成。报告向医疗保健专业人员的传输表示分析后步骤。分析后步骤包括数据分析的进一步审阅，以及报告生成的审阅和在clia实验室人员签发和向索取给定测试的医护提供者的传输之前对于针对特定测试生成的报告的审阅。对于无法经由有线连接访问因特网的现场部署，可以经由铱星技术和服务保持与实验室自动化系统的连接。可以将测试结果配置用于显示在处理样品的样品处理单元上，并且/或者可以将结果自动上传至托管云端，以向授权的医护提供者显示。本文所述的系统由在临床实验室改进修正案(clia)认证实验室的监督下操作的以下组件构成：样品处理单元(“spu”)，其被设计用于部署至将会存在怀疑埃博拉病毒感染的患者进行诊断和治疗的地点(“现场地点”)；以及中心实验室自动化系统(“las”)，其由clia认证的实验室监督，运行如本文公开的测定。如图1的示意图中所示，本文公开的系统的操作可遵循本文公开的方法的工作流程的示意图。在图1中，由编号1到4的方框图示的步骤表示分析前步骤。分析前步骤包括样品采集、样品处理、试剂添加、信号生成和传输。由编号5到8的方框图示的步骤表示分析步骤。分析步骤包括对从样品采集地点处的装置接收的数据的分析、监督——包括对照、校准、重复、异常值、装置和样品识别以及质量信息的分析，以及报告事项的生成。报告向医疗保健专业人员的传输表示分析后步骤。分析后步骤包括数据分析的进一步审阅，以及报告生成的审阅和在clia实验室人员签发和向索取给定测试的医护提供者的传输之前对于针对特定测试生成的报告的审阅。图1及本文其他各处所使用的术语包括以下各项。clia认证实验室：样品处理单元(“spu”)，其被设计用于部署到将会存在怀疑埃博拉病毒感染的患者进行诊断和治疗的地点(“现场地点”)；以及中心实验室自动化系统(“las”)，其由clia认证的实验室监督，运行如本文公开的测定。现场地点是用于针对埃博拉病毒对受试者进行诊断和治疗的现场位置。spu可在该环境下使用，并相应地可被假定为受到污染。tnaa和elisa测定的主要应用分别是在有症状或存在埃博拉病毒感染风险的患者中(i)检测埃博拉病毒rna的存在，和(ii)检测埃博拉igm和igg。电解质测定的主要应用是准确且精确地量化表现出与埃博拉病毒感染一致的体征和症状的患者中钠和钾的浓度。在实践本文公开的方法的过程中，全血样品在现场地点采集并引入到一次性筒匣中，并馈送至spu，在该spu中样品经历处理和反应步骤，并最终被引入到检测器以产生一组信号。可以将这些信号组传送至las，在该las中处理并分析原始数据并且提供监督，并且生成相关的报告事项。在实施方式中，本文公开的扎伊尔型埃博拉测定使用特异性引物来检测扎伊尔型埃博拉核蛋白(ezn)和扎伊尔型埃博拉糖蛋白(ezg)的基因组序列。例如，可以使用以下引物：扎伊尔型埃博拉核蛋白(th-ezn)引物：特异性检测全血试样中编码扎伊尔型埃博拉核蛋白(ezn)的基因组序列。扎伊尔型埃博拉糖蛋白(th-ezg)引物：特异性检测全血试样中编码扎伊尔型埃博拉糖蛋白(ezg)的基因组序列。人着丝粒重复(th-hcr)引物：特异性检测人着丝粒重复(hcr)，并且用作人临床试样的阳性对照，以指示由临床试样的提取而产生的核酸的充分分离。rna掺加对照(th-rna-sic)引物：特异性检测在rna提取过程之前掺入临床试样中的合成模板rna。其用于指示由临床试样的提取产生的rna的充分分离。用于扎伊尔型埃博拉tnaa测定的试剂包括以下各项：在实施方式中，本文公开的扎伊尔型埃博拉测定可采用来自以下试剂列表的试剂：tnaa核酸测定使用引物与指示埃博拉，例如，指示埃博拉的扎伊尔型埃博拉毒株的核酸结合并对其进行检测。引物可被设计成包括与埃博拉的扎伊尔型埃博拉毒株的任何合适的靶标部分互补的核酸部分(或包含核酸类似物、肽核酸或模拟核酸的其他分子的部分)。这样的引物包括通常至少约8个碱基长、或约10个碱基长、或约15个碱基长或者更长的互补部分。引物的互补部分能够与靶核酸(例如，扎伊尔型埃博拉毒株rna)杂交，并因此在检测样品中靶核酸的存在以及测量样品中靶核酸的量时是有用的。在实施方式中，与本文公开的扎伊尔型埃博拉测定一起使用的对照材料可包括以下材料。在实施方式中，本文公开的埃博拉tnaa测定包括以下与每个试样样品同时处理的对照：扎伊尔型埃博拉核蛋白阳性模板对照(th-ezn-ptc)：是被设计用于与th-ezn引物试剂反应以指示扎伊尔型埃博拉核蛋白反应是否起效的阳性模板对照(ptc)。该ptc材料由合成模板rna组成。扎伊尔型埃博拉糖蛋白阳性模板对照(th-ezg-ptc)：是被设计用于与th-ezg引物试剂反应以指示扎伊尔型埃博拉糖蛋白反应是否起效的阳性模板对照(ptc)。该ptc材料由合成模板rna组成。阴性处理对照(npc)：是充当阴性样品处理对照的水样品。其用于确保在两个单独反应中的th-ezn测定和th-ezg测定都没有假阳性反应。rna掺加对照(th-rna-sic)：是阳性模板对照(ptc)，其被设计用于与th-rna-sic试剂反应以指示由临床试样的提取和扩增产生的rna的充分分离。埃博拉病毒核酸测定的方案在实施方式中，埃博拉病毒核酸测定的所有测定步骤都可在spu上进行。例如，样品制备和提取处理、扩增和检测全都可在spu上进行。例如，如本文所公开，可以使用基于磁珠的样品制备化学法；在实施方式中，例如，可将所有需要的试剂与样品一起提供在测定筒匣上。为了避免由样品中的rna酶造成的样品降解，可以使用样品防腐技术，其中用氯化锂和碘乙酸处理该样品。样品防腐试剂存在于theranosnanotainertm管中(样品可采集至该管中，并且该管在采集之后立即容纳样品)，以在从患者采集样品时帮助稳定样品。采集后，可将含有样品的nanotainertm管插入筒匣中，并将该筒匣插入spu中，其中spu中的液体处理单元处理该样品以提取rna用于后续预扩增反应以及随后的等温扩增和检测。在spu中实现的核酸提取采用基于磁珠的方法来从样品分离和纯化靶标病原体核酸。作为tnaa核酸测定的一部分的核酸纯化中涉及的步骤的简要概览在图2a中示出。这样的步骤可通过自动样品分析装置或系统诸如spu进行，并且可在自动样品分析装置或系统诸如spu内进行。spu的操作温度可被设置在接近于设定温度，并且任何时候都可被控制在接近于设定温度。在实施方式中，spu操作的设定温度例如可以是选自从室温或略高于室温至约40℃的范围内的温度，例如，可以是约26℃、或约27℃、或约28℃、或约29℃、或约30℃、或约31℃、或约32℃、或约33℃、或约34℃、或约35℃、或约36℃、或约37℃、或约38℃、或约39℃、或约40℃。应当理解，该温度可在一段时间内，或在样品分析装置或系统的一些部分中超过这样的范围，使得该温度例如可在一段时间内，或者在外壳内的装置或系统的一些部分中为约42℃、或约44℃、或约46℃、或约48℃、或约50℃、或约52℃、或约54℃、或约56℃、或约58℃、或约60℃、或约62℃、或约64℃、或约66℃、或约68℃、或约70℃或更高。图2a提供了tnaa核酸纯化步骤的示意描述。在实施方式中，这样的步骤在自动样品分析装置或系统(例如，spu)中进行，并且可在场地(例如，乡村或其他位置，而不一定在实验室、诊所或医院环境内)进行。在spu中实现的核酸提取采用基于磁珠的方法来从样品基质分离和纯化核酸。用于从样品基质分离和纯化核酸的基于磁珠的方法中涉及的步骤的简要概述如下：1)对于血液样品，将针尖插入样品器皿中，以接触样品。通过上下移液几个循环而将样品混合。2)对于血液样品，通过两个较大的移液管尖端将样品传送至超声发生器器皿。将裂解缓冲液(还使样品中的埃博拉病毒灭活)和官能化磁珠从筒匣上的其他试剂储存位置添加至超声发生器器皿。3)将帮助核酸结合至官能化磁珠的结合缓冲液从试剂储存孔转移至超声发生器器皿并通过上下移液来混合。4)使用较大的移液管管嘴拾取位于spu内的磁体工具。将磁体工具缩回该管嘴内，使得在该管嘴用于拾取消耗品中的磁体工具套筒之前仅2-3mm可见。该套筒将磁体工具与样品屏蔽，以防止污染。5)继而，将磁体工具延伸至尖端套筒中并插入超声发生器器皿中，以捕获套筒外部的磁珠。6)带有捕获的核酸的磁珠聚集在套筒的尖端上，并且可被运输至含有洗涤缓冲液的孔中。7)通过移动活塞马达，将由磁体工具套筒覆盖的磁体工具缩回管嘴中，并将管嘴在垂直方向上移动多次，以释放珠子并将其与流体混合。通过移动管嘴将磁体工具/磁体工具套筒从孔中移除。8)将磁体工具延伸回尖端套筒中并插入洗涤缓冲液孔中，以捕获洗涤的磁珠并将其运输至下一步骤。9)对于用于纯化样品的每一次额外的珠子洗涤，重复步骤7至步骤9。10)将磁体工具及其套筒插入洗脱孔中，该套筒携载捕获的具有纯化核酸样品的磁珠。11)将磁体工具缩回管嘴中，并且将整个管嘴在垂直方向上移动几个循环以释放珠子，并在缩回管嘴之前采用活塞运动通过流体置换进行混合，使得尖端对整个孔进行清洁。12)将所释放的珠子在洗脱孔中温育1分钟。13)将磁体工具延伸回磁性工具套筒中，并插入洗脱缓冲液孔中，以捕获磁珠。继而将磁体工具套筒丢弃到其在筒匣上的原始位置，并使磁体工具返回其在spu中的休止位置。14)准备好将洗脱缓冲液分配到下游tnaa测定中。tnaa测定和信号生成从上述步骤提取的洗脱缓冲液含有所提取的核酸材料。可以利用模块的热控制器将检测器3升温至56℃。带有tnaa器皿的tnaa托盘由液体处理模块拾取并转移到检测器3。该器皿含有用于tnaa测定的主混合物，覆盖有蜡层。该蜡层在升高的(56℃)温度下熔化。从筒匣上的洗脱孔抽吸3ul洗脱缓冲液，并使用微型尖端将其转移至tnaa器皿中，从而确保该尖端穿透过熔化的蜡层。将样品与主混合物混合以确保均一性。将尖端丢弃回筒匣中。当将该尖端从检测器模块移离时，较低的spu温度导致尖端周围熔化的蜡凝固，由此形成围绕着尖端开口的物理屏障并防止从尖端泄漏出任何样品。这样保护spu免受污染。通过流体处理模块拾取新的尖端，并将2ul的酶从筒匣中的试剂孔转移至naa器皿，并将其与样品和主混合物混合。将该尖端缩回并返回至其在筒匣上的位置。将每个naa器皿中的反应混合物温育5分钟，此后使用对应于每个反应器皿的光电二极管来依次捕获30个样品的反应信号，并且捕获全部30个样品的此类信号耗时稍微超过10s。此后，在捕获下一组前，存在约10s停顿，从而确保以每20s一次检测的频率来检测每个样品。将数据(计数的形式)传输至las，在las中记录并分析荧光信号。该分析包括识别变化点，以确定该测定的拐点时间。tnaa测定的对照对照被包含在用于tnaa测定的筒匣上，并且包括：1)无模板对照(ntc)：对于th-ezn测定和th-ezg测定，ntc测试可同时运行，以对背景信号和污染进行质量控制(qc)。2)阳性模板对照：对于每个试样，对于th-ezn测定和th-ezg测定，阳性模板对照同时运行，以确保化学法和装置的总体性能。3)样品采集和转移对照：每个患者样品将会携带不同量的人特异性核酸。对于所处理的每个样品，运行对照人着丝粒重复测定以验证适当的样品采集、样品提取和装置功能。4)提取对照：rna形式的非天然/合成靶标自动掺入到样品中。这被用作内部校准物，以对样品制备和扩增进行质量控制。该测试还检查化学法和装置的总体性能。针对埃博拉病毒的elisa测定在实施方式中，针对埃博拉病毒的测定可针对抗-zebovigg，并且可包括固相三步化学发光酶免疫测定。在实施方式中，用重组ebov糖蛋白抗原包被固相聚苯乙烯移液管尖端。首先通过该包被的尖端吸取患者试样。在温育和洗涤后，通过该尖端吸取碱性磷酸酶(alp)缀合的山羊抗人igg。在温育和洗涤后，通过该尖端吸取化学发光底物。该底物经历由alp造成的水解，所发射的光子由光度计模块测量，并且与样品中抗-zebovigg抗体的存在相关。在实施方式中，抗-zebovigm是固相四步化学发光酶免疫测定。用小鼠抗人igm包被固相聚苯乙烯移液管尖端。首先通过该包被的尖端吸取患者试样。在温育和洗涤后，通过该尖端吸取ebov糖蛋白抗原。在进一步温育和洗涤后，通过该尖端吸取碱性磷酸酶(alp)缀合的小鼠抗-zebovigg。在温育和洗涤后，通过该尖端吸取化学发光底物。该底物经历由alp造成的水解，所发射的光子由光度计模块测量，并且与样品中抗-zebovigm抗体的存在相关。对于elisa测定，每次运行测定时，存在与该测定同时运行的阳性对照和阴性对照。这些对照的处理方式与处理患者样品的方式完全相同(参见elisa方案)。将来自这些对照运行的输出用于实时寻找系统中的缺陷，由此帮助确保样品输出是准确的。如果所述两个对照中的任一个没有通过，则来自该测定的结果可被视为无效。埃博拉igg和igm测定的试剂列表：在如本文公开的抗体测定中使用的试剂在下表(表1)中描述和列出。表1埃博拉igg和igm测定试剂列表：试剂组成器皿体积(μl)测定稀释缓冲液1xtbs中的3％bsa2x洗涤孔100灭活剂12％乙酸(tbd)rv50中和剂6mnaoh(tbd)rv50测定洗涤缓冲液500mmnacl中的0.1％tween24xrv缀合物：igg测定与alp缀合的山羊抗人igg6xrv50缀合物：igm测定与alp缀合的山羊抗人igm6xrv50化学发光底物12xrv50阳性对照基于血清的rv50阴性对照基于血清的rv50包被的尖端：igg12x微型尖端na埃博拉抗体elisa的方案抗体elisa方案从全血样品开始，并提取血浆用于分析测试。将裂解剂添加至提取的血浆(以及残留的细胞)，以在spu中的进一步处理之前将样品中的任何埃博拉病毒灭活。以下是使用提取的灭活血浆进行的抗体测定的步骤顺序。1.拾取较大的尖端，并将18ul稀释液从洗涤器皿转移至4个圆形器皿。将该尖端弹回筒匣中。2.拾取4个微型尖端，并在每个尖端中吸取2ul样品，并将其分配至4个圆形器皿中。3.通过对流体进行往复移液来将混合物充分混合。4.与四个测定对应的4个包被的微型尖端各自吸取10ul混合物，并允许该混合物与表面上的捕获蛋白一起温育10分钟。5.将混合物丢弃至位于筒匣上的吸收废料垫上，这确保了废弃流体被保留以防止任何可能的污染。6.4个尖端吸取11ul洗涤缓冲液，随后温育1分钟，此后将洗涤缓冲液丢弃至废料垫上。7.将步骤6重复超过5次。8.4个尖端吸取10ul检测抗体，随后温育5分钟。9.将流体丢弃至吸收垫上，并重复洗涤步骤(步骤7和步骤8)。10.四个反应尖端从含有底物的密封圆形器皿吸取10ulalp底物，随后温育1分钟。11.将四个尖端移动至光度计模块，在该光度计模块处检测四个尖端中每一个的发光，并将对应的计数值传输至las。该计数值在las中分析，其中应用了校准功能，对这些值以及相关的重复、对照、校准物、qc和异常值评价进行分析，并生成最终抗体结果。电解质失衡管理的测定电解质测定原理：本文公开的电解质测定是普通化学测定的子集，其可以使用自动样品分析装置或系统来进行。本文公开的普通化学测定涵盖了常见临床化学检验，包括测量电解质诸如钠和钾、肾功能试验、肝功能试验、测量矿物质和代谢物。本文所述的钠测定和钾测定采取以下方法：通过在spu中离心而从全血分离血浆，并将血浆稀释在水或盐水中，并与一种或多种试剂混合。根据每个测定的需要，对一种或多种反应混合物进行温育。进行的反应产生吸收特定波长的光的溶液，其在检测器4上检测。该原始信号被传输至las并由las分析以生成强度谱，根据beer-lambert定律，该强度谱与相应分析物的浓度成比例。钠测定-概述：钠是体内必需的电解质和矿物质。其帮助保持身体中的流体与电解质平衡。血液中测得的钠的浓度反映了血管空间中钠的量和水的量。体内钠的量部分地由肾上腺产生的激素——醛固酮控制。体内醛固酮水平告知肾脏应当排泄多少钠以及应当在体内保留多少钠。钠还存在于大多数食物和药物中。过多的钠摄入可能使人的血压升高，并使人面临发展出心脏病/心力衰竭、中风和肾脏损伤的更大风险。低钠血症(体内低钠)非常罕见，但最常发生在服用导致排尿增加的药物的人群中。钠测定在评估酸碱平衡、水平衡、水中毒和脱水中是重要的。如上文所讨论，钠水平的评价对于呈现出埃博拉病毒感染体征和症状的患者的评价和治疗是重要的。钠测定-方法原理：在本文公开的钠比色法测定中，钠依赖性酶β-半乳糖苷酶切割底物邻硝基苯基-β-d-吡喃半乳糖，产生产物邻硝基苯酚——一种颜色强度在405/420nm的染料。该吸收由spu检测，其中原始信号被传输至las，在las中分析该原始信号以基于邻硝基苯酚形成速率生成钠的浓度。该钠测定被设计用于以约90-200mm的可报告范围检测血浆中的钠。钾测定-概述：钾是细胞内流体的主要阳离子。其为体内重要的矿物质和电解质。其为心脏、神经、肾脏、肌肉和消化系统的正常运作所必需的。钾稳态(细胞内和细胞外)的扰动可导致严重的健康影响。细胞外钾的减少的特征在于肌肉无力、易激惹和最终的麻痹。心脏影响包括心动过速、通过心电图检查而明显发现的其他心脏传导异常，以及最终的心脏骤停。低钾血症常见于呕吐、腹泻、酒精中毒和叶酸缺乏症。此外，>90％患有醛固酮症的高血压患者患有低钾血症。异常高的细胞外钾水平引起以下症状：精神错乱；四肢无力、麻木和刺痛；呼吸肌无力；四肢松弛性瘫痪；心率减慢；以及最终的外周血管塌陷和心跳骤停。高钾血症可见于终末期肾功能衰竭、溶血、创伤、艾迪生病、代谢性酸中毒、急性饥饿、脱水以及由快速输钾引起。如上所述，钾水平的评价对于呈现出埃博拉病毒感染体征和症状的患者的评价和管理是重要的。钾测定-方法原理：钾通常在体内维持在3.5至5.5mm的水平，但大多数测试方法仅读出至8mm，使测定范围非常窄。通常使用离子选择性电极或火焰光度法确定钾水平。钾测定可使用四苯基硼酸钠法来确定钾的水平。在该方法中，化合物四苯基硼酸钠与来自血浆的钾反应。k+取代来自四苯基硼酸钠(natpb)的na+，从而形成四苯基硼酸钾——一种白色沉淀物。在一些增稠剂和稳定剂的帮助下，沉淀物保持悬浮，导致浊度增加。所产生的浊度增加由spu在450nm下检测。该原始信号被传输到las，在该las中对其进行分析以生成钾的浓度。该测定的钾的可报告范围约为0.1-7.5mm。钠测定和钾测定的试剂列表在如本文公开的电解质测定(钠测定和钾测定)中使用的试剂在下表(表2)中描述和列出。表2钠测定和钾测定试剂列表：本文公开的埃博拉测定已使用上述组分验证。使用针对扎伊尔型埃博拉病毒毒株核酸的引物和探针，以及指示扎伊尔型埃博拉病毒毒株的存在和受试者对这样的病毒的免疫应答的抗原和抗体，开发出这些埃博拉测定。以非限制性示例的方式，图2b示出了可在本文中使用的spu的一个实施方式的简化视图。本文公开的埃博拉测定已使用自动样品分析装置验证，所述自动样品分析装置诸如但不限于本文以及例如下列文献中所公开的那些自动样品分析装置：美国专利第8,088,593号；美国专利第8,380,541号；美国专利第8,435,738号；美国专利第8,475,739号；美国专利第8,840,838号；2013年7月1日提交的美国专利申请第13/933,035号；2013年2月18日提交的美国专利申请第13/769,820号；2014年2月18日提交的美国专利申请第14/183,503号；以及2014年3月15日提交的美国专利申请第14/214,850号。仍参考图2b，spu可被配置成具有显示器d，该显示器d可以是触摸屏或非触摸屏显示器。显示器d可以位于spu的顶表面、前表面、倾斜的顶表面或侧表面上。如图2b中所示，可含有用于进行本文所有测试的所有试剂、稀释剂、移液管尖端和/或其他一次性用品的筒匣c配置成被接收在spu的筒匣插入位置s中。可选地，可含有用于进行本文所有测试的基本上所有试剂、稀释剂、移液管尖端和/或其他一次性用品的筒匣c配置成被接收在spu的筒匣插入位置s中。在一个实例中，筒匣c可含有可能除了处理中所使用的常见稀释剂(诸如水等)或常见试剂之外的所有试剂。可选地，筒匣c中的至少一些移液管尖端包被有诸如本文所述的埃博拉抗体(包被在尖端的内部或尖端的外部)。在一个非限制性实例中，筒匣c被配置有针对一个或多个诊断标志物的一个或多个测定，以及针对所讨论疾病的一个或多个预后标志物的测定。可选地，一些实施方式可以按类似于通风橱手套箱的方式使用围绕着spu的另外的密闭罩e，可以包括允许受保护的接近的一个或多个端口或其他装置。在一个非限制性实例中，外罩e可被配置成具有用于实现负压环境的硬件，以使污染物逸出外罩的风险最小化。可选地，一些实施方式可将spu配置成在该spu内具有负压环境。在实施方式中，密闭罩e可以包含一个或多个空气过滤器，例如，适合于阻挡污染物和微生物流动的高效空气微粒(hepa)过滤器。在实施方式中，这样的空气过滤器可在外部空气流入密闭罩的内部时对其进行过滤，或者可在内部空气离开密闭罩的内部时对其进行过滤，或者在全部两种情况下进行过滤。此类过滤器可有效减少或防止灰尘或其他污染物进入spu，以及减少或防止污染物离开spu(包括减少或防止来自样品的污染物离开外罩e)。该测定在将样品装载至筒匣中并将筒匣插入自动样品分析装置中的1小时内完成。测定结果针对埃博拉病毒(扎伊尔型埃博拉毒株)的tnaa测定的结果在图3-图8中示出。图3中所示的数据展示了扎伊尔型埃博拉tnaa测定的性能数据。这些数据是检测扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的存在的th-ezn反应的数据。图3示出了来自使用扎伊尔型埃博拉核蛋白的合成rna靶标的滴定实验的结果。y轴示出了基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间。评估阳性反应的时间截止值为45.6分钟。在这些实验中可检测到低达10个拷贝/ul(cp/ul)的合成扎伊尔型埃博拉核蛋白rna。图3标绘了按分钟计的检测时间(纵轴)与以下四种条件的每微升拷贝数(cp/ul)：1000个拷贝每微升(cp/μl)的扎伊尔型埃博拉核蛋白rna(最左侧柱条)、100cp/μl的扎伊尔型埃博拉核蛋白rna(左起第二柱条)、10cp/μl的扎伊尔型埃博拉核蛋白rna(右起第二柱条)，以及不存在扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的“ntc”(无模板对照)(最右侧柱条)。如图3中所示，对于具有1000cp/μl扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的样品，可在少于30分钟内检测到埃博拉rna的存在；对于具有100cp/μl扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的样品，可在略微超过30分钟内检测到埃博拉rna；即使在仅具有10cp/μl扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的样品中，也可在少于40分钟内检测到埃博拉rna。比较而言，在超过约70分钟的时间内未检测到来自不具有扎伊尔型埃博拉核蛋白rna的样品的(非特异性)信号，因此其可以清楚地与指示埃博拉rna存在的临床显著信号相区分。图4中所示的数据展示了扎伊尔型埃博拉核蛋白tnaa测定在存在可能交叉反应的物质时的性能。没有观察到假阳性反应，因为所有可能交叉反应的病原体的检测时间都显著长于截止时间(45.6分钟)。100cp/μl的扎伊尔型埃博拉rna的检测时间显著低于该截止时间，从而表明样品中靶标病毒核酸的阳性检测。在所示的测定中没有观察到th-ezn反应与其他病原体的交叉反应性。在图4中，像图3中那样，y轴示出了基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间。因此，纵轴标绘了基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间(按分钟计)。柱条高度指示直到识别出所测量的荧光信号中的拐点之前的时间(按分钟计)；每个柱条均标记有为检测而呈现的病原体核酸的名称。标记有“扎伊尔型埃博拉100cp/ul”的柱条为阳性对照。无模板对照被标记为“ntc”(未添加rna靶标)。所测试的天然或合成病原体核酸包括来自几种形式的人免疫缺陷病毒(hiv)、单纯疱疹病毒1(hsv-1)、腺病毒sc、巨细胞病毒(cmv)、eb病毒(ebv)、白色假丝酵母、人乳头瘤病毒(hpv)、单纯疱疹病毒(hsv)、乙肝病毒(hbv)以及其他病原体的核酸。评估阳性反应的截止值为45.6分钟；只有扎伊尔型埃博拉检测的信号低于截止值，表明阳性反应。值得注意的是，对于除了扎伊尔型埃博拉之外的所有病原体rna靶标，柱条高度与ntc柱条高度相似，表明没有可检测到的交叉反应性。如图5中所示，通过除了阳性对照合成模板之外向样品添加所列出的病原体，测试了th-ezn反应的特异性。未观察到假阴性反应。阳性对照被标记为“扎伊尔型埃博拉100/cp/ul”。无模板对照被标记为“ntc”。y轴示出了基于在tnaa扩增反应期间实时记录的荧光信号的检测时间。评估阳性反应的截止值为45.6分钟。图5中所示的数据展示了扎伊尔型埃博拉核蛋白tnaa测定在存在可能干扰的物质时的特异性。th-ezn测定的特异性相当好，因为如图所示，检测时间受其他病原体的存在的影响不大。图5中所示实验中使用了与图4中所示实验中测试的相同的可能干扰的病原体(各种形式的人免疫缺陷病毒(hiv)、单纯疱疹病毒1(hsv-1)、腺病毒sc、巨细胞病毒(cmv)、epstein-barr病毒(ebv)、白色假丝酵母、人乳头瘤病毒(hpv)、单纯疱疹病毒(hsv)、乙肝病毒(hbv))。图6中所示的表格进一步图示了所进行的实验，其展示了扎伊尔型埃博拉核蛋白tnaa测定在存在可能干扰的物质时的特异性。以两种方式测试了干扰物质对th-ezn反应的影响。首先，除了阳性对照合成模板之外，也将干扰物质添加至样品，以查看该物质是否干扰反应。第二，在没有任何模板(ntc)的情况下将干扰物质添加至样品，以评估是否发生非特异性反应。每种物质在两个水平(1x浓度和0.1x浓度)下进行测试。如图6中所示，可能干扰的物质全都没有阻止对合成扎伊尔型埃博拉核酸的检测(标记为“抑制真阳性”的柱条)。如图6中所示，只有一种可能干扰的物质导致了假阳性，并且仅在较高的浓度下才导致假阳性(5g/l浓度的血红蛋白)。因此，扎伊尔型埃博拉tnaa测定是相当稳健的。用于检测样品中抗埃博拉病毒igg和igm抗体的存在的扎伊尔型埃博拉elisa测定(zebovigg和zebovigm测定，其中zebov代表扎伊尔型埃博拉病毒)，连同用于检测样品中gp抗原的存在的扎伊尔型埃博拉elisa测定(zebovgp抗原测定)，适用于定性检测针对埃博拉病毒的igg和igm抗体以及定量测量zebovgp抗原——全都来自edta抗凝血浆(从全血试样提取)。edta抗凝全血或血浆可以例如通过手指针刺获得，或者可以通过抽取血液样品的其他方法获得。这些测定还可对血清样品进行，该血清样品可以例如通过静脉穿刺获得。例如，所有此类样品都可以从受影响地区内具有埃博拉病毒感染的体征和症状的个体获得。图7a和8a示出了扎伊尔型埃博拉elisa测定的结果。所示数据提供了扎伊尔型埃博拉elisaigg和igm测定的性能数据，并展示了样品中靶标的检测。图7a提供了内部(阴性)edta抗凝血浆样品与高浓度掺加的样品的比较。图7a中的所有样品都掺有人抗-zebovigg达1ug/ml的标称浓度。图8a提供了内部(阴性)edta抗凝血浆样品与低浓度掺加的样品的比较。图8a中的所有样品都掺有人抗-zebovigm达0.3ug/ml的标称浓度。如上文所讨论，igg测定和igm测定(elisa测定)可在肝素抗凝血浆样品或edta抗凝血液样品(例如，全血或血浆)中进行；这样的样品可通过手指针刺以全血的形式采集，并继而将edta或肝素施加至全血或血浆。对于定性测定(扎伊尔型埃博拉elisaigg和igm测定)，测定输出是抗体指数或抗体滴度，其与抗体滴度直接相关(但可能在量上不相同)。抗体指数是连续的，而不是离散/分类的测定最终输出。对于作为定量测定的zebovgp抗原测定，测量间隔将跨越2500-25ng/ml的gp抗原。抗-zebovigg测定：图7b示出了如通过将0.05-500ug/ml浓度范围内的人抗-zebovigg克隆掺入合并的正常血清样品而展示的剂量响应。还测试了来自n＝40的内部正常供体的edta血浆样品。图7b比较了来自阴性样品和经掺加的样品的测定结果；该图示出了来自用内部(阴性)edta抗凝血浆样品(方块)和经掺加的样品运行的测定的信号。所有样品都掺有人抗-zebovigg。设置在信号1.8的推定截止值对应于0.5ug/ml的灵敏度。该抗-zebovigg测定中所使用的抗原显示出对针对糖蛋白以及zebov的其他蛋白质的抗体的反应性。还观察到与苏丹ebovigg的轻度交叉反应性。交叉反应性数据在图7c中所示的表格中总结。如上所述，图8a将来自(阴性)edta抗凝血浆样品的zebovigmelisa测定结果与来自低浓度掺加的样品的结果进行了比较。图8b还比较了来自阴性样品和经掺加的样品的测定结果，示出了来自抗-zebovigm测定的结果；该图示出了来自用内部(阴性)edta抗凝血浆样品(方块)和经掺加的样品运行的测定的信号。图8b中所示的剂量响应通过将1至10ug/ml浓度范围内的人抗-zebovigm对照掺入合并的正常血清样品而展示。还测试了来自12个正常供体的edta血浆样品。推定截止值设置在信号1.5处。所有样品都掺有人抗-zebovigm。图9a示出了用掺有重组zebovgp抗原的合并正常血清校准物进行的测定的剂量响应结果。以2.5μg/ml至25ng/ml范围内的浓度将重组zebovgp抗原掺入合并的正常供体血清中。图9a示出了该测定的剂量响应曲线。该测定中使用的抗体对针对zebovgp抗原具有非常强的特异性，并且不与来自马尔堡属病毒的gp抗原交叉反应。也没有观察到与来自其他种的埃博拉病毒的gp抗原的交叉反应性，以及针对zebov基因组中的其他病毒蛋白的交叉反应性。该交叉反应性数据在图9b中所示的表格中总结。解释测定结果的方法在对患者结果进行解释之前，应当检查所有测试对照。如果对照无效，则不能可靠地解释患者结果。应当在已经检查并且确定阳性对照和阴性对照有效和可接受之后进行临床试样测试结果的评估。测定结果可以与扎伊尔型埃博拉tnaa测定阳性对照和阴性对照进行比较，并且可以报告为扎伊尔型埃博拉阳性、居间的(equivocal)或阴性。核酸测定结果的解释：对于阳性埃博拉测试结果，th-ezn反应和th-ezg反应都应当为阳性。如果这些反应中只有一个为阳性，则该结果为非结论性的，并且需要重新测试。对于阴性埃博拉测试结果，th-ezn反应和th-ezg反应都应当为阴性。为了使测试运行有效，所有ntc反应必须为阴性。如果一个或多个ntc不是阴性，则整个运行是无效的，并且应当识别并纠正可能的污染源，并重新测试试样。对于任何所述测定(th-ezn-ptc和th-ezg-ptc)，未能实现阳性ptc反应会使运行无效。th-rna-sic测定和th-hcr测定应当都为阳性。所有运行都应表现出阳性th-rna-sic测定。阴性th-rna-sic测定可表明rna提取不当、rna回收率低、反应不当、试剂或装备故障，或者扩增抑制。所有临床试样都应当表现出阳性hcr反应，从而表明从试样充分回收了可接受质量的rna。阴性th-hcr反应可表明rna提取不当、rna回收率低、反应不当、试剂或装备故障、扩增抑制，或者试样中的人细胞材料不足以支持检测。在实施方式中，本文公开的扎伊尔型埃博拉测定的阳性结果应当推翻该临床试样的失败的(阴性或不确定)th-rna-sic测定或th-hcr测定结果。在实施方式中，伴随有阴性或不确定目标结果的失败的th-rna-sic测定或th-hcr测定反应需要重新测试。下表提供了核酸测定结果及其解释的概述。抗体测定结果的解释：针对抗埃博拉抗体的测定(elisa测定)的结果的解释在下文中讨论。阴性的抗-zebovigg结果表明没有近期或既往埃博拉感染的证据。结果必须在临床表现的背景下进行解释。阴性的抗-zebovigg结果不排除其他病因。阳性的抗-zebovigg结果表明近期或慢性埃博拉感染。结果必须在临床表现的背景下进行解释。阳性的抗-zebovigg结果不排除合并感染或其他病因。居间的抗-zebovigg结果不能确定埃博拉状态。如果症状持续，则指示在1-2周后对受试者进行重新测试。阴性的抗-zebovigm结果表明没有急性埃博拉感染的证据。结果必须在临床表现的背景下进行解释。阴性的抗-zebovigm结果不排除其他病因。阳性的抗-zebovigm结果表明急性埃博拉感染。结果必须在临床表现的背景下进行解释。阳性的抗-zebovigm结果不排除合并感染或其他病因。居间的抗-zebovigm结果无法确定埃博拉状态。如果症状持续，则指示在1-2周后对受试者进行重新测试。对照：每个测定(埃博拉igg和埃博拉igm)均与阳性对照和阴性对照一起运行。如果任何对照没有通过，则来自该运行的结果可被视为无效。高于测定的定量下限(lloq)的zebovgp抗原测定结果表明急性埃博拉感染。结果必须在临床表现的背景下进行解释，例如，急性埃博拉感染的指示也不排除合并感染或其他病因。低于测定的定量下限(lloq)的zebovgp抗原测定结果表明没有急性埃博拉感染的证据。结果必须在临床表现的背景下进行解释，例如，这样的结果不排除其他病因。对照：每个zebovgp抗原测定均可与阳性对照和阴性对照一起运行。如果任何对照没有通过，则来自该运行的结果可被视为无效。电解质测定结果的解释：针对钠和针对钾的测定的结果的解释在下文中讨论。钠结果和钾结果应当基于常规临床实践来解释，并且帮助指导医护提供者施用包括口服和/或静脉内(iv)流体在内的支持性医护，以保持流体和电解质。对照：每个测定(钠和钾)均与低水平对照和高水平对照一起运行。如果任何对照没有通过，则来自该运行的结果应被视为无效。从怀疑患有传染病诸如埃博拉(例如，扎伊尔型埃博拉毒株)的受试者获得的样品中钠水平的测量对于提供和管理对该受试者的治疗是有用的。从怀疑患有传染病诸如埃博拉(例如，扎伊尔型埃博拉毒株)的受试者获得的样品中钾水平的测量对于提供和管理对该受试者的治疗是有用的。电解质诸如钠和钾的测量对于提供和管理对患有出血性疾病(诸如埃博拉)或导致体液损失的其他疾病(例如，霍乱)的受试者的治疗可能特别有用。实施例2埃博拉病毒的核酸序列包括，例如，扎伊尔型埃博拉核蛋白核酸序列——ncbigenbankaf272001扎伊尔型埃博拉(mayinga株)核蛋白(seqidno:1)。seqidno:1的核酸序列，以及本文提供的其他核酸序列被写成dna序列(即，其中rna具有尿嘧啶(u)，dna具有胸腺嘧啶(t))。编码埃博拉病毒蛋白的核酸序列包括，例如，扎伊尔型埃博拉核蛋白(ncbigenbankj04337.1扎伊尔型埃博拉(mayinga株)(seqidno:2)，并且包括，例如，编码博拉病毒糖蛋白的核酸序列(ncbigenbanku23187.1扎伊尔型埃博拉(mayinga株)(seqidno:3))。埃博拉病毒蛋白的氨基酸序列包括由上述扎伊尔型埃博拉核蛋白编码的核蛋白氨基酸序列，其具有记载于ncbigenbankj04337.1扎伊尔型埃博拉(mayinga株)中的氨基酸序列(seqidno:4)。例如，另外的埃博拉病毒核蛋白氨基酸序列为扎伊尔型埃博拉核蛋白氨基酸序列——uniprot登录号p18272(p18272.2版，gi6136281)(seqidno:5)。埃博拉病毒蛋白的氨基酸序列包括，例如，由上文提及的核酸序列编码的糖蛋白序列，其具有记载于ncbigenbanku23187.1扎伊尔型埃博拉(mayinga株)的氨基酸序列(seqidno:6)。其他埃博拉病毒核酸序列(可从其确定埃博拉病毒蛋白的氨基酸序列)例如记载于由国家生物技术信息中心(ncbi)(主页url：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)列出的针对扎伊尔型埃博拉病毒的生物计划(扎伊尔型埃博拉病毒基因组测序)登录号prjna257197，id号257197，所有上述序列都通过引用而全文并入于此。其中列出的氨基酸序列、由这些核酸序列编码的氨基酸，以及包括c-末端部分在内的其各个部分可以是抗原性的，从而当其存在于感染个体中时，以及当其在人工(例如，基于实验室的)方法中提供给实验动物或生物体用于产生抗体时，产生抗埃博拉抗体。例如，埃博拉病毒抗原的抗体在virusresearch176(0):83-90(2013)中讨论，其通过引用而全文并入于此。虽然已参考测定、方法、试剂盒、装置和系统的某些特定实施方式对所述的测定、方法、试剂盒、装置和系统作出了描述和说明，但本领域技术人员将会理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行程序和方案的各种适应、改变、修改、替换、删除或添加。作为示例而非限制，虽然许多实施方式是在使用tnaa的上下文中描述的，但应当理解，本文的系统、方法、装置和/或试剂盒的一些其他实施方式可以使用目前已知的其他类型的核酸扩增(等温扩增和/或热循环扩增)或者可在未来开发出的其他类型的核酸检测方法。还应理解，虽然本文的许多实施方式是关于扎伊尔型埃博拉病毒描述的，但本文的实施方式可应用于目前已知的其他毒株(sudan、reston、taiforest或bundibugyo)或者未来可能发现的其他毒株。还应理解，本文分析的许多样品为血液样品(毛细血管血液样品、静脉血液样品、动脉血液样品等)，但一些实施方式还可被配置用于处理来自口腔拭子的样品，或者处理可通过诸如活检等技术获得的组织样品(脾、肝、皮肤切块)。还应理解，本文的实施方式可涉及分析具有edta的样品和/或具有肝素的样品(来自同一受试者)。待运输以供处理的样品可储存在约4℃下，可选地在约2℃至约6℃的范围内。实施例3zebovgp抗原测定的分析灵敏度扎伊尔型埃博拉病毒(zebov)gp抗原测定是对扎伊尔型埃博拉病毒糖蛋白具有高度特异性的抗原捕获elisa。该测定使用低样品体积并且被设计用于自动化分析zebovgp抗原检测。在扎伊尔型埃博拉病毒(zebov)gp抗原测定的表面上包被的试剂是对ebovgp具有反应性的蛋白a-纯化的小鼠单克隆抗体(克隆4f3)。该抗体检测病毒样颗粒(vlp)中的gp和不具有跨膜区的重组gp(rgpdtm)。其为igg2a同种型的单克隆抗体。该抗体不显示出与sudan病毒(sudv)或马尔堡病毒(marv)vlp或marvrgpdtm的交叉反应性。在扎伊尔型埃博拉病毒(zebov)gp抗原测定中用作检测抗体的抗体是来源于ebov感染后存活的人类恢复期患者的蛋白a纯化的中和人单克隆抗体(kz52)。kz52针对ebovgp。该抗体检测在哺乳动物和昆虫细胞中均表达的不具有跨膜区的重组ebovgp(ebovrgpdtm)。其为igg1同种型的人类可变区、人类恒定区。该抗体不显示出对马尔堡病毒(marv)gp的交叉反应性。扎伊尔型埃博拉病毒(zebov)gp抗原测定对于包膜结合gp和具有截短的跨膜域的重组昆虫细胞表达gp极具特异性，并且不显示出对释放到ebov感染细胞的培养基中的可溶性gp形式的交叉反应性。这是由于在测定中用作检测抗体的kz52抗体与全长gp排他性地结合，原因在于已知该表位包含存在于gp1和gp2亚基中的氨基酸。空白限(limitofblank，lob)：截断值被确立为空白限处的rlu值。将毛细血管样品从内部受试者采集于theranosnanotainertm管中。将nanotainertm管装载于zebovgp抗原现场位置筒匣上，并直接在spu上处理。由经zebovgp抗原测定而分析的25种不同zebovgp阴性毛细血管样品测量rlu值。来自该数据组的最大rlu值为9.93。将该值向上舍入以将截断值设置在10rlu。换句话说，任何大于10rlu的样品都将会产生大于1.0的截断指数(cut-offindex，coi)，并将会被分类为居间的或阳性的。下面考虑了居间区及其背后的理由。检测限(limitofdetection，lod)：从cdc获得的灭活病毒分离物用于确定lod。该γ-辐射的病毒原液通过cdc由来自扎伊尔型埃博拉病毒mayinga1976株的病毒上清液来制备。该灭活病毒原液被报告为2.5x108tcid50/ml。将k2-edta抗凝静脉全血等分入theranosnanotainertm管。将不同浓度的滴定的病毒原液掺入nanotainertm管中。将nanotainertm管装载在zebovgp抗原现场位置筒匣上，并直接在spu上处理。结果列于表n-2中。表n-2提供了zebovgp抗原测定对系列稀释的灭活病毒分离物(来自cdc)的反应的总结。表n-2最低病毒滴度的最低coi为1.5，非常接近于1。基于这些数据，暂定lod为6.25x106tcid50/ml。为了比较该lod与文献中记载的核酸扩增测定和其他elisa测定的lod，可以考虑towner等人(journalofvirology,apr.2004,p.4330–4341)。towner等人研究了2000-2001年在乌干达爆发埃博拉期间从有症状的患者获得的连续样品。在towner等人的研究中，作者使用噬斑测定(pfu/ml)、q-rt-pcr测定(拷贝/ml)和elisa(odsum)分析了血清样品的子集。比较针对相同样品测得的rna拷贝数和odsum(为了作者的测定而转换为coi)，获得了以下关系式(参见表n-3)：coielisa＝0.0012(rna拷贝/ml)0.44该关系式意味着elisa测定的lod(coielisa＝1)对应于4.45×106个拷贝rna/ml。假设该病毒的1个拷贝rna/ml＝1tcid50/ml，申请人估算towner等人的elisa测定的lod为4.45×106tcid50/ml。该数目与以上使用γ-辐射灭活的埃博拉病毒确定的本发明zebovgp抗原测定的暂定lod的量级相同：1coi≡6.25x106个拷贝rna/ml，且1coi≡2.1x103pfu/ml。表n-3呈现了通过来自towner等人的不同方法对ebov临床样品的测量的总结。该elisa测定的截断值被设置为odsum＝0.45(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc374287/pdf/1940.pdf)。表n-3样品idpfurnalog10(rna)odsumcoi14695.00e+012.00e+055.30.110.2415221.50e+041.80e+077.30.821.8215274.30e+054.00e+088.63.547.8715911.60e+063.30e+099.57.3816.416125.30e+052.50e+088.47.4616.60lod的证实：通过分析其他20个重复而证实了lod为6.25x106tcid50/ml。将毛细血管样品从内部受试者采集于nanotainertm管中。将这些样品与病毒分离物掺杂以在名义上具有lod下的病毒浓度。将nanotainertm管装载在zebovgp抗原现场位置筒匣上，并直接在spu上处理。经zebovgp抗原测定分析从25个zebovgp阴性样品、空白与lod之间的6个样品以及lod下掺加的23个样品获得的结果。二十二(22)个样品被测试为阳性，即，高于截断值。一个样品在居间区(以下讨论)。由此验证了lod为6.25x106tcid50/ml。居间区：在空白(截断值)的上限与lod重复的下限之间的区域中，信号对于作为真空白而言过高，但对于判定为确定的阳性而言过低。该区域被指定为居间区。具有空白与lod之间的抗原水平的样品将会大多位于该区内。实施例4zebovgp抗原测定的分析特异性反应性：评价了埃博拉病毒及相关科的其他分离物/重组抗原的zebovgp抗原测定的反应性。如表n-4所示，zebovgp抗原测定没有显示出对可溶性sgp抗原的反应性。扎伊尔型埃博拉病毒(zebov)gp抗原测定对包膜结合的gp以及重组昆虫细胞表达的具有截短跨膜域的gp具有高度特异性。这是因为用作该测定中的检测抗体的kz52抗体与全长gp排他性地结合，并且已知表位包含存在于gp1和gp2亚基中的氨基酸。sgp中不存在该表位。表n-4呈现了如本文公开的zebovgp抗原测定的反应性信息。表n-4交叉反应性：为了鉴定可能预期存在于来自西非旅旅行者的血液样品中的微生物，进行了文献综述。infectiousdiseases:ageographicguide编：eskildpetersen、linh.chen、patriciaschlagenhauf，wiley被认定为有用的信息来源。该综述汇集了西非常见传染病的总结；该总结包括以下内容。来自西非的旅行者(包括西方游客/商人，居住在工业化国家但返回其原籍国访问亲友的非洲人，以及非洲裔移民)通常存在三种状况：发热、胃肠病和皮肤病问题。在下文中讨论了据观察导致这些状况的微生物。发热：约3-11％的旅行者报告了发热的发生，其中多达50％的旅行者在返回后首周内出现发热，96％的旅行者在6个月内出现发热。发热被进一步分类为未分化和分化的发热。未分化的发热包括疟疾、恶性疟原虫(p.falciparum)以及更罕见的卵形疟原虫(p.ovale)或间日疟原虫(p.vivax)。病毒性出血热(vhf)也是罕见的，其可由马尔堡病毒、埃博拉病毒和拉沙病毒导致。分化的发热包括伴有皮疹的发热，诸如麻疹、风疹、脑膜炎奈瑟球菌(neisseriameningitidis)、立克次体(罕见)、登革热、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒(偶见)、巨细胞病毒、弓形虫、血吸虫病、hiv以及苍白密螺旋体。伴有呼吸道症状的发热包括肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、流感嗜血杆菌(haemophiliusinfluenzae)、a族链球菌(streptococuus)、流感病毒、肺结核、蛔虫(ascaris)、类圆线虫(strongyloides)、钩虫。伴有胃肠道症状的发热包括肠热病。伴有黄疸的发热包括急性肝炎(甲型、乙型、戊型)、钩端螺旋体病、志贺氏菌。伴有神经症状的发热包括脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、b型流感嗜血杆菌、肠道病毒、疱疹病毒。胃肠道病症包括大肠杆菌(e.coli)、沙门氏菌属的种(salmonellaspp.)、志贺氏菌属的种(shigellaspp.)、弯曲杆菌(campylobacter)、轮状病毒和诺如病毒、兰伯贾第虫、隐孢子虫属的种(cryptosporidiumspp)。皮肤状况包括丝虫病、麦地那龙线虫、曼森线虫病、溃疡分枝杆菌。进一步考察这些状况，以评价在感染期间观察到血液样品中致病微生物的可能性。以下生物体被鉴定为不太可能是出现在受试者血流中的候选物：麻疹病毒、风疹病毒、血吸虫、苍白密螺旋体、流感病毒、钩虫、钩端螺旋体、肺炎链球菌、b型流感嗜血杆菌、肠道病毒、大肠杆菌、沙门氏菌、弯曲杆菌、轮状病毒、诺如病毒、兰伯贾第虫、丝虫、曼森线虫。其他交叉反应物更可能存在于受试者的血流中。受限于商业来源的可用性和培养bsl3/3+/4微生物中的一些微生物的能力的缺乏，选择表n-5中列出的生物体/蛋白质进行测试。对于交叉反应性测试，使用滴度已知的内部培养物或商用培养物。所有病毒都以超过106tcid50/ml的浓度或可用原液允许的最大可能浓度掺入。所有细菌都以超过106cfu/ml的浓度或可用原液允许的最大可能浓度掺入。掺入后，将nanotainertm管装载于zebovgp抗原现场位置筒匣上，并直接在spu上进行处理。结果总结在以下表n-5中，其提供了对关于zebovgp抗原测定的交叉反应性研究的总结。表n-5干扰物质：评价了潜在干扰物质对zebovgp抗原测定的影响。进行该评价以证明潜在干扰物不会在已知阴性试样中生成假阳性结果，并且不会在已知阳性试样中导致假阴性结果。从内部受试者采集k2-edta抗凝静脉样品。这些样品掺有由fda在最新指导中推荐的浓度的干扰物。继而将这些样品等分至6个nanotainertm管中。其中，三个nanotainertm管装载于zebovgp抗原现场位置筒匣上，并直接在spu上进行处理。其余的3个nanotainertm掺有病毒分离物，以在名义上具有处于lod的病毒浓度。nanotainertm管中的所有样品都直接在spu上进行处理。结果总结在表n-6中(其呈现了zebovgp抗原测定对掺有干扰物质的已知阴性样品的响应的总结)和表n-7中(其呈现了zebovgp抗原测定对掺有干扰物质的已知阳性样品(在1xlod下)的响应的总结)。表n-6潜在干扰物质浓度结果(检测到x/3)血红蛋白20g/dl0/3胆红素25mg/dl0/3intralipids1500mg/dl0/3血清蛋白5g/dl0/3hama(人抗小鼠抗体)800ng/ml0/3类风湿因子2000iu/ml2/3类风湿因子1000iu/ml3/3类风湿因子500iu/ml3/3类风湿因子250iu/ml0/3类风湿因子125iu/ml0/3在较高水平(≥500iu/ml)下观察到来自类风湿因子的干扰，其导致观察到的信号的增大以及样品误分类为阳性。因此，对于具有非常高水平的类风湿因子的受试者，可能观察到假阳性。根据在丹麦进行的一项大型研究(bmj2012；345:e5244)，250iu/ml处于普通人群的99.4百分位处，以及患有类风湿性关节炎、舍格伦综合征和狼疮的0.5-2％普通人群的>95百分位处。因此，在普通人群的0.025％-0.1％中存在假阳性的风险。表n-7高剂量钩状效应：来自表n-2中总结的病毒分离物的滴定的数据未显示出高剂量钩状效应。由于病毒分离物中的病毒抗原浓度不能升高超过净值的事实，申请人还使用了重组抗原掺加来验证不存在高剂量钩状效应。应当注意，zebovgp抗原测定采用样品和ap缀合的检测抗体的连续温育，之间进行洗涤。因此，高剂量钩状效应的存在是非常不可能的。数据总结在以下表8-n中，其呈现了针对zebovgp抗原测定分析的高剂量样品的浓度和coi测量值的总结。表n-8重组gp的浓度，umcoi结果10.24215pos25.6460pos64672pos160901pos4001579pos10002161pos25002270pos模拟临床研究：为了确立zebovgp抗原测定的性能特征，进行了模拟临床研究。在该研究中分析了来自100名个体受试者的样品。将100个样品分为两组：三个操作者分析了50个未掺加的样品。二十五个样品掺有处于lod的病毒分离物，并继而以一式三份的方式进行分析。其余二十五个样品掺加(4/3)x、2x和4xlod的病毒分离物(各约8个)，并继而以一式三份的方式进行分析(参见表n-9)。由于净病毒分离物的浓度仅为40xlod，因此高于4xlod的任何掺加浓度都将会导致全血基质的过度稀释。三个操作者以盲法的方式处理样品用于该模拟临床研究。该研究的结果以与预期结果的一致性百分比呈现。表n-9呈现了用于设计经掺加的样品以供模拟临床研究的浓度的总结。表n-9最终掺加浓度x106tcid50/mlxlod受试者数目00506.251258.334/3912.5282548合计100研究方案：a)从每个内部受试者采集毛细血管样品于3个nanotainertm管中。将来自发热患者的静脉样品等分至三个nanotainertm管中。b)单独地制备4个掺加储备物，使得向nanotainertm管中掺入7ul储备物将会产生0、1xlod、4/3xlod、2xlod和4xlod的最终浓度。掺加储备物被分别编为1至4号。c)向每个操作者提供每名患者的一个nanotainertm管。为每个操作者提供标记有掺加溶液的编号的筒匣。d)操作者将nanotainertm管加入生物安全柜内，将nanotainertm管插入zebovgp抗原现场位置筒匣中，并直接在spu上处理样品。e)以盲法的方式，由分析人员中的其他成员分析结果，并继而将其与关键字相匹配。数据分析：a)对于每个测量，应用以下规则来得出最终结果：i.如果coi≤1.0，则结果为阴性ii.如果coi>1.0且coi≤1.6，则结果为居间的iii.如果coi>1.6，则结果为阳性b)对于每名受试者，有三个测量值可用。如果即使这些重复中的一个是不一致的，则该受试者作为整体被认为是不一致的。c)将每名受试者的结果与预期值进行比较，并计算阴性和阳性一致性百分比，以及确切的95％置信区间。在所分析的100个样品中，15个样品来自发热患者。其中，5个样品作为阴性运行，10个样品作为经掺加的阳性运行。对于以lod掺加的一名受试者，一次重复被测试为居间的，而另两次重复被测试为阳性。该受试者被认为是不一致的。其他受试者均是100％一致的。一致性百分比在以下表n-10中总结，其呈现了模拟临床研究中zebovgp抗原测定的性能的总结。表n-10此外，浓度、量和其他数值数据可在本文中以范围格式呈现。应当理解，这样的范围格式仅仅是为了方便和简洁而使用的，并且应当被灵活地解释为不仅包括被明确表述为范围界限的数值，而且还包括被包含于该范围内的所有单个数值或子范围，犹如明确表述了每个数值和子范围。例如，约1nm至约200nm的尺寸范围应当解释为不仅包括明确表述的约1nm和约200nm的界限，而且还包括单个尺寸诸如2nm、3nm、4nm，以及子范围诸如10nm至50nm、20nm至100nm，以及其他子范围。本文所讨论或引用的出版物只是由于它们在本申请的申请日之前公开而提供的。本文中的任何事项均不应解释为承认本发明无权凭借在先发明而先于这样的出版物。此外，所提供的公开日期可能不同于实际公开日期，实际公开日期可能需要独立确认。本文提到的所有出版物均通过引用而并入于此，以便公开和描述与引用的出版物相关联的结构和/或方法。例如，提交于2014年10月8日的美国临时申请序列号62/061,671通过引用而全文并入于此以用于所有目的。虽然本文已经示出和描述了本发明的优选实施方式，但对于本领域技术人员显而易见的是，这样的实施方式只是以示例的方式提供的。本领域技术人员现将在不偏离本发明的情况下想到许多更改、改变和替代。应当理解，在实践本发明的过程中可以采用对本文所描述的本发明实施方式的各种替代方案。任何特征(无论是否优选)均可与任何其他特征(无论是否优选)相结合。所附权利要求书不应解释为包括“装置+功能”限定，除非在给定权利要求中使用短语“用于……的装置”明确阐述了这样的限定。应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在本文说明书和随后的整个权利要求书中使用的“一个”、“一种”和“该”的含义包括复数的提及物。例如，提到“一个测定”可以指单个测定或多个测定。另外，除非上下文另有明确规定，否则在本文的说明书和随后的整个权利要求书中使用的“在……中”的含义包括“在……中”和“在……上”。最后，除非上下文另有明确规定，否则在本文的说明书和随后的整个权利要求书中使用的“或”的含义包括连接性和转折性的含义。因此，除非上下文另有明确规定，否则术语“或”包括“和/或”。本文档包含受到版权保护的材料。版权拥有人(在此为申请人)对于本专利文件和公开内容在美国专利商标局专利文件或记录中出现时的摹本复制不持异议，但除此之外在任何情况下均保留所有版权。以下声明应当适用：copyright2014-15theranos,inc.。序列表<110>赛拉诺斯股份有限公司(theranos,inc.)<120>用于埃博拉和其他传染病的实时诊断测试（rdt）的方法和装置<130>3042.601<140><141><150>62/094,856<151>2014-12-19<150>62/094,848<151>2014-12-19<150>62/077,016<151>2014-11-07<150>62/077,011<151>2014-11-07<150>62/062,808<151>2014-10-10<150>62/061,671<151>2014-10-08<160>6<170>patentinversion3.5<210>1<211>18959<212>dna<213>扎伊尔型埃博拉病毒(zaireebolavirus)<400>1cggacacacaaaaagaaagaagaatttttaggatcttttgtgtgcgaataactatgagga60agattaataattttcctctcattgaaatttatatcggaatttaaattgaaattgttactg120taatcacacctggtttgtttcagagccacatcacaaagatagagaacaacctaggtctcc180gaagggagcaagggcatcagtgtgctcagttgaaaatcccttgtcaacacctaggtctta240tcacatcacaagttccacctcagactctgcagggtgatccaacaaccttaatagaaacat300tattgttaaaggacagcattagttcacagtcaaacaagcaagattgagaattaaccttgg360ttttgaacttgaacacttaggggattgaagattcaacaaccctaaagcttggggtaaaac420attggaaatagttaaaagacaaattgctcggaatcacaaaattccgagtatggattctcg480tcctcagaaaatctggatggcgccgagtctcactgaatctgacatggattaccacaagat540cttgacagcaggtctgtccgttcaacaggggattgttcggcaaagagtcatcccagtgta600tcaagtaaacaatcttgaagaaatttgccaacttatcatacaggcctttgaagcaggtgt660tgattttcaagagagtgcggacagtttccttctcatgctttgtcttcatcatgcgtacca720gggagattacaaacttttcttggaaagtggcgcagtcaagtatttggaagggcacgggtt780ccgttttgaagtcaagaagcgtgatggagtgaagcgccttgaggaattgctgccagcagt840atctagtggaaaaaacattaagagaacacttgctgccatgccggaagaggagacaactga900agctaatgccggtcagtttctctcctttgcaagtctattccttccgaaattggtagtagg960agaaaaggcttgccttgagaaggttcaaaggcaaattcaagtacatgcagagcaaggact1020gatacaatatccaacagcttggcaatcagtaggacacatgatggtgattttccgtttgat1080gcgaacaaattttctgatcaaatttctcctaatacaccaagggatgcacatggttgccgg1140gcatgatgccaacgatgctgtgatttcaaattcagtggctcaagctcgtttttcaggctt1200attgattgtcaaaacagtacttgatcatatcctacaaaagacagaacgaggagttcgtct1260ccatcctcttgcaaggaccgccaaggtaaaaaatgaggtgaactcctttaaggctgcact1320cagctccctggccaagcatggagagtatgctcctttcgcccgacttttgaacctttctgg1380agtaaataatcttgagcatggtcttttccctcaactatcggcaattgcactcggagtcgc1440cacagcacacgggagtaccctcgcaggagtaaatgttggagaacagtatcaacaactcag1500agaggctgccactgaggctgagaagcaactccaacaatatgcagagtctcgcgaacttga1560ccatcttggacttgatgatcaggaaaagaaaattcttatgaacttccatcagaaaaagaa1620cgaaatcagcttccagcaaacaaacgctatggtaactctaagaaaagagcgcctggccaa1680gctgacagaagctatcactgctgcgtcactgcccaaaacaagtggacattacgatgatga1740tgacgacattccctttccaggacccatcaatgatgacgacaatcctggccatcaagatga1800tgatccgactgactcacaggatacgaccattcccgatgtggtggttgatcctgatgatgg1860aagctacggcgaataccagagttactcggaaaacggcatgaatgcaccagatgacttggt1920cctattcgatctagacgaggacgacgaggacactaagccagtgcctaatagatcgaccaa1980ggg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