技术领域本发明涉及液态乳检测的样品处理方法，尤其涉及一种液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法。
背景技术：
牛奶已经成为人类每天生活的必需品，营养价值很高。牛奶中的矿物质种类也非常丰富，除了我们所熟知的钙外，磷、铁、锌、铜、锰、钼的含量很高。但奶牛生长过程及产奶期常服用饲料、牧草，且饲料种植过程中受到农药的污染，由生乳进入乳制品。大量使用农药尤其是广泛使用的丁草胺和氟虫腈，对生态环境和人类身体健康产生了极大的危害。
技术实现要素：
本发明对于上述现有技术的不足，提供了一种液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法。本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.1～0.5gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.1～0.5mol/L高氯酸调节pH至5～7，并将溶液混合均匀，然后20℃离心，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入50～80μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和800～1200μL乙腈，混合均匀，然后20℃离心，取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的3～6倍，膜过滤后得样品分析液。作为本发明的进一步改进，其操作步骤如下：a、提取：将0.2～0.4gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.2～0.3mol/L高氯酸调节pH至6～7，并将溶液混合均匀，然后20℃离心，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入60～70μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000～1100μL乙腈，混合均匀，然后20℃离心，取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4～5倍，膜过滤后得样品分析液。作为本发明的进一步改进，所述的步骤c中所述的流动相为乙腈：水=80～50：20。作为本发明的进一步改进，所述的步骤a中取上清液后，以相同条件再离心一次。作为本发明的进一步改进，所述的步骤c中稀释后，用0.22μm的有机相微孔滤膜进行过滤。本方法中选用分散液-液微萃取对目标成分进行提取，其中1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸为萃取剂、乙腈为分散剂。分散液-液微萃取(dispersiveliquid-liquidmicroextraction,DLLME)是2006年Assadi等首先提出的一种新的微萃取技术，具有操作简单、快速、试剂消耗少、回收率和富集倍数高，环境污染小等优点。其中，萃取剂选用的1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸为咪唑类离子液体。离子液体(IonicLiquids，ILs)是一种盐类，一般由较大的、不对称的有机阳离子和无机或有机阴离子构成，常见的阳离子类型有咪唑离子、吡啶离子、季铵离子、季鏻离子等，常见的阴离子类型有六氟磷酸根离子、四氟硼酸根离子、卤离子等。离子液体的熔点一般在100℃以下，其中熔点在25℃以下的离子液体，被称为室温离子液体。根据组成离子液体的阳离子类型的不同，可以将离子液体分为咪唑类、吡啶类、季铵盐类等。与普通有机试剂相比，离子液体具有许多独特的性质，如离子液体种类繁多，具有可设计性；可导电，具有良好的电化学性能；对多种有机物和无机物都具有良好的溶解性；本身具有良好的热稳定性和化学稳定性；几乎没有蒸汽压，难挥发等，所以常被认为是一种环境友好的绿色溶剂离子液体因其优越性能，在无机化学领域可以作为金属络合物反应的配体；在有机化学领域，可以用于催化有机反应或作为反应介质；在分析化学领域，可以代替有机试剂用于样品前处理过程，或作为流动相添加剂用于色谱分析过程等。现代分析方法方法的发展趋势是减少有毒、有害溶剂的使用，降低实验成本，在提高检测的灵敏度和选择性的同时，尽可能实现富集、提取和检测一体化。离子液体相对于其他常用有机溶剂来说，性质稳定，是一种环境友好型溶剂。本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，采用分散液-液微萃取技术对样品进行前处理，同时利用离子液体取代传统萃取剂，使样品在前处理过程更加环保并减少了有机试剂的使用量，且方法的准确度高、精密度高、重现性好，回收率高；样品前处理后再结合超高液相色谱，即可对液态奶中丁草胺和氟虫腈的农药残留进行定量检测，完善食品的安全监控手段，保证食品安全，避免消费者的健康受到损害，为我国乳制品行业质量安全提供技术支持。附图说明图1为丁草胺（a）、氟虫腈（b）标准溶液色谱图；图2为空白样品色谱图；图3为加标样品色谱图。具体实施方式实施例1本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.1gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.1mol/L高氯酸调节pH至5，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入50μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和800μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相，稀释至原体积的3倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=80：20。实施例2本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.5gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.5mol/L高氯酸调节pH至7，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入80μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1200μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的6倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=50：20。实施例3本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.2gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.2mol/L高氯酸调节pH至6，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入60μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=70：20。实施例4本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.4gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.3mol/L高氯酸调节pH至7，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入70μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1100μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的5倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=60：20。实施例5本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.3gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.25mol/L高氯酸调节pH至6.5，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入65μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1050μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4.5倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=65：20。实施例6本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法，其操作步骤如下：a、提取：将0.2gNaCl加入5.00mL液态奶中，用0.1mol/L高氯酸调节pH至6，涡旋1min，在30℃下超声振荡10min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，相同条件下在离心一次，取上清液；b、萃取：将步骤a所得的上清液中依次加入60μL1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000μL乙腈，涡旋1min，于20℃，10000r/min条件下离心10min，用微量进样器取下层溶液；c、稀释：将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的5倍，用0.22μm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液，其中流动相为乙腈：水=80：20；本实验选用的1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和乙腈为市售纯品，水为超纯水。将实施例6所得的样品分析液进行超高液相色谱检测，超高液相色谱条件：采用ZORBAXEclipseXDB-C182.1×150mm1.8μm色谱柱，流动相为乙腈：水=80：20，流速0.30mL/min；进样体积5μL，自动进样；柱温：25℃；波长紫外检测波长：230nm；参比波长：360nm；狭缝宽度：4nm。定量计算时，需要进行绘制标准曲线：在50mL离心管中准确量取5mL液态奶样品，分别加入氟虫腈、丁草胺50、100、250、500、1000μg/L。按上述步骤对各样品进行分散液液微萃取后，用微量进样器吸取30μL，用流动相稀释至150μL待进样。在最佳的实验条件下，从加标液态奶样品中萃取二种农药残留量并进行超高液相色谱UPLC测定，各浓度平行测定3次，以保留时间定性，以样品峰面积与标准峰面积比值定量，通过峰面积（A）与加标样品中二种农药残留的含量（C，μg/kg）制作工作曲线，结果见表1，由表1可知，相关系数r2分别为0.9988和0.9992。加标回收率及精密度：在50mL离心管中准确量取5mL液态奶样品，分别加入丁草胺、氟虫腈高、中、低3个浓度，配置成浓度分别为为了评价方法的准确性和精密性，制备3个加标水平（20.00、50.00和100.00μg/kg）的加标样品，日内精密度通过1天之内平行分析5次加标样品所得到回收率的RSD表示。日间精密度通过每天分析1次加标样品，连续分析3天所得回收率的RSD表示。由表2可见二种农药的回收率为92.2～103.6%，日内RSD为1.9～3.7%，日间RSD为2.1～4.8，日内及日间RSD均低于5%。